国家科技重大专项(2004BA519A40)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：肖荣海董俊杨云庆钟金栋周晓黎更多>>
- 相关机构：云南出入境检验检疫局昆明理工大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪水泡病病毒VP1基因的克隆和表达被引量：1
- 2006年
- 以猪水泡病病毒RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了849bp的VP1基因,通过T-A克隆技术,将VP1基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中,构建SVDVVP1基因克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,经测序鉴定,筛选获得VP1基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了猪水泡病病毒VP1基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP1蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.002%的L-阿拉伯醛糖进行诱导,5h后表达可达到高峰,表达蛋白为融合蛋白,质量约47.13kDa,表达产量约占菌体总蛋白的16%。Westernblotting检测表明,诱导的蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。融合蛋白中含有猪水泡病病毒VP1蛋白抗原,为应用该表达蛋白抗原制备SVD免疫血清学诊断试剂和新型疫苗构建奠定基础。
- 钟金栋花群义肖荣海夏雪山杨云庆周晓黎董俊邓祖洪
- 关键词：猪水泡病病毒VP1克隆
