国家高技术研究发展计划(2012AA021602) 作品数:13 被引量:364 H指数:8 相关作者: 姚辉 宋经元 周红 韩建萍 杨雪莹 更多>> 相关机构: 中国医学科学院北京协和医学院 北京协和医学院 公安部物证鉴定中心 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 政治法律 经济管理 更多>>
基于ITS2序列的北豆根药材及其混伪品分子鉴定研究 为准确、快速鉴定中药材北豆根及其混伪品,保证临床用药安全,考察ITS2序列对北豆根及其混伪品鉴定能力,本研究采用试剂盒法提取药材的基因组DNA,PCR扩增其核糖体DNA的内转录间隔区(internal transcrib... 杨培 侯典云 宋经元 张辉 陈士林 姚辉关键词:北豆根 ITS2 DNA条形码 分子鉴定 混伪品 羌活药材ITS/ITS2条形码鉴定及其稳定性与准确性研究 被引量:107 2012年 为验证DNA条形码鉴定的稳定性与准确性,本文选用羌活药材作为研究对象,对31份样本提取基因组DNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列并进行双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,采用MEGA5.0软件与其混伪品进行序列比对,计算种内和种间距离,构建邻接树(neighbor-joining tree,NJ Tree)。ITS2序列采用基于隐马尔可夫模型(hidden Markov model,HMMer)的注释方法获得。结果表明,羌活药材ITS序列长度为603~604 bp,ITS2序列长度均为228 bp,羌活药材ITS/ITS2序列单倍型与其基原植物叶片序列一致。两种基原植物ITS/ITS2序列种内平均kimura 2-parameter(K2P)遗传距离均远远小于其与混伪品的种间平均K2P遗传距离;NJ树结果显示羌活、宽叶羌活与其混伪品均可明显区分,表现出良好单系性。因此ITS/ITS2序列作为DNA条形码能稳定、准确鉴别羌活药材,为保障临床安全用药提供了新的技术手段。 辛天怡 姚辉 罗焜 向丽 马晓冲 韩建萍 林余霖 宋经元 陈士林关键词:羌活 物种鉴定 稳定性 基于DNA条形码的珍稀药用、野生等资源快速检测技术及产品研发 2015年 生物资源与安全是国家安全的重要组成部分,特有珍稀药用资源、野生资源、农作物种质资源是国家的重要战略资源,对其进行快速准确的鉴定、识别与分类是种质资源开发利用与保护的基础,符合保护我国国家生物资源,维护我国生态安全的重大战略决策。DNA条形码是利用短而标准的DNA片段对物种进行快速准确鉴定的一种新方法,是近年来发展最迅速的学科前沿之一。该技术的兴起和广泛应用为珍稀药用、野生等资源的快速检测与鉴定提供了技术支撑。本研究以物种的快速鉴定为目的,运用DNA条形码技术对我国珍稀濒危资源、药用资源进行快速检测与分类,满足海关及各安全职能部门、企业对物种快速鉴定的需求,保障我国国家生物资源安全。建立基于SNP芯片的作物种质资源的DNA条形码技术;利用该技术,高通量、高精度、低成本地对我国作物种质资源进行DNA条形码绘制,为作物种质资源保护与开发利用以及新品种保护提供科学依据和技术支撑。关键词:DNA片段 条形码技术 药用资源 野生资源 作物种质资源 多基原药材秦艽ITS2条形码鉴定研究 DNA条形码技术的快速发展将促进我国中药材的质量控制和标准化建设,是国际生物分类和鉴定研究中引人注目的新方向,但目前为止该技术相关报道多采用中药材基原植物叶片进行鉴定研究,直接应用于中药材鉴定较少,业内广泛关注的采用DN... 罗焜 马培 姚辉 辛天怡 胡燕 郑司浩 黄林芳 刘军 宋经元关键词:ITS2 物种鉴定 稳定性 文献传递 基于ITS2序列的北豆根药材及其混伪品分子鉴定研究 为准确、快速鉴定中药材北豆根及其混伪品,保证临床用药安全,考察ITS2序列对北豆根及其混伪品鉴定能力,本研究采用试剂盒法提取药材的基因组DNA,PCR扩增其核糖体DNA的内转录间隔区(internal transcrib... 杨培 侯典云 宋经元 张辉 陈士林 姚辉关键词:北豆根 ITS2 DNA条形码 分子鉴定 混伪品 文献传递 一种改良的植物DNA提取方法 被引量:153 2013年 植物组织中含有大量多糖、多酚、酯类等次生代谢产物,要从中提取高质量的DNA比较困难。针对这一情况,该文提出一种改良CTAB植物DNA提取方法(mCTAB),并以10种常见植物为实验材料,与4种常用的植物DNA提取试剂盒作对比。结果表明,mCTAB法提取的DNA产率高且质量好,PCR扩增成功率也较高,而提取成本显著低于DNA提取试剂盒,可有效用于植物DNA条形码等研究的植物DNA提取。 李金璐 王硕 于婧 王玲 周世良关键词:DNA条形码 改良CTAB法 Phylogeny and Classifcation of Prunus sensu lato (Rosaceae) 被引量:17 2013年 The classifcation of the economically important genus Prunus L.sensu lato(s.l.)is controversial due to the high levels of convergent or the parallel evolution of morphological characters.In the present study,phylogenetic analyses of ffteen main segregates of Prunus s.l.represented by eighty-four species were conducted with maximum parsimony and Bayesian approaches using twelve chloroplast regions(atpB-rbcL,matK,ndhF,psbA-trnH,rbcL,rpL16,rpoC1,rps16,trnS-G,trnL,trnL-F and ycf1)and three nuclear genes(ITS,s6pdh and SbeI)to explore their infrageneric relationships.The results of these analyses were used to develop a new,phylogeny-based classifcation of Prunus s.l.Our phylogenetic reconstructions resolved three main clades of Prunus s.l.with strong supports.We adopted a broad-sensed genus,Prunus,and recognised three subgenera corresponding to the three main clades:subgenus Padus,subgenus Cerasus and subgenus Prunus.Seven sections of subgenus Prunus were recognised.The dwarf cherries,which were previously assigned to subgenus Cerasus,were included in this subgenus Prunus.One new section name,Prunus L.subgenus Prunus section Persicae(T.T.Yü&L.T.Lu)S.L.Zhou and one new species name,Prunus tianshanica(Pojarkov)S.Shi,were proposed. Shuo Shi Jinlu Li Jiahui Sun Jing Yu Shiliang Zhou关键词:矮樱桃 RBCL基因 TRNL-F 最大简约法 超微破壁饮片DNA条形码基原物种追溯 被引量:13 2015年 中药超微饮片和破壁饮片已失去中药材外观性状及显微鉴别特征,传统鉴定方法无法有效鉴定其真伪。本研究选用ITS2序列作为DNA条形码对全草类、根及根茎类、叶类、花类、果实类和种子类的31种代表性中药(28个物种)的原药材、超微饮片及破壁饮片共93份样品进行研究,验证DNA条形码技术对中药超微饮片和破壁饮片基原物种追溯的可靠性。通过DNA提取、PCR扩增及双向测序得到TIS2序列,在中药材DNA条形码鉴定系统和Gen Bank数据库中进行BLAST鉴定。采用MEGA 6.0软件进行序列比对及分析,运用K2P模型计算遗传距离,构建系统进化NJ树。结果表明93份样品均能提取DNA,PCR扩增及测序后均能得到高质量的ITS2序列。31种药材中,26种药材及其超微饮片和破壁饮片与基原植物的ITS2序列完全相同,5种药材的ITS2序列存在变异。31种中药材在中药材DNA条形码鉴定系统和Gen Bank数据库中均能通过BLAST比对到正确的标准序列。各物种种内变异较小,最大种内遗传距离均小于最小种间遗传距离,NJ树中28个物种的93条ITS2序列都与各自标准序列聚为一支。因此,基于ITS2序列的DNA条形码技术可准确、有效地鉴定原药材、超微饮片和破壁饮片,为中药超微饮片和破壁饮片生产过程质量追溯及产品市场监管提供有力保障。 向丽 汤欢 成金乐 陈一龙 邓雯 郑夏生 赖智填 陈士林关键词:DNA条形码 ITS2 超微饮片 鸡血藤、滇鸡血藤、大血藤等血藤类药材的psbA-trnH条形码分子鉴定 被引量:6 2016年 目的:中国药典收载的鸡血藤、大血藤、滇鸡血藤及相关物种均有"血藤"之称,其各自的来源不同,功效主治不同,不能混用。为确保其临床用药的安全、有效,本研究应用DNA条形码序列psbA-trnH对鸡血藤、大血藤、滇鸡血藤及其混伪品进行鉴定研究。方法:通过对样本进行基因组DNA提取,PCR扩增psbA-trnH序列。所得序列经拼接后,用MEGA5.0和DNAMAN进行种内种间序列分析,构建NJ树,对psbA-trnH序列在血藤类药材中的鉴定能力进行评估。结果:鸡血藤、大血藤和滇鸡血藤序列长度和GC含量各不相同,psbA-rrnH种内序列相似度高,均高于它们与混伪品间的序列相似性。鸡血藤、大血藤、滇鸡血藤与其他非药典收载的血藤类药材的种间最小K2P距离分别为0.137、0.426和0.003,均大于其种内最大遗传距离0.014、0.004和0。在NJ树中,鸡血藤、大血藤均单独聚为一支,能明显的与其他混伪品区分开,滇鸡血藤与异形南五味子聚为一支。结论:psbA-trnH序列能准确鉴定鸡血藤、滇鸡血藤、大血藤药材及其混伪品,该条形码分子鉴定方法可作为传统鉴定方法的有效补充。 周红 马双姣 陈贝贝 韩正洲 姚辉关键词:PSBA-TRNH 鸡血藤 大血藤 DNA条形码 基于DNA条形码技术探讨板蓝根及大青叶基原物种问题 被引量:6 2013年 本文对我国板蓝根及大青叶原植物的物种进行了探讨,以澄清分类上的混乱现象。利用PCR直接测序法对采集的全国22份样本,测定了核基因ITS2区和叶绿体matK基因片段,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,用软件MEGA4.0进行相关数据分析,并构建NJ(邻接)树。结果表明,所研究样本ITS2片段长度为191 bp,测序峰图显示不同研究样本间具有多个单核苷酸多态性(SNP)位点,部分样本具有杂合位点;从构建的NJ树图可以看出,基于核ITS2片段,所研究样本被分成两大支,其中一支与欧洲菘蓝相聚。基于叶绿体matK序列,所研究样本也被明显分成两支。因此本研究支持板蓝根及大青叶的原植物为菘蓝(Isatis indigotica Fortune),与欧洲菘蓝(Isatis tinctoria L.)是独立的两个物种,不支持Flora of China中将二者合并的观点。 孙稚颖 庞晓慧关键词:菘蓝 DNA条形码