浙江省自然科学基金(Y2080020)
- 作品数：6 被引量：6H指数：1
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- 大萼香茶菜甲素对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA，MA）对白血病细胞系HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法用不同浓度的MA处理HL-60细胞，锥虫蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的影响；以细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annex—in—V／PI双标记和Hoechst33258荧光染色等分析细胞凋亡；通过细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14，NBT试验和细胞形态学检测MA诱导HL-60细胞的分化作用；用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas表达和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位（△ψm）的变化。结果HL-60细胞经MA作用后，MA呈时效及量效性地抑制HL-60细胞增殖，24、48、72h的IC50值分别为8．76、7．17、7．14μg/ml；形态学出现典型的凋亡细胞特征，亚G1期细胞和Annexin—V／PI标记阳性细胞显著升高；细胞发生部分分化，CD11b表达增加，NBT阳性细胞增多；MA诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中，Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化，Bax、线粒体膜蛋白表达显著增加，Bax／Bcl-2比值升高，线粒体膜电位（△ψm）下降。结论MA能抑制HL-60细胞增殖、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡，其机制与上调bax基因和bax／bcl-2比值、提高线粒体膜通透性和下调线粒体膜电位等有关。
- 吴建国周永列夏大静夏骏王珍妮石浩邱莲女吴茅林慧君
- 关键词：白血病细胞凋亡细胞分化
- 大萼香茶菜甲素对多发性骨髓瘤细胞株U266体外作用的研究被引量：1
- 2012年
- 目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株U266增殖、凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法:以不同质量浓度的(2、4、8μg/mL)MA体外作用于U266细胞,运用细胞计数、PI染色、MTT比色法体外观察MA对U266细胞增殖抑制作用;采用细胞形态观察、Annexin V/PI双染色和DNA亚二倍体检测方法研究MA诱导U266细胞凋亡作用;用Western免疫印迹法检测β1、β1i、β2、β2i、β5、β5i、NF-κB、IκB-α蛋白表达。结果:MA抑制细胞增殖;MA可促进细胞凋亡,细胞瑞氏染色后出现典型的凋亡小体;AnnexinV+/P I-表达升高;亚G1峰显著增加;在Western免疫印迹中β2、β1i、β5i、NF-κB随着药物作用浓度的增高表达逐渐降低,而IκB为增高趋势,β1、β2、β2i无明显变化。结论:MA在体外对U266细胞增殖有明显抑制作用,并诱导细胞调亡。
- 冯丽倩周永列吕亚萍夏骏邱莲女石浩
- 关键词：U266细胞增殖细胞凋亡
- 大萼香茶菜甲素A通过抑制蛋白酶体诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡
- 2013年
- 本研究探讨大萼香茶菜甲素A(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株蛋白酶体抑制作用及其诱导凋亡的分子机制。以不同浓度(2、4、8μg/ml)的MA体外作用于U266细胞,用Hochest染色法和Annexin V/PI双染色观察MA诱导U266细胞凋亡作用;用Western blot检测泛素、蛋白酶体19S亚基S6'亚单位和蛋白酶体20S亚基中β1、β1i、β2、β2i、β5、β5i亚单位,以及BAD、BCL-2、FAS、FAS-L、MAPK、PARP、Pro-caspase 3、cleavedcaspase 3蛋白的表达。结果表明,随着MA作用时间的延长和剂量的增加,Hoechst 33258染色的细胞内出现致密颗粒或块状的荧光颗粒,Annexin V+/PI-细胞和总凋亡细胞(Annexin V+/PI-和Annexin V+/PI+)增加;MA可使U266细胞内泛素化水平增高,抑制20S蛋白酶体亚单位β1i、β2、β5i、和19S蛋白酶体泛素识别亚基S6'表达。与此同时,BCL-2、MAPK、PARP、pro-caspase 3表达随着药物作用浓度的增高而下调,BAD、FAS、FAS-L、cleaved-caspase 3表达则增加。结论:大萼香茶菜甲素A具有抑制蛋白酶体的作用,线粒体凋亡和死亡受体途径有可能参与MA诱导细胞的凋亡。
- 陆玲娜冯丽倩吕亚萍夏骏邱莲女石浩王卫忠周永列
- 关键词：多发性骨髓瘤U266细胞蛋白酶体
- 大萼香茶菜甲素体外诱导白血病细胞株HL-60的分化和凋亡被引量：1
- 2009年
- 目的研究大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)抑制白血病细胞株HL-60增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法将不同浓度的MA与HL-60细胞在体外培养,台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡;通过细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14,NBT试验和细胞形态学检测MA对HL-60细胞的分化作用;流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(ΔΨm)的表达变化。结果MA呈时效及量效性地抑制HL-60细胞的增殖和活力,8μg/ml MA作用HL-60细胞24～72 h后,MTT法检测24h、48 h、72 h的细胞增殖抑制率分别为(52.9±0.3)%、(70.0±1.0)%和(75.3±1.2)%,均显著高于对照组(P<0.01);24h、48 h、72 h的IC50分别为8.76、7.17、7.14μg/ml;HL-60细胞经MA作用后,大部分细胞阻滞于G0/1期,出现典型的细胞形态改变,经4～20μg/ml的MA作用后,SubG1由(2.85±1.6)%上升至(51.7±5.9)%,与对照组(1.74±0.5)%相比具有显著性差异(P<0.05),Annexin-V/PI标记升高,Hoechst33258染色后的凋亡细胞的特征性改变等均表明MA能诱导HL-60细胞凋亡;HL-60细胞经4～8μg/ml MA作用24h后,细胞发生部分分化,细胞表面CD11b表达增加,NBT阳性细胞增多。MA诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2表达无变化,但Bax表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值升高,Fas、P53表达无变化。随MA作用的浓度增加,线粒体膜电位(ΔΨm)下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡,其机制与上调bax基因和bax/bcl-2比值、提高线粒体膜通透性与下调线粒体膜电位等有关。
- 吴建国周永列夏大静夏骏王珍妮石浩邱莲女吴茅林慧君
- 关键词：白血病细胞分化
- 大萼香茶菜甲素对急性早幼粒细胞性白血病细胞体外作用的影响
- 2010年
- 目的:观察大萼香茶菜甲素(Macrocalyxin A,MA)体外对急性早幼粒细胞性白血病(NB4细胞)增殖抑制、诱导凋亡及诱导分化的作用,并探讨其作用机制。方法:将不同浓度MA在体外与NB4细胞共同培养,采用细胞计数、MTT细胞活性检测体外观察MA对NB4细胞增殖抑制作用;采用细胞形态观察、Hoechst33258荧光染色、DNA亚二倍体检测和Annexin V/PI双染色方法研究MA诱导NB4细胞凋亡作用;采用细胞形态学观察、NBT试验、细胞免疫表型CD11b检测等方法研究MA诱导NB4细胞分化作用;采用流式细胞技术分析凋亡调控基因Bcl-2、bax、bad、Fas、p53表达情况和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(△ψm)的改变探讨MA体外诱导NB4细胞凋亡和分化机制。实验设置空白对照和全反式维甲酸(ATRA)阳性对照。结果:不同浓度MA在体外对NB4细胞增殖有明显抑制作用,呈现剂量和时间的量效关系;较低浓度MA作用48h后可以诱导NB4细胞分化,较高浓度MA则显著地促进细胞凋亡;在凋亡调控基因中,Bcl-2、Fas表达无明显改变,bax、bad、Bcl-2/bax、p53随着药物作用浓度的增高表达逐渐增高;线粒体膜蛋白Apo2.7随着药物作用浓度和作用时间的增加表达逐渐增高,线粒体膜电位则逐渐下降。结论:MA在体外能明显抑制NB4细胞增殖,诱导细胞分化;一定浓度药物能够通过bax、bad等凋亡调控基因作用于线粒体诱导细胞凋亡。
- 夏骏周永列王珍妮吕亚萍吴建国邱莲女石浩
- 关键词：增殖细胞凋亡细胞分化
- 大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡被引量：3
- 2009年
- 目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxinA,MA)体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法:不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白(Apo2.7)、线粒体跨膜电位(ΔΨm)与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果:MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright-Giemsa染色和Ho-echst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0/G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin-V/PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白(Apo2.7)、caspase-3表达显著增加,Bax/Bcl-2比值升高,ΔΨm下降。结论:MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax/Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。
- 吴建国周永列夏大静王珍妮夏骏邱莲女吴茅林慧君费鲜明
- 关键词：白血病细胞凋亡线粒体
