国家教育部博士点基金(20060307007)
- 作品数：16 被引量：39H指数：4
- 相关作者：姜平李玉峰王先炜张国龙张源淑更多>>
- 相关机构：南京农业大学江苏出入境检验检疫局河北农业大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：3
- 2008年
- 根据欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计E1和E6 2套PCR引物和TaqMan荧光探针,建立E1和E6荧光RT-PCR方法,用于检测PRRSV。反应条件优化后,用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA进行PCR扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟(CSFV)、猪伪狂犬(PRV)等7种病毒进行特异性检测。结果显示,建立的E1和E6荧光RT-PCR可以检出欧洲型PRRSV,敏感性依次为616和216个拷贝的PRRSV重组质粒DNA,而CSFV等非PRRSV均为阴性。建立的E1、E6荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可作为检测欧洲型PRRSV的技术储备。
- 鲁韦韦唐泰山姜平张常印王凯民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR
- 伴大豆球蛋白及其水解肽对沙门氏菌生长的影响被引量：2
- 2009年
- 为了进一步研究伴大豆球蛋白的生物学功能,应用等电点沉淀和盐析的方法制备伴大豆球蛋白,通过凝胶柱层析法进一步分离纯化,得到单一组分,SDS-PAGE电泳鉴定为纯化的伴大豆球蛋白。并对分离得到的伴大豆球蛋白及其胃蛋白酶水解肽对沙门氏菌生长的影响进行观察。结果表明:高浓度(6mg/ml)的伴大豆球蛋白及其水解多肽可以抑制沙门氏菌的生长繁殖,表现一定的抗沙门氏菌增殖的作用,同样浓度水解多肽的抑制作用强于伴大豆球蛋白本身;低浓度(1.5mg/ml及0.75mg/ml)的伴大豆球蛋白及其水解多肽则表现出轻微的促沙门氏菌增殖的作用。
- 郭成东张源淑王国杰邹思湘
- 关键词：胃蛋白酶沙门氏菌
- 猪脑心肌炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二重RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2009年
- 根据猪脑心肌炎病毒(EMCV)3D基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因序列设计合成了两对特异性引物,经过PCR反应条件的优化,建立了EMCV和PRRSV二重RT-PCR方法,其PCR产物大小分别为286 bp和390 bp,并具有EMCV和PRRSV特征序列。该方法对EMCV和PRRSV的最低检测量分别为10×TC ID50和1×TC ID50;而对乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒的PCR检测结果均为阴性;20份临床发病仔猪样品检测结果为PRRSV阳性者15份,EMCV阳性者3份,证明我国存在EMCV感染。该方法敏感、特异,可用于EMCV和PRRSV感染的检测。
- 白娟李广明宋勤叶李玉峰王先炜张国龙姜平
- 关键词：猪脑心肌炎病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 伴大豆球蛋白水解肽的制备及其对沙门氏菌增殖的影响被引量：3
- 2009年
- 利用等电沉淀和盐析的方法,获得大豆球蛋白,并通过Sepharose-CL-6B凝胶柱层析分离纯化,得到单一组分,经SDS-PAGE鉴定为纯化的7 S伴大豆球蛋白,然后将其用胃蛋白酶水解得到伴大豆蛋白水解肽(PTC)。通过96孔细胞培养板2倍稀释法,对不同浓度的伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽(6,3,1.5和0.75 mg/mL)与沙门氏杆菌共同培养,观察了伴大豆蛋白水解肽对沙门氏杆菌增殖的影响。结果发现,添加不同浓度的伴大豆蛋白水解肽可以影响沙门氏菌的增殖,其中6 mg/mL和3 mg/mL的PTC对沙门氏菌的生长产生明显的抑制作用,1.5 mg/mL的PTC对沙门氏菌作用不明显,而0.75 mg/mL的PTC有微弱的促进作用,表现一定的营养作用。
- 班晓敏莫婷郭成东谢尧赛娜张源淑
- 关键词：沙门氏菌增殖
- 猪IL-10的原核表达及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 为了制备猪IL-10的单克隆抗体(MAb),本研究根据GenBank登录的猪白细胞介素10(PIL-10)基因序列设计两对特异性引物,利用套式PCR扩增PIL-10成熟蛋白编码基因(490bp),构建原核表达载体pET28a-PIL-10,并转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE和western blot分析鉴定,证明PIL-10重组蛋白获得表达。提取纯化该重组蛋白包涵体,免疫BALB/c小鼠,经过3次细胞融合,间接ELISA方法筛选,获得一株能稳定分泌抗猪IL-10MAb的杂交瘤细胞,将其命名为2F4。Western blot结果证明该MAb能够与重组蛋白发生特异性反应。间接ELISA测定细胞上清抗体效价为1∶1024,腹水效价为1∶128000,该MAb为IgG3亚型,轻链为λ型。杂交瘤细胞连续传代20代,分泌抗体的效价基本一致,从而为进一步建立猪IL-10的检测方法奠定了物质基础。
- 刘婷婷王兴龙李玉峰宋艳华张国龙姜平
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 育肥猪呼吸道疾病综合征病理学观察和病原学检测被引量：4
- 2011年
- 猪呼吸道疾病综合征是一种由病毒、细菌、环境应激和猪体免疫力低下等多因素相互作用引起的呼吸道疾病。2009年2～4月,上海农场某猪场一批育肥猪出现疑似病例,表现为食欲下降,咳嗽,呼吸困难,生长缓慢和料肉比降低。本研究在流行病学调查的基础上,剖检8头病猪观察其病理变化,主要表现为肺脏弥慢性实变,弹性降低,间质增宽,有的水肿、气肿,或纤维素性胸膜肺炎。病原检测结果显示,该发病猪群主要病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌。本研究为猪呼吸道疾病综合征的防治提供了依据。
- 刘捷李玉峰王先炜李文良姜平
- 关键词：猪呼吸道疾病综合征病理学观察病原
- 伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对大鼠肠道细菌区系变化的影响
- 2009年
- 【目的】在分子水平上探讨伴大豆球蛋白水解肽对肠道双歧杆菌生长的影响。【方法】选取21日龄健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为4个处理,每个处理3只,基础日粮预饲1周后,分别灌胃生理盐水(对照组)、伴大豆球蛋白液(Conglycinin组)、伴大豆球蛋白酶水解肽P2组分(P2-PTC组)、伴大豆球蛋白盐酸彻底水解液(HCl-FHC组),各0.5ml,1次/天。除对照组外,各处理组灌胃液体总含氮量相等(折合蛋白含量为0.5mg·ml-1),试验共21d。应用PCR-DGGE技术分析灌胃伴大豆球蛋白酶解肽对大鼠粪样细菌区系变化的影响,并采用连续稀释PCR的方法半定量研究伴大豆球蛋白酶解肽对大鼠肠道双歧杆菌数量的影响。【结果】灌胃伴大豆球蛋白酶解肽的大鼠在试验后第1周,其粪样微生物区系变化迅速,而后缓慢,最终形成稳定的体系,提示酶解肽在一定程度上影响了肠道细菌的组成,与对照组和蛋白盐酸彻底水解液组比较,肠道双歧杆菌数量明显增加。【结论】本试验在分子水平证明了伴大豆球蛋白水解肽对肠道双歧杆菌的生长有促进作用。
- 左伟勇陈伟华邹思湘张源淑
- 关键词：变性梯度凝胶电泳细菌区系肠道双歧杆菌
- 猪圆环病毒2型灭活疫苗最小免疫保护剂量研究被引量：1
- 2011年
- 猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,疫苗是防制该病的主要手段。为研究PCV2灭活疫苗的免疫效果,本研究将PCV2 SH株灭活,用生理盐水稀释成5×105.0TCID50/mL(高剂量)、2.5×105.0 TCID50/mL(中等剂量)、1.25×105.0 TCID50/mL(低剂量)、6.3×104.0 TCID50/mL(超低剂量)4种剂量,与等量白油佐剂乳化后,通过断乳仔猪的免疫攻毒试验观察该灭活疫苗的免疫特性。结果表明,PCV2疫苗抗原含量大于1.25×105.0 TCID50/mL时免疫仔猪后均可以产生特异性抗体,能够明显减轻攻毒后仔猪的临床症状、缓解组织病变、降低病毒血症,对免疫猪有一定的保护效果,可以作为预防PCV2感染的疫苗使用。本研究为研制商品化的PCV2灭活疫苗提供实验依据。
- 王先炜习向峰季伟李玉峰马涛姜平
- 关键词：猪圆环病毒2型灭活疫苗
- 重组腺病毒载体表达的α干扰素对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制作用被引量：4
- 2009年
- 目的:研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)新的防治方法。方法:利用表达猪α干扰素的重组腺病毒(rAd-IFNα),通过病毒滴度、间接免疫荧光试验和实时定量RT-PCR检测,在Marc-145细胞上观察其对高致病性PRRSV SY0608株的复制抑制作用。结果:将rAd-IFNα接种细胞后24 h,再感染PRRSV,可以有效阻止PRRSV造成的细胞病变,PRRSV滴度和mRNA水平明显降低;该抑制作用随rAd-IFNα接种剂量的增加而增强,但随病毒培养时间延长而逐渐减弱。此外,将PRRSV感染细胞后24 h,再接种rAd-IFNα,仍可以有效降低PRRSV滴度和mRNA水平,并且rAd-IFNα对PRRSV传统毒株S1株同样具有明显的抑制作用。结论:rAd-IFNα可以有效抑制PRRSV在Marc-145细胞上复制,为PRRSV的防治提供了理论依据。
- 李广明李玉峰王先炜杜以军白娟姜平
- 关键词：重组腺病毒Α干扰素
- PRRSV NSP2基因在重组杆状病毒中的表达与鉴定
- 2009年
- 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP2)之间的差异和生物学特性,本研究根据PRRSV、S1、SY0608株NSP2基因序列保守区设计引物,通过RT-PCR扩增出两毒株的NSP2基因,克隆到pFastBacTMHTB杆状病毒载体中,将筛选的阳性重组载体pF-S1-NSP2和pF-SY-NSP2,分别转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-S1-NSP2和rBac-SY-NSP2。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-S1-NSP2和rAc-SY-NSP2,Westernblot和间接免疫荧光实验结果表明,本研究成功构建了表达PRRSVS1和SY0608株NSP2蛋白的重组杆状病毒,表达的蛋白与自然感染PRRSV的猪血清均具有良好的反应原性,为进一步研究NSP2蛋白的功能及生物学和免疫学特性奠定了基础。
- 宋艳华王海燕李文良李军星李玉峰王先炜姜平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2杆状病毒
