转基因生物新品种培育专项(2009ZX08009-146B)
- 作品数：15 被引量：190H指数：8
- 相关作者：俞英张勤沈君叶朱士恩韦艺媛更多>>
- 相关机构：中国农业大学北京市畜牧兽医总站西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项引进国际先进农业科技计划云南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 乳房炎奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及PFGE分型研究被引量：20
- 2011年
- 作者针对临床及亚临床乳房炎奶牛乳汁中金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因进行检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因分型,比较2种类型乳房炎金黄色葡萄球菌分离株的差异。无菌法采集奶样,采用国际标准方法从中分离金黄色葡萄球菌,用多重PCR方法扩增nuc基因和mecA基因以确证金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。进一步用PCR方法检测SA的各种毒素基因(SEs、ETs、TSST-1和PVL基因等)。利用限制性内切酶SmaⅠ对SA基因组DNA进行酶切和PFGE分析,最后利用BioNumerics软件进行聚类分析。结果:19.3%(23/119)的临床乳房炎奶样和14.8%(26/176)的亚临床乳房炎奶样确定为金黄色葡萄球菌阳性样品,分别从中分离鉴定出43株和26株金黄色葡萄球菌,其中临床乳房炎分离株中有5株为mecA基因阳性。临床乳房炎奶牛奶样中检测到SA的SEA、SEB、SED、SEJ和PVL毒素基因,检出率分别为3.8%(1株)、11.5%(3株)、19.2%(5株)、7.7%(2株)和31.2%(10株);亚临床乳房炎奶牛乳样中仅检测到SA的SEA和PVL毒力基因,检出率分别为7.0%(3株)和84.1%(37株)。表明临床与亚临床乳房炎奶牛乳汁中SA菌株携带的毒素基因不一样,SEs可能是临床乳房炎菌株的重要致病基因,PVL可能是亚临床乳房炎菌株的重要致病基因。69株SA使用SmaⅠ酶切分型后,可分为7个大簇、50个基因型,来源相同的SA分型后大部分位于同一簇内。临床乳房炎奶牛乳汁中检测到MRSA菌株,PVL基因在亚临床乳房炎中的检出率为临床乳房炎的2.7倍。PFGE方法能较好的区分临床乳房炎和亚临床乳房炎的SA分离菌株。
- 王新韦艺媛张静周婷梁珍娟杨保伟席美丽夏效东孟江洪俞英
- 关键词：奶牛金黄色葡萄球菌MECA基因毒素基因PFGE分型
- 仔猪小肠黏膜上皮细胞体外分离培养及鉴定被引量：11
- 2011年
- 【目的】阐明产肠毒素大肠杆菌F18(ETEC F18)引发仔猪腹泻的机理,针对其候选基因FUT1的CDS区第307位点处的突变(G→A),建立3个仔猪小肠黏膜上皮细胞系(GG、GA和AA)。【方法】首先以胎鼠和仔猪为试验材料,确定小肠上皮细胞的最佳分离方法。采用XI型胶原酶和I型中性蛋白酶的联酶混合液,将胎鼠小肠组织机械剪碎后用联酶进行消化和直接将联酶灌注到仔猪小肠腔内消化的两种方法进行比较。针对仔猪小肠黏膜上皮细胞体外培养过程中成纤维细胞污染难以消除的问题,本研究采用局部画圈法逐步去除成纤维细胞。最后,用电镜和CK18免疫荧光染色对纯化后的原代仔猪小肠黏膜上皮细胞进行鉴定。【结果】两种小肠上皮细胞分离效率对比表明,后一种消化方式更为有效。进而取出生12 h内未吃初乳的大白仔猪,剖腹剪取其小肠段,使用联酶混合液灌注消化分离得到形态完整、容易贴壁生长的小肠绒毛细胞团。电镜和CK18免疫荧光染色结果均显示,小肠黏膜上皮细胞纯度达90%以上。经纯化处理,最后获得了FUT1基因型为GG和GA的两种小肠黏膜上皮细胞。仔猪原代小肠黏膜上皮细胞培养周期显示,7代前细胞生长状况良好,形态为典型的上皮细胞样,单层细胞呈铺路石排列,培养至第9代,细胞出现生长停滞、胞体空泡化等现象。【结论】最终获得了FUT1基因型为GG和GA的仔猪原代小肠黏膜上皮细胞。建立了仔猪小肠黏膜上皮细胞分离及培养方法,为后续的细胞建系工作奠定了良好的基础。
- 周传丽刘铮铸俞英张勤
- 关键词：仔猪小肠黏膜上皮细胞体外分离培养细胞鉴定
- 转抗仔猪腹泻候选基因FUT1克隆猪的效率分析及分子鉴定被引量：2
- 2014年
- 产肠毒素大肠杆菌F18是引起仔猪断奶后腹泻的主要病原菌,α1-岩藻糖转移酶(FUT1)基因则是大肠杆菌F18与仔猪小肠黏膜黏附与否的重要候选基因,其有利基因型(不黏附)为AA。本研究前期利用体细胞核移植技术获得转AA型FUT1基因克隆猪15头,其中3头存活至断奶。为初步分析转基因克隆猪受胎率低、存活率低的原因以及鉴定转FUT1阳性克隆猪,本研究首先对代孕母猪的受胎率、妊娠期、产仔数以及转基因克隆仔猪初生重等进行统计分析,并利用PCR扩增产物直接测序方法对获得的15头转基因克隆猪进行分子鉴定。结果表明:相比自然生产母猪,转基因克隆代孕母猪受胎率较低、妊娠期较长、产仔率及活仔率均较低。15头转基因克隆猪中13头为FUT1转基因阳性克隆猪,1头存活至断奶。此外还发现,转基因阳性仔猪和阴性仔猪初生重差异显著(P=0.013)。研究结果为通过转基因以及克隆等技术手段生产及培育抗仔猪腹泻猪提供了数据参考。
- 董易春刘铮铸周传丽潘登科张勤俞英
- 关键词：转基因克隆猪胚胎移植分子鉴定
- 奶牛乳房炎致病型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定被引量：4
- 2011年
- 为探究引起奶牛乳房炎的耐药性致病菌,本研究针对西安地区显性乳房炎奶样中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行系统研究。采用常规细菌学鉴定法对34头(次)荷斯坦牛76个乳区152份奶样的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)进行了分离培养,共检出92株阳性菌株,检出率为60.5%;对其进行S.aureus致病基因nuc的特异性PCR检测,共检出28株含nuc基因的阳性菌株,检出率为30.4%;进一步针对MRSA耐药基因mecA进行特异性PCR扩增,共检出5株MRSA,检出率为17.9%。研究结果为MRSA耐药菌的有效检测及奶牛乳房炎的治疗提供了指导。
- 韦艺媛王新郝斐俞英
- 关键词：奶牛乳房炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌细菌培养MECA
- 滇陆猪扩繁母猪产仔性能调查分析被引量：3
- 2010年
- 滇陆猪是我国自主培育的含太湖猪血统的新品种猪。为了解滇陆猪在农户中扩繁饲养的效果,为今后示范推广工作提供参考依据。本研究通过实地走访调查,拍摄云南省陆良县8个滇陆猪扩繁场的繁殖记录,对扩繁母猪产仔数、产活仔数、死胎数、木乃伊数等进行系统整理和分析,对影响扩繁母猪产仔数的影响因素进行分析。结果表明,滇陆母猪的总产仔数和产活仔数分别比二元杂交母猪(长大、大长)多2.0头和2.3头(P<0.05);场次和胎次对滇陆猪总产仔数、产活仔数影响极显著(P<0.01),场次对死胎数影响显著(P<0.05),场次和胎次对木乃伊数影响显著(P<0.05)。总体来说,农户扩繁饲养的滇陆猪表现出了较优的产仔性能,扩繁场的疾病防控工作做得较好,但不同猪场之间的饲养管理水平差距大。研究调查分析了滇陆猪产仔性能及影响因素,为其推广利用提供重要依据。
- 沈君叶卢建福鲁绍雄连林生朱士恩俞英
- 关键词：产仔数
- 鸡L-FABP基因全长cDNA克隆表达及与杂种鸡脂肪沉积的关系被引量：8
- 2011年
- 肝脏脂肪酸结合蛋白(L-FABP)与脂肪运输及沉积关系密切。文章以8周龄丝羽乌鸡(CC)、农大褐蛋鸡(DD)及其正反杂交组合鸡(CD和DC)为试验材料,利用mRNA差异显示技术,在肝脏组织中获得一条阳性差异表达片段。通过片段回收、测序及序列比对发现,该差异表达片段为鸡L-FABP基因的全长cDNA编码序列(NCBI登录号:AY321365)。Northern杂交和半定量RT-PCR结果显示,该基因在正反杂交组合CD及DC的肝脏组织中表达量均明显高于亲本CC和DD,与杂种鸡的高腹脂及较大肌间脂宽表型趋势相同。鉴于L-FABP基因的高表达可能导致杂种鸡的脂肪沉积高于亲本,有必要针对鸡L-FABP基因进行深入的功能研究。
- 俞英王栋孙东晓徐桂云李俊英张沅
- 关键词：L-FABP脂肪性状
- 奶牛乳房炎检测方法与分子抗病育种研究进展被引量：1
- 2011年
- 奶牛乳房炎即奶牛乳腺发生炎症反应,是一种常见的奶牛疾病,对乳业造成的经济损失极大。本文通过分析其致病原因,对奶牛乳房炎的检测方法做出总结,在分析传统检测方法的基础上,介绍最新的检测方法,说明乳房炎检测逐渐向低成本高效率的趋势发展。另外还以乳房炎抗性候选基因和表观遗传标记为出发点,对乳房炎发生发展的预测方法做了介绍,并就乳房炎研究方向针对奶牛本身的分子抗病育种方向发展的趋势进行了展望。
- 韦艺媛俞英
- 关键词：奶牛乳房炎致病菌
- 用小鼠模型模拟仔猪腹泻的可行性探索被引量：3
- 2012年
- 仔猪腹泻给养猪业造成了很大的经济损失,若能用模式动物模拟这一现象,可以更好地研究其遗传机理,以便为抗病育种提供理论依据。本研究以模式动物-小鼠为实验动物,进行大肠杆菌F4和F18毒株腹腔注射攻毒实验和细菌与小肠黏膜上皮细胞的粘附实验。结果表明:虽然攻毒后的小鼠有腹泻现象,但在体外黏附实验中未观察到细菌和小鼠小肠黏膜上皮细胞的粘附发生,说明腹腔注射攻毒条件下小鼠细菌性腹泻的发生机理不是由于细菌和小鼠小肠黏膜上皮细胞的粘附所导致的,与仔猪大肠杆菌性腹泻的发生机理不同,因而用腹腔注射攻毒小鼠来模拟仔猪细菌性腹泻是不可行的。
- 冯利霞王继英罗艳茹丁汝佳张勤
- 关键词：攻毒大肠杆菌小鼠模型仔猪腹泻
- 母猪繁殖力性状影响因素分析及遗传参数估计被引量：49
- 2012年
- 母猪繁殖力是影响种猪场经济效益的重要因素。文章对纯种大白猪、长白猪、杜洛克猪的8491窝产仔记录进行统计分析,建立固定效应模型对总产仔数、健仔数、初生窝重、弱仔数、死胎数、木乃伊胎数和畸形胎数共7个繁殖性状进行最小二乘分析,分析胎次、配种季节、品种对母猪繁殖性能的影响,同时比较了纯繁和杂交的效果。利用动物模型REML(约束最大似然)方法估计繁殖性状的遗传力和遗传相关。结果表明,胎次、配种季节和品种对总产仔数、健仔数、初生窝重影响极显著(P<0.001),胎次和品种对弱仔数影响极显著(P<0.001),但配种季节对弱仔数影响不显著。胎次对死胎数影响显著(P<0.05),而配种季节和品种对死胎数影响不显著,胎次、配种季节和品种对木乃伊胎、畸形胎数影响不显著。长白♂×大白♀交配组合具有最高的总产仔数、健仔数和初生窝重。繁殖性状遗传力估计结果显示,长白猪初生窝重的遗传力最高,为0.227。其余性状遗传力均在0.2以下,为低遗传力性状。3个品种母猪的健仔数与初生窝重、总产仔数与健仔数之间的遗传相关达0.96以上。研究结果为降低非传染性因素造成的种母猪产仔数低的问题以及种猪场对母猪繁殖力的选育提高提供了参考数据和理论依据。
- 沈君叶俞英王茜马裴裴朱士恩史文清王雅春张勤
- 关键词：母猪繁殖性状影响因素
- 中国荷斯坦牛SCC变化规律及其与产奶性状之间的关系被引量：36
- 2010年
- 本研究旨在分析北京地区中国荷斯坦牛测定日体细胞数的变化规律及其与产奶性状之间的关系,推断适于中国荷斯坦牛隐性乳房炎的判定标准。通过对北京地区76个荷斯坦牛牛场63510头母牛的DHI数据进行整理筛选,按每毫升奶中体细胞数(SCC)情况,用SAS8.2将其划分为12个子数据集及8个累积数据集。首先用Excel对12个子数据集的SCC和产奶性状作图,然后用Matlab的Spline函数对12个子数据集及8个累积数据集做泌乳期的SCC曲线。除乳脂率外,12个子数据集的SCC均值与各产奶性状均值的变化趋势相关显著,随着SCC的增长,产奶量、乳蛋白量和乳脂量逐渐下降,乳蛋白率逐渐上升(P<0.001)。累计数据集作图发现,SCC<20万与SCC<10万的差异较大,而SCC<50万与SCC<40万差异较小。结果表明,为有效降低隐性乳房炎发病率,北京地区中国荷斯坦牛牛群宜以10万～50万SCC作为隐性乳房炎划分标准。
- 马裴裴俞英张沅张勤王雅春孙东晓张毅
- 关键词：体细胞数产奶性状隐性乳房炎
