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永生化人肝细胞系的建立及其鉴定被引量：1: 2009年; 目的建立永生化的人肝细胞系，为生物人工肝、肝细胞移植、体外药物代谢等提供细胞模型。方法应用胶原酶等四步灌流法分离获得原代人肝细胞，以含有SV40大T抗原（SV40LT）的重组反转录病毒对原代人肝细胞进行永生化，并对永生化人肝细胞进行生物学特性鉴定。结果原代人肝细胞经含有SV40LT的重组反转录病毒感染3～4周后，获得2株永生化人肝细胞系，分别命名为HepLi2和HepLi3，永生化人肝细胞在相差显微镜下具有典型的肝细胞形态。Western印迹显示有SV40LT基因的蛋白表达；RT-PCR显示永生化人肝细胞有Alb、谷胱甘肽S转移酶（GSTp）、人凝血因子X（HBCF-X）和β-actinmRNA表达，有细胞色素（CY）P450亚型（CYP3A5、CYP2E1、CYP2C8—19、CYP3A4）mRNA的表达；在HepLi2和HepLi3永生化人肝细胞的培养上清液中可检测到ALT、乳酸脱氢酶（LDH）和Alb。结论新建立的永生化人肝细胞系具有正常人肝细胞的生物学特性以及完善的肝细胞CYP450酶功能，可进一步用于肝细胞药物代谢研究。; 潘小平杜维波盛国平虞晓鹏喻成波吕国良曹红翠李君章益民陈瑜李兰娟; 关键词：细胞系猴病毒40 抗原肝细胞细胞色素P450酶系统

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浙江省医药卫生科学研究基金(2007A081)