国家科技重大专项(2012ZX09103-201-011)
- 作品数：8 被引量：57H指数：4
- 相关作者：王伟郭淑贞解华麻春杰王勇更多>>
- 相关机构：北京中医药大学内蒙古医科大学首都医科大学附属北京安贞医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 益心解毒方对Nox2和Nox4亚基过表达的心肌细胞NADPH氧化酶活性的影响被引量：4
- 2015年
- 目的通过观察益心解毒方含药血清对Nox2、Nox4亚基过表达的H9c2心肌细胞NADPH氧化酶活性的影响,揭示其作用环节是否与干预相应亚型的NADPH氧化酶调控环节有关。方法采用PCR方法扩增Nox2、Nox4基因全长序列,经双酶切、连接载体和转化后提取重组质粒,经酶切鉴定的阳性质粒进行DNA测序,测序正确后按照lipofectamine 2000试剂的说明书瞬时转染H9c2细胞,转染后的心肌细胞分组给予不同的药物干预,24 h后检测NADPH氧化酶活性。结果 1含有Nox2/Nox4亚基的重组质粒载体通过测序鉴定,结果与Gen Bank报道的完全一致。2通过荧光显微镜下观察转染72 h后的H9c2细胞,可见大量发绿色荧光的细胞,流式细胞术计数结果显示转染率均在60%左右,符合实验要求。3空质粒载体组、模型组、益心解毒方组的NADPH氧化酶活性表达明显高于正常组(P<0.01,P<0.05);模型组和益心解毒方组的NADPH氧化酶活性表达高于空载体组(P<0.01);模型组NADPH氧化酶活性表达均明显高于其他各组,而益心解毒方各组的NADPH氧化酶活性表达均明显低于模型组(P<0.01,P<0.05)。结论成功构建大鼠心肌细胞Nox2、Nox4亚基的重组质粒载体,该重组质粒载体可以在心肌细胞中过表达,益心解毒方可以有效地降低NADPH氧化酶活性的表达。提示此复方治疗心衰的机制可能是抑制了Nox2和Nox4型NADPH氧化酶的表达。
- 解华麻春杰郭淑贞张前付帮泽高阔王伟
- 关键词：H9C2心肌细胞过表达
- 芪参益气滴丸对心衰大鼠RAAS系统的实验研究被引量：17
- 2014年
- 目的阐明芪参益气滴丸对心梗后心衰大鼠血流动力学的改善作用及对肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的影响。方法利用左冠状动脉结扎术复制心梗后心衰大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、芪参益气滴丸组以及卡托普利组。生物信号处理分析系统评价各组大鼠血流动力学参数,放免检测肾素(Ren)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)含量,Western blot检测AngⅡ的1型受体(AT1)、AngⅡ的2型受体(AT2)和血管紧张酶(ACE)的浓度变化。结果结果显示,该模型大鼠在术后28 d出现显著的心梗后心衰病理改变。在动脉血流动力学方面,与假手术组相比,模型组大鼠的收缩压(SBP)与舒张压(DBP)下降显著;此外,模型组大鼠的左室收缩压(LVSP)、左室收缩压最大上升速率(+dp/dt_(max))和舒张压最大上升速率(-dp/dt_(max))明显低于假手术组。肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)被激活,其中伴随ACE、AT1表达的上升和AT2含量的下调。而芪参益气滴丸组和卡托普利组均能很好的改善动脉SBP和DBP(P<0.05),且2组之间无统计学差异。此外,均能上调心衰大鼠心室左室舒张压末期压(LVEDP)和-dp/dr_(max)。但在抑制RAAS激活方面,芪参益气滴丸可以下调血浆肾素-血管紧张素Ⅱ,但对醛固酮无明显作用。芪参益气滴丸能够部分抑制AT1和ACE的表达,而对AT2具有明显的上调作用。作为血管紧张素酶抑制剂,卡托普利药效主要作用在ACE和AT1上,对AT2未见显著改善作用。结论芪参益气滴丸能够改善心衰大鼠血流动力学。该机制可能通过降低肾素、AngⅡ的表达,下调ACE和AT1受体,增加保护性受体AT2的含量,进而抑制RAAS系统的激活有关。
- 陈慧李春石天娇王勇常宏霍魁媛唐炳华王伟
- 关键词：心衰芪参益气滴丸血流动力学肾素-血管紧张素-醛固酮系统
- 益心解毒方对心梗后心衰大鼠心肌保护作用的实验研究被引量：18
- 2012年
- 目的:探讨益心解毒方对心梗后心衰大鼠损伤心肌的保护作用机制。方法:利用左冠状动脉结扎术制备大鼠心梗后心衰动物模型,通过宏观表征结合理化指标综合判定该疾病模型的证候属性,并给予对证中药的干预。检测各组大鼠的心脏超声指标;通过血生化的方法检测血清中肌酸激酶(CK)的水平以及利用酶联免疫的方法测定血清中肌钙蛋白I(CTNI)的水平;并通过放免的方法检测血浆中内皮素(ET)与降钙素基因相关肽(CGRP)的浓度。结果:术后21d,模型组大鼠的心功能显著下降,主要表现在左室舒张末内径(LVEDd)、左室收缩末内径(LVEDs)明显增大,短轴缩短率(FS)以及射血分数(EF)急剧下降(P<0.01);血清中CK、CTNI水平显著升高(P<0.01);血浆中ET水平升高(P<0.01),CGRP水平下降(P<0.01)。给予益心解毒方干预后,能够有效的降低心衰大鼠扩张的LVEDd和LVEDs(分别下降19%和25%,P<0.05和P<0.01),尤以改善LVEDs为主(P<0.01),提高EF(提高25%,P<0.01);并且降低心衰大鼠血浆中上升的ET浓度(P<0.05),升高血浆中CGRP浓度(P<0.01),且进一步降低ET/CGRP的比值(P<0.01);显著下调心衰大鼠的血清中CK、CTNI(P<0.01,P<0.05)。结论:益心解毒方能够有效的提高心衰大鼠的心功能,其机制与降低血中ET、CK、CTNI,并升高血中的CGRP水平等心肌保护作用有关。
- 李春欧阳雨林王勇韩静仇琪郭淑贞王伟
- 关键词：心衰气虚血瘀证心肌保护作用
- 基于生物网络与病证结合的中药复方药理学研究对策被引量：16
- 2012年
- 以病证结合与生物网络的视角,从疾病、证候、症状不同维度,探讨宏观与微观相结合进行中药复方药理学评价的方法与思路,并根据复方中药多组分、多靶标的特点,借鉴网络药理学的方法,探索一套基于生物网络的中药复方药理学评价对策,以期建立基于生物网络与病证结合的多维度、多层次的中药复方药理学评价体系。
- 王勇李春李栋陈建新郭淑贞王伟
- 关键词：病证结合生物网络中药药理学
- 益心解毒方对大鼠心肌细胞内活性氧水平及信号转导通路的影响被引量：2
- 2015年
- 目的研究益心解毒方含药血清抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌细胞内活性氧(ROS)水平及信号转导通路相关分子的变化。方法取对数生长期的大鼠H9c2心肌细胞,同步化后进行实验,实验分为正常组:无造模刺激,无干预;模型组:10-6mol/L的AngⅡ刺激24h,1%正常大鼠血清干预;益心解毒方组:10-6mol/L的AngⅡ刺激24h,1%益心解毒方含药血清干预;二亚苯基碘(DPI)对照组:10-6mol/L的AngⅡ刺激,10μmol/L的NADPH氧化酶抑制剂DPI干预24h,采用乙酰乙酸双氯荧光素(DCFH-DA)法测定H9c2心肌细胞ROS水平;Western blot法测定各组H9c2心肌细胞信号转导通路相关分子的变化。结果研究发现AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞中ROS水平显著提高,而益心解毒方含药血清对增高的ROS水平都有明显的抑制作用,与模型组相比,低剂量组作用最为显著(P<0.05);在给予AngⅡ培养24h后,低剂量组信号转导通路上的血管紧张素受体(AT1受体)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)蛋白、基质金属蛋白酶(MMP9)蛋白表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论益心解毒方通过降低心肌ROS水平;抑制AngⅡ引起的交感神经系统、肾素-血管紧张素系统(RAAS)过度激活、降低AT1受体的表达水平,抑制STAT3的作用而延缓心肌肥厚的过程,发挥其在心肌肥厚过程中的心肌保护作用;同时抑制MMPs的活性,减缓心肌重构。
- 解华麻春杰郭淑贞刘甲王伟
- 关键词：心肌细胞ROS信号转导通路
- 益心解毒方对NOX2亚基和NOX4亚基过表达及小干扰RNA引起的心肌细胞还原型辅酶Ⅱ氧化酶活性变化的机制研究
- 2015年
- 目的观察益心解毒方含药血清对NOX2、NOX4亚基过表达和小干扰RNA(RNAi)导致的H9C2心肌细胞还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活性的变化,探讨益心解毒方的作用机制。方法采用正常雄性Sprague-Dawley大鼠16只,构建针对NOX2、NOX4亚基的过表达质粒和RNAi质粒。采用转染试剂瞬时转染H9C2心肌细胞,流式细胞术检测转染率,转染24 h后分组(正常H9C2细胞组、过表达组、H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方中剂量组、益心解毒方低剂量组)给予不同剂量的含药血清干预,24 h后检测NADPH氧化酶活性。结果转染NOX2亚基过表达质粒的各组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其中,过表达组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与正常H9C2细胞组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方中剂量组与过表达组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与H9C2转阴性对照质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与RNAi质粒组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方中剂量组与益心解毒方高剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);益心解毒方低剂量组与益心解毒方中剂量组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。转染NOX4亚基过表达质粒的各组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其中,过表达组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与正常H9C2细胞组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.05);H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方中剂量组、益心解毒方低剂量组与过表达组NADPH氧化酶活性比较,差异有统计学意义(P
- 解华麻春杰郭淑贞付帮泽冯玄超王伟
- 关键词：小干扰RNA氧化还原酶类
- 益心解毒方对AngⅡ诱导的H9c2细胞NADPH氧化酶表达作用机制的研究被引量：3
- 2015年
- 目的:采用H9c2心肌细胞系,研究益心解毒方含药血清抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞Nox2、Nox4型NADPH氧化酶表达的影响。方法:取对数生长期的H9c2心肌细胞,同步化后进行实验,实验分为正常组、模型组、益心解毒方组、二亚苯基碘(DPI)对照组。采用乙酰乙酸双氯荧光素(DCFH-DA)法测定H9c2心肌细胞内活性氧(ROS)水平;RT-PCR法和Western-blot法测定Nox2亚基和Nox4亚基的表达量。结果:研究发现,与模型组比较,益心解毒方含药血清能抑制ROS和Nox2、Nox4亚基表达的增高,其中益心解毒方低剂量组作用最为显著(P<0.01,P<0.05)。结论:结合课题组前期的动物实验研究表明,益心解毒方在改善心功能、减缓心室重构等方面药效显著,而抑制NADPH氧化酶活性,降低心肌ROS水平可能是其发挥药效的重要机制。
- 解华麻春杰郭淑贞张前韩静胡京红高瑞红冯玄超王伟
- 关键词：H9C2心肌细胞NADPH氧化酶活性氧
