国家高技术研究发展计划(2007AA02Z212)
- 作品数：14 被引量：56H指数：5
- 相关作者：路福平杜连祥黎明成堃陈坤更多>>
- 相关机构：天津科技大学潍坊医学院南京林业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技基础条件平台建设计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程理学农业科学更多>>
- 嗜碱芽孢杆菌电转化方法的优化被引量：1
- 2010年
- 优化了嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)TCCC11263的电转化条件,电转化条件包括细胞生长状态、电击场强、电击缓冲液组成、质粒DNA浓度。建立了一种适用于B.alcalophilus TCCC11263的电转化体系。结果为:B.alcalophilus TCCC11263培养至OD600为1.0时,电转化效率最高,DNA的转化子数达0.14×103个转化子/μg;用含0.5mol山梨醇、0.5mol甘露醇、10%甘油的电击缓冲液洗涤细胞,在场强21kV/cm、电阻200Ω,电容25μF的电击条件下,加入0.7μg质粒DNA,电转化效率达到1.5×103个转化子/μgDNA。
- 成堃路福平黎明梁晓梅
- 关键词：电转化嗜碱芽孢杆菌
- 碱性蛋白酶PB92在枯草芽孢杆菌中高效转化方法的建立及其分泌表达被引量：2
- 2009年
- 枯草芽孢杆菌转换效率低一直制约着该菌基因改造技术的应用,本研究比较了化学法和高渗电转化法对枯草芽孢杆菌转化率的影响,发现高渗电转化法的转化效率较高。从Bacillus alcalophillus PB92中扩增出碱性蛋白酶基因Mapr,构建成重组分泌型表达载体pWB980-Mapr,碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌DB104中得到表达。SDS-PAGE分析,重组蛋白酶的分子量为28000。pWB980-Mapr在枯草芽孢杆菌中表达的酶活为1563 U/ml。
- 孙同毅邵建新高媛媛陈丽梅高志芹林伟平路福平
- 关键词：碱性蛋白酶枯草芽孢杆菌
- 枯草芽胞杆菌突变株ZC-7中性蛋白酶催化区域氨基酸突变导致其活力提高
- 2009年
- 目的:探讨枯草芽胞杆菌突变株ZC-7高产中性蛋白酶的原因。方法:用PCR方法分别扩增突变株ZC-7与出发菌株枯草芽胞杆菌AS1.398产中性蛋白酶的编码基因,测序比较二者基因的不同;在CPHmodels Server网站进行氨基酸序列分析,模拟突变前后中性蛋白酶的二级结构。结果:对比结果显示成熟肽中有5个氨基酸位点发生突变,其中3个位于酶的催化区域内;从预测的二级结构模型上可以看到突变位点所处区域的折叠结构发生细微变化。结论:先前研究中发现枯草芽胞杆菌AS1.398和突变株ZC-7发酵液中的酶蛋白含量基本相同,因此推测高产的原因不是酶量的增加,而是突变的氨基酸使酶与底物结合的部位更加适合催化水解反应,从而提高其比活力。
- 王建玲赵丛杜连祥
- 关键词：枯草芽胞杆菌中性蛋白酶基因克隆
- 嗜碱芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶基因启动子的克隆及应用被引量：2
- 2008年
- 利用TAIL-PCR方法从嗜碱芽孢杆菌PB92基因组中扩增出碱性蛋白酶基因上游启动子活性片段,测序分析后登录GenBank(EU130686)。此序列具有多个启动子特征区域,且在-538～-370 bp和-275～-128 bp两个区域存在反向读码框。对启动子片段进行功能缺失的分析结果表明,TSS上游105 bp片段具有明显启动子活性,但以长为414 bp～619 bp时活性更为显著。此外,对PB92碱性蛋白酶的信号肽分析结果表明,此信号肽具有典型分泌型(Sec-type)信号肽结构。将PB92碱性蛋白酶基因启动子和信号肽序列克隆入pBE2,构建成表达载体pBEAC,并以其为载体实现了植物甜蛋白monellin基因在枯草芽孢杆菌1A751中的高效表达。
- 陈坤黎明成堃杜连祥张同存路福平
- 关键词：TAIL-PCR信号肽
- 漆酶/木聚糖酶体系与重组木聚糖酶对OCC浆处理的比较被引量：1
- 2009年
- 采用漆酶/木聚糖酶体系(LXS)和重组木聚糖酶(X)对旧瓦楞箱纸板浆进行处理,以改善浆料打浆性能、滤水性能和强度。结果表明,经过LXS和X处理,浆料的打浆性能得到改善;在相同打浆度时两种酶处理浆强度高于原浆。比较两种酶处理对打浆性能的影响,则LXS优于X,LXS处理浆与原浆达到相同打浆度56°SR时,可以节省25%的打浆能耗。此外两种酶处理都能改善纸浆的滤水性能,在酶用量10 IU/g时,LXS和X处理浆与原浆相比分别降低5.6°SR和9.2°SR。两种酶处理后浆料中细小纤维含量明显减少,X处理浆中更少。对于改善纸浆的滤水性能而言,则X处理更佳。通过酶处理浆纤维质量分析、自由基浓度测定以及纤维素结晶度的测定,从理论上解释了LXS和X处理能改善纸浆的滤水性能和物理强度的原因。
- 尤纪雪连海兰周楫安鑫南欧阳嘉
- 关键词：打浆性能滤水性能
- 赖氨酸-尸胺反向转运蛋白cadB基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化被引量：1
- 2012年
- 旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力,将CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中,与LDC共表达,在谷氨酸棒杆菌合成尸胺的同时,帮助尸胺转运至细胞外,解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物L-赖氨酸,但不含ldc和cadB基因,因而不能够直接合成尸胺。从E.coliK12中克隆出赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因,与绿色荧光蛋白基因gfp融合构建成融合表达载体pXBG,并转化至谷氨酸棒杆菌进行诱导表达,结果表明表达的CadB蛋白可以正确的定位于谷氨酸棒杆菌的细胞膜上。将基因cadB连接到含有赖氨酸脱羧酶基因的pXMJ19-ldc上,构建成能够共表达赖氨酸脱羧酶和赖氨酸-尸胺反向转运蛋白的重组质粒pXLB,并转化到谷氨酸棒杆菌中。
- 黄云雁黎明刘萌孙昕周丽颖路福平
- 关键词：谷氨酸棒杆菌共表达
- 嗜热脂肪芽孢杆菌高温中性蛋白酶在枯草芽孢杆菌中的表达、纯化及其酶学性质的研究被引量：5
- 2008年
- 本文中嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)的高温中性蛋白酶基因在sacB基因启动子的调控下,以蛋白酶自身或sacB基因的序列为信号肽,分别实现了在枯草芽孢杆菌DB104中的高效表达.表达产物经纯化后,酶的比活力可达16530U/mg,纯化倍数达到3.8倍,分子量约为35kD.对酶学性质的研究结果表明,此酶的最适反应温度为65℃,最适作用pH为7.5,在65℃下反应1h后,仍可保留约80%的活力.
- 张敏赵丛杜连祥路福平高晨
- 关键词：枯草芽孢杆菌高温中性蛋白酶纯化酶学性质
- 一株产碱性蛋白酶的嗜碱芽孢杆菌的分离和鉴定被引量：4
- 2008年
- 从天津塘沽盐碱土壤中分离一株产碱性蛋白酶的嗜碱芽孢杆菌HAP，并对其进行了表型分类和16S rDNA序列分析。结果表明，HAP是一株革兰氏阳性芽孢杆菌，菌体大小（0．7—0．9）μm×（2-3）μm，该菌可利用木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露醇，发酵型糖代谢产酸；可以水解酪素、淀粉，但不能水解酪氨酸；能够利用柠檬酸盐；其酶活力为1．22×10^4U／mL。结合系统发育学分析将HAP鉴定为嗜碱芽孢杆菌（Bacillus alcalophilus）。
- 孙同毅邵伟光高志芹林维平路福平于小勇王新斌
- 关键词：嗜碱芽孢杆菌RDNA
- N^＋注入中性蛋白酶高产菌株诱变选育的研究被引量：7
- 2008年
- 利用低能N+注入技术对产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)进行诱变选育,以提高该菌株的产酶能力.试验结果表明,菌株的存活率曲线是典型的马鞍型"剂量-效应曲线,在注入剂量为(30~50)×1014ions·cm-2的区域内具有高的正突变率.在注入能量为30keV、注入剂量为50×1014 ions·cm-2的条件下,经过筛选最终获得1株遗传稳定性良好的高产菌株NP131,其所产中性蛋白酶活力稳定在15230 U·mL-1左右,较出发菌株提高了71.2%.比较突变菌株NP131与出发菌株的产酶曲线,发现2条曲线的变化规律一致.说明离子注入技术是一种比较理想的微生物菌种选育方法.
- 张敏赵丛路福平蔡兴旺杜连祥
- 关键词：离子注入中性蛋白酶诱变选育
- 两种漆酶/木聚糖酶体系降解木质素能力的比较被引量：3
- 2009年
- 通过白腐菌合成的(LXS)与复配的(L+X)漆酶/木聚糖酶体系降解木质素能力的比较表明,LXS具有较强的降解木质素能力。在酶用量10 IU/g时,与L+X相比,LXS酶处理浆的卡伯值低1.1个单位;酶处理液吸光度高20.6%。4种酶(体系)处理结果的比较表明,L+X降解木质素的能力比LXS差,也无法与漆酶/介体体系(LMS)相比。对马尾松浆和桉木浆处理结果的分析,证明了LXS具有与LMS相同的较强降解木质素的能力。用不同酶活比的LXS处理浆料时,发现漆酶与木聚糖酶酶活比越小,酶处理液的吸光度越大,酶处理浆的卡伯值越低,脱木素能力越强。对酶处理后浆料强度和结晶度测定,证明LXS、LMS和L+X对纤维没有任何损伤。
- 尤纪雪王玉秀童国林欧阳嘉
- 关键词：木质素
