山西省自然科学基金(2010011043-2)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 河南华溪蟹金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2014年
- 目的制备小鼠抗河南华溪蟹金属硫蛋白(MT)单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法分别利用小泛素样修饰蛋白(SUMO)融合表达系统和碱性磷酸酶(phoA)分泌表达载体制备河南华溪蟹重组蛋白SUMO-MT和His-MT,以SUMO-MT为免疫抗原、His-MT为检测抗原,利用杂交瘤技术建立抗河南华溪蟹MT mAb杂交瘤细胞株。采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Western blot法、Dot-ELISA分析mAb的特异性。结果成功建立了2株稳定分泌抗MT蛋白的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为mAb-MT2和mAb-MT3,均属于IgG1亚类。腹水效价分别为1∶500 000、1∶1000 000,Western blot和Dot-ELISA结果证实2株mAb均能特异性识别重组MT和内源性MT。结论成功制备了具有较高特异性的河南华溪蟹MT mAb。
- 何永吉刘进平王兰
- 关键词：金属硫蛋白单克隆抗体
- 河南华溪蟹金属硫蛋白分泌型表达载体的构建、表达及纯化被引量：3
- 2014年
- 目的:构建河南华溪蟹金属硫蛋白(metallothionein,MT)分泌型表达载体并诱导其可溶表达。方法:采用基因重组技术,将河南华溪蟹MT基因亚克隆至碱性磷酸盐启动子(alkaline phosphatase promoter,phoA)分泌型原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过低磷酸盐诱导重组蛋白表达,经Ni2+螯合柱分离纯化后,利用紫外光谱扫描分析、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)及Western blotting检测鉴定重组MT。结果:phoA-MT分泌型表达载体构建成功,工程菌经低磷酸盐诱导后重组MT以可溶形式获得表达,紫外光谱扫描和Western blotting证实表达产物的正确性,SDS-PAGE分析其纯度较高,主要以单体和二聚体的形式存在,其分子质量分别约为7.5、15 kD。结论:成功实现了河南华溪蟹MT的重组表达。
- 刘进平何永吉王兰
- 关键词：金属硫蛋白
- 华溪蟹功能性重组金属硫蛋白的表达及抗血清制备被引量：3
- 2014年
- 采用SUMO融合表达系统表达河南华溪蟹金属硫蛋白(Metallothionein,MT),经Ni离子螯合柱分离纯化后,用SDS-PAGE、紫外光谱扫描鉴定,并对重组MT的金属结合及清除自由基能力进行了检测.同时,利用纯化的融合蛋白SUMO-MT免疫BALB/c小鼠制备抗血清,间接ELISA检测该抗血清的效价,Western blot和免疫组化染色检测其特异性.结果表明,河南华溪蟹MT以可溶形式获得表达,经金属螯合层析纯化后分析仍具有金属结合特性和清除羟自由基的生物学功能.免疫BALB/c小鼠后获得特异性的抗MT抗血清,该抗血清具有较高的效价和良好的特异性,可识别组织MT,用于免疫组化分析.
- 何永吉刘进平李颖君王兰
- 关键词：金属硫蛋白抗血清
