北京市自然科学基金(7072063)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：高金明方福德郭子健蒋磊冯起平更多>>
- 相关机构：北京协和医院中国医学科学院中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京协和医院青年科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 金黄色葡萄球菌分泌趋化抑制蛋白与C5aR、C5L2的相互作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨金黄色葡萄球菌分泌的趋化抑制蛋白(CHIPs)与G蛋白偶联受体(GPCR)C5a受体(C5aR)或促酰化蛋白受体(C5L2))的相互作用。方法将纯化的CHIPs蛋白分别与表达C5aR、C5L2、CXC趋化因子受体3(CXCR3)的人肾胚胎上皮细胞293T分别孵育,用Western blot检测结合情况。结果CHIPs蛋白与C5aR相结合,与C5L2和CXCR3无明显结合。结论C5aR是CHIPs蛋白的受体,提示C5L2与C5aR在和CHIPs的结合作用上存在明显差异。
- 刘振嘉杜冠华宫丽丽高金明
- 关键词：CHIPSC5AR相互作用
- 酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶活性的调节被引量：2
- 2007年
- 目的研究酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶(TPST)1和TPST2的调节作用。方法以人cDNA为模板,采用聚合酶链反应方法扩增人TPST1和TPST2基因野生型的全长cDNA序列,并融合入人IgG1的Fc编码区域;采用定点突变方法将TPST1和TPST2蛋白中可硫化的酪氨酸突变为苯丙氨酸。针对TPST1(259～275位核苷酸)和TPST2(73～94位核苷酸)基因,分别构建小干扰RNA(shRNA)1和shRNA2重组质粒。测定所有构建质粒开放读框序列。证实序列正确后,将上述质粒分别转染人肾胚胎上皮细胞(HEK)293T。24h后将细胞分成3份:1份用于35S-蛋氨酸/半胱氨酸或35S-亚硫酸钠标记,48h后再进行免疫沉淀反应;1份用于125I标记配基结合;1份用于流式细胞仪检测受体的表达水平。结果TPST1326位和TPST2325位酪氨酸在翻译后被硫化修饰,这一翻译后修饰被特异性的硫化抑制剂shRNA1和shRNA2及非特异性的硫化抑制剂NaClO3显著抑制。shRNA1和shRNA2可显著抑制补体3a和5a受体的硫化,并进一步降低这两种受体与特异性配基的结合效率。结论TPST1和TPST2翻译后受酪氨酸硫化修饰的调节,硫化抑制剂shRNA可以显著抑制TPST的活性,并进一步抑制补体3a和5a受体结合其特异性配基的作用。
- 高金明冯起平左瑾方福德蒋磊郭子健
- 关键词：硫化酪氨酸
