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猪戊型肝炎病毒ORF2-62的克隆、表达及间接ELISA方法的初步建立被引量：1: 2012年; 为了获得具有反应原性的重组蛋白,以该蛋白建立初步的间接ELISA检测方法。本研究通过RT-PCR从猪粪便中克隆了戊型肝炎病毒(HEV)ORF2与急性期血清反应的抗原决定簇基因片段,将该片段插入pET-32a表达载体,命名为pET32a-ORF2-62,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用1.0mmol/L IPTG进行诱导表达,通过Western-blotting检测其反应原性,并利用镍柱亲和层析纯化所获目的蛋白。结果,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量约为30 600,Western-blotting显示重组蛋白与HEV阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。经方阵滴定确定最佳包被浓度为7.7mg/L,血清最佳稀释比为1∶40。利用大肠杆菌表达的HEV重组蛋白建立了间接ELISA检测方法,此方法的建立为戊型肝炎早期诊断提供了一种快速简便的血清学诊断方法。; 王永霞郝成武马勋; 关键词：戊型肝炎病毒 ORF2 原核表达间接ELISA

戊型肝炎病毒及其感染诊断方法研究进展被引量：3: 2009年; 戊型肝炎(HE)是由肝炎病毒科(Hepeviridae)肝炎病毒属(Hepevirus)戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)所引起的一种传染病。在美国、日本等许多国家从患病猪分离得到的HEV与当地患HE病人分离出的HEV有着高度的同源性,因此对食源性戊型肝炎病毒感染的预防及控制具有重要意义。论文就近年来国内外对该病的实验室诊断方法,包括病毒的分离鉴定、免疫学诊断、分子生物学诊断等研究概况进行了综述。; 曹文兵马勋李岩李静唐思静; 关键词：戊型肝炎病毒

新疆地区羊、牛戊型肝炎血清流行病学调查被引量：8: 2009年; 采集新疆14个地区的羊血清673份和牛血清675份,应用双抗原夹心酶联免疫法（DS-ELISA）检测抗戊型肝炎病毒（HEV）IgG抗体,比较南北疆及不同年龄段牛、羊HEV抗体阳性率的差异。结果显示,所检测羊血清中HEV抗体阳性率为7.73%（52/673）;南、北疆羊HEV抗体阳性率分别为7.61%（15/197）和7.77%（37/476）,差异不显著（P〉0.05）。1岁以内（含1岁）、1~3岁（含3岁）、3岁以上羊的HEV抗体阳性率差异不显著（P〉0.05）;牛血清中HEV抗体阳性率为5.78%（39/675）,南、北疆牛HEV抗体阳性率分别为4.19%（7/167）和6.30%（32/508）,差异极显著（P〈0.01）。2岁以内（含2岁）、2~4岁（含4岁）、4岁以上牛的HEV抗体阳性率差异显著（P〈0.05）。表明新疆地区羊和牛存在HEV感染。; 曹文兵马勋李岩胡广东; 关键词：戊型肝炎病毒

戊型肝炎病毒流行病学研究进展被引量：9: 2010年; 戊型肝炎(HE)是由肝炎病毒科(hepeviridae)肝炎病毒属(hepevirus)戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)所引起的一种人兽共患传染病,主要经粪—口途径传播。对食源性戊型肝炎病毒感染的预防与控制、异种器官移植及猪源细胞的使用有重要意义。作者就该病近年的流行病概况、传播途径、动物宿主及人工感染试验进行了综述。; 王永霞郝成武马勋; 关键词：戊型肝炎流行病学

新疆奶牛戊型肝炎病毒RNA检测及序列分析被引量：5: 2010年; 从新疆两个奶牛场的戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）抗体检测阳性的奶牛中分别采集牛粪便或肛拭子样品,利用反转录套式聚合酶链反应（RT-nPCR）检测所采集样品中的HEV RNA,结果来自第一个奶牛场的7份牛粪便样品为阳性,阳性率11.67%,来自第二奶牛场的1份肛拭子样品为阳性,阳性率为3.23%。将PCR扩增产物克隆、测序并进行序列分析,结果表明,对应于HEV ORF2 189bp核苷酸序列的8个牛源HEV基因组扩增片段的同源性为96.3%-100.0%,应当属于相同的基因型; 它们与HEV 1、2、3和4型ORF2 189bp核苷酸平均同源性分别为78.5%-86.4%,81.7%-83.8%,79.1%-85.3%和84.3%-95.8%,与4型的同源性最高达93.2%-95.8%。基于这些已测序核酸片段绘制的基因进化树显示：本研究中的8株牛源HEV ORF2 189bp核苷酸序列与HEV 4型人源C5株、猪源swC3与swXJ株位于同一进化枝上,同属HEV基因4型,提示新疆奶牛中可能存在HEV感染,并且奶牛可能是人类HEV传染源中除猪之外的新宿主。; 胡广东马勋; 关键词：奶牛

新疆羊粪便戊型肝炎病毒RNA的检测与序列分析被引量：2: 2010年; 【目的】为了了解新疆地区羊群中是否存在戊型肝炎的感染,我们从戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)IgG检测阳性的新疆某羊场采集54份1-3岁的羊粪便,【方法】利用逆转录套式聚合酶链方法(RT-nPCR),检测HEVRNA,其中6份为阳性,阳性率11.11%。【结果】将PCR扩增产物克隆,测序并进行序列分析,结果表明,6株羊源HEV检测株在HEV ORF2 189bp 99.38%-100%,为同一基因型;与HEVⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型的同源性分别为78.67%-85.33%、81.33%-82.67%、78.67%-84.00%和84.67%-95.36%,与Ⅳ型最高同源性达94.04%-95.36%。以该189bp片段绘制进化树,发现与新疆牛源分离株、中国大陆猪源分离株(FJ610232)和中国大陆人源分离株(AJ272108)在同一分枝上,同属基因Ⅳ型;【结论】提示新疆羊群中可能存在HEV感染,并且羊可能是人类HEV传染源中除猪之外的新宿主。; 王永霞马勋; 关键词：戊型肝炎病毒基因型

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国家自然科学基金(30760012)