国家自然科学基金(30270699)
- 作品数：13 被引量：41H指数：4
- 相关作者：周国民佘振珏万瑾肖虹蕾郑华更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育发展基金会“曙光计划”项目国家重点基础研究发展计划更多>>
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- 氧环境对血管内皮生长因子、色素上皮衍生因子的影响及其与血管发育的关系被引量：2
- 2006年
- 目的：研究视网膜发育过程中血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)所起的调节作用及其机制。方法：C57BL/6J 小鼠从出生后7～12 d 饲养于75%氧环境,分别用抗 VEGF、抗 PEDF 和抗 CD31抗体作免疫组织化学标记视网膜切片。结果：持续处于高氧环境时,VEGF 表达处于低水平而 PEDF 快速上升,血管生长减缓。高氧处理5 d 后回到普通环境,VEGF 的表达迅速上升而 PEDF 却逐渐减少,出现了一过性的血管快速增长现象。结论：氧含量变化可调节 VEGF 和 PEDF 表达,参与视网膜血管发育。
- 俞亦龄刘坤万瑾郑华肖红蕾佘振珏周国民
- 关键词：血管内皮生长因子色素上皮衍生因子视网膜血管发育
- 大鼠Mlüler细胞的体外培养及免疫组织化学鉴定被引量：6
- 2005年
- 王芳赛音.贺西格佘振珏肖虹蕾周国民
- 关键词：MÜLLER细胞体外培养免疫组织胶质细胞
- 视网膜神经血管发育及其相互影响研究进展被引量：4
- 2006年
- 视网膜神经和血管分别按照各自的时间和空间顺序发育。视网膜血管发育可受到各种因素的影响,其中血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)是目前发现功能最强的眼内血管新生促进因子和抑制因子,而视网膜中的星形胶质细胞和Müller细胞则可以影响血管的生长发育。视网膜神经和血管的发育过程存在相互联系。
- 俞亦龄周国民
- 关键词：视网膜神经血管发育色素上皮衍生因子MÜLLER细胞星形胶质细胞血管新生
- 阻断神经生长因子信号部分抑制雌二醇对恒河猴视网膜血管内皮细胞的作用被引量：6
- 2004年
- 目的 研究神经生长因子 (NGF)信号系统在雌激素调控视网膜血管内皮细胞中的作用。 方法 选用恒河猴视网膜 脉络膜血管内皮细胞系RF 6A ,RT PCR检测雌激素受体 (estrogenreceptor,ER)、NGF及其受体在视网膜血管内皮细胞中的表达。分别观察雌二醇 (estradiol,E2 )、NGF及VEGF、EGF、BDNF等对血管内皮细胞活力(MTT法 )的作用。用流式细胞术 细胞周期法检测E2 、NCF及E2 与K2 5 2a共同处理组的凋亡率。NGF抗体和选择性TrkA拮抗剂K2 5 2a研究对上述作用的阻断效应。同样的分组进行细胞划痕修复实验。 96孔板AngioMatrix胶上观察E2 及NGF对RF 6A内皮细胞管腔形成能力的影响。 结果 RF 6A在细胞外基质胶上可形成管腔样结构。RT PCR检测到ER α、NGF及NGF受体TrkA的mRNA。 1nmol L～ 1 0 0nmol LE2 可以剂量依赖性的增强细胞活力及单层细胞的划痕修复能力 ,其增强作用可部分被NGF抗体及 1 0 0nmol L的K2 5 2a选择性阻断。凋亡率检测显示各组凋亡率相近。E2 可促进RF 6A形成管腔 ,但不能被NGF抗体、TrkA阻断。 结论 除VEGF外 ,E2 还可通过NGF信号系统对视网膜血管内皮细胞活力、划痕修复起促进作用。但结果提示 ,阻断NGF信号系统不影响E2 促RF 6A形成管腔的作用。
- 胡宝洋刘坤万瑾龚宏华佘振珏肖虹蕾周国民
- 关键词：神经生长因子视网膜血管内皮细胞管腔形成恒河猴
- 大鼠视网膜内髓鞘形成模型的建立与研究被引量：2
- 2006年
- 目的研究体外培养的大鼠纹状体神经干细胞在植入同种视网膜后,向少突胶质细胞分化并产生髓鞘的过程,观察髓鞘形成对视网膜结构的可能影响,建立一种中枢神经髓鞘体内发育的新模型。方法将体外传代培养的胚胎纹状体神经干细胞植入新生大鼠的玻璃体腔内,在移植后不同时期观察视网膜内髓鞘的出现部位以及扩展趋势,利用不同染色方法对标本进行检验分析,利用透射电镜进行超微结构观察。结果移植细胞4周后部分视网膜内开始出现成束髓鞘,只分布于神经纤维层。髓鞘束出现的比例、分布面积和形态变化与移植后动物的存活时间相关。电镜观察可见节细胞轴突外包绕有结构正常的中枢神经样髓鞘。较厚的髓鞘束对视网膜节细胞的分布产生一定影响。结论大鼠纹状体神经干细胞可在同种视网膜内向成熟少突胶质细胞分化,视网膜神经纤维层具有促使髓鞘形成的作用;本实验可能为研究少突胶质细胞分化及髓鞘生成机制提供新的在体模型。
- 郑华万瑾刘坤佘振珏肖虹蕾俞彰周国民
- 关键词：细胞培养视网膜髓鞘电镜
- N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜感光细胞损伤模型中Müller细胞增殖和细胞因子分泌的变化被引量：3
- 2007年
- 目的:建立N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N nitrosourea,MNU)损伤视网膜的模型,研究视网膜神经元凋亡对Müller细胞生物学特性的影响及神经营养因子的表达变化。方法:腹腔注射MNU建立视网膜损伤模型,免疫荧光染色方法研究感光细胞缺失对Müller细胞的生物学特性的影响,并检测主要神经营养因子表达的变化。结果:TUNEL法显示,腹腔注射MNU后2 d,视网膜外核层细胞凋亡现象明显。核增殖抗原(PCNA)及细胞周期素CyclinD_1的表达明显增高。与此同时,Müller细胞也开始表达神经干细胞抗原巢蛋白(nestin);RT-PCR显示胰岛素样生长因子(IGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达均升高。结论:在视网膜受到损伤时,Müller细胞增殖、去分化呈现出干细胞的特性。而视网膜中IGF、bFGF和HGF等细胞因子的表达明显增高,提示视网膜损伤后可能通过大量分泌细胞生长因子,促进Müller细胞的增殖。
- 王芳万瑾肖虹蕾余振珏周国民
- 关键词：N-甲基-N-亚硝脲MÜLLER细胞成纤维细胞生长因子肝细胞生长因子
- 视网膜细胞培养上清液对骨髓基质细胞的诱导分化作用被引量：2
- 2006年
- 目的探讨视网膜细胞培养上清液对骨髓基质细胞(BMSCs)的诱导分化作用。方法原代培养胚龄17d(E17)及生后3d(P3)SD大鼠的视网膜细胞,分别收集培养上清液,过滤后与DMEM按2:3混合,用此混合液诱导BMSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,对诱导后的细胞进行神经丝蛋白(NF)、胶质源性纤维酸性蛋白(GFAP)及视网膜特异性标记物进行免疫化学染色,统计分析阳性细胞数;再用RT-PCR进一步检测诱导结果。结果E17和P3细胞上清液均能诱导BMSCs表达NF[(10.35±2.66)%,(10.64±3.94)%]和GFAP[(27.86±7.97)%,(24.38±5.80)%],但只有P3细胞上清液诱导的BMSCs表达视蛋白(opsin),同时RT-PCR也检测到视细胞发育调节转录因子Crx mRNA的表达。结论视网膜细胞培养上清液可以诱导BMSCs向神经元、胶质细胞与视细胞分化。
- 万瑾胡宝洋刘坤郑华肖虹蕾佘振珏周国民
- 关键词：骨髓基质细胞视网膜诱导分化
- 大鼠胚胎视网膜祖细胞分离培养及其分化特性被引量：3
- 2005年
- 目的:建立大鼠胚胎视网膜祖细胞体外培养方法并观察其分化特性。方法:取孕18d大鼠胚胎,用无血清培养技术扩增视网膜祖细胞;用免疫细胞化学、扫描电镜与透射电镜技术对祖细胞的特性及诱导分化的细胞类型进行鉴定。结果:从胚胎大鼠视网膜神经部分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞球能表达Nestin并具有掺入BrdU的能力。诱导分化后的细胞表达,其中,Thy1.1+细胞最多,Opsin+细胞次之,GS+细胞较少,PKC+细胞少,Syntaxin+及Peripherin+细胞极少,不表达CalbindinD28K。结论:从胚胎大鼠分离的细胞具有自我增殖能力和多向分化潜能,属于视网膜祖细胞;诱导分化产生5种视网膜细胞,以节细胞最多,未见水平细胞。
- 李艳佘振珏周国民
- 关键词：大鼠胚胎细胞分离培养CALBINDIN胚胎大鼠视网膜神经
- 双荧光逆向追踪法研究大鼠视网膜节细胞的中枢投射被引量：6
- 2006年
- 目的：观察向上丘投射的大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)在视网膜内的分布、密度及细胞类型上的差异。方法：将 DiI 与荧光金(FG)注射入 SD 大鼠的同侧和(或)对侧上丘,不同时相荧光显微镜下观察两种荧光标记 RGCs 的分布情况。结果：视网膜与视神经内均可见荧光标记；视网膜内标记 RGCs 的数目随时间延长略有增加。DiI 与 FG 的标记效率无明显差异；RGCs 大多数为对侧投射；视网膜颞背侧区域可见双侧投射细胞；视网膜颞腹侧周边区集中存在同侧投射细胞,多数胞体较大；视网膜其它区域可见零星同侧投射细胞。结论：DiI 与 FG 可高效率逆行标记 RGCs 及部分突起；SD 大鼠视网膜内并存着向对侧、双侧及同侧脑区投射的 RGCs,后二者数量较少,分布局限；同侧投射以大胞体细胞为多。
- 郑华万瑾郑瑾韩晓洁俞亦龄肖虹蕾佘振珏周国民
- 关键词：视网膜神经节细胞荧光金逆行追踪
- 视网膜祖细胞干细胞特性及移植入视网膜后的研究被引量：6
- 2006年
- 目的：研究视网膜祖细胞的干细胞特性及移植入视网膜后的存活和迁移。方法：体外培养胎龄18d 大鼠的视网膜细胞,用 RT-PCR、细胞免疫荧光方法鉴定其增殖分化；成年 SD 大鼠腹腔注射 N-甲基-N-亚硝基脲形成视网膜感光细胞退化的动物模型,培养的视网膜祖细胞用 CM-Di(?) 标记后,移植入模型鼠的玻璃体腔。结果：视网膜祖细胞体外表达中间神经丝蛋白 nestin；表达 Flk-1、Pax6及 Notchl 的 mRNA；能掺入 BrdU；分化后表达视网膜各类细胞特异性蛋白；移植后在实验组大鼠视网膜能存活及迁移,而在对照组中仅聚集在玻璃体腔。结论：视网膜祖细胞具有干细胞特性,移植入受损伤视网膜后,能存活、整合及迁移。
- 万瑾郑华俞亦龄佘振珏肖虹蕾周国民
- 关键词：干细胞细胞移植视网膜细胞存活细胞运动
