国家科技重大专项(2009ZX09301-009-BD26)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：韩骅付伟尹郸丹严学倩梁英民更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人IL-3基因原核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 目的:构建人IL-3基因原核表达载体pET32a-IL-3,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:通过佛波酯(TPA)和植物球血凝素(PHA)刺激人T淋巴细胞系Jurkat细胞,增加IL-3mRNA表达水平,提取mRNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,以Jurkat细胞cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到人IL-3基因,将其克隆入原核表达载体pET32a(+)中,将重组质粒转化入大肠杆菌宿主菌株BL21中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,并通过改变IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等条件最终实现蛋白的可溶性表达。表达产物用SDS-PAGE检测表达情况。结果:酶切鉴定和测序结果证明成功构建了原核表达载体pET32a-IL-3。SDS-PAGE检测结果证明实现了人IL-3基因在大肠杆菌中的可溶性表达。结论:成功构建了人IL-3基因的原核表达载体并在大肠杆菌中获得了良好的表达。
- 严学倩尹郸丹付伟韩骅梁英民
- 关键词：白细胞介素3造血干细胞原核表达
