国家自然科学基金(30470899)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 利用双向启动子型RNA干涉载体构建随机RNA干涉文库的初步研究被引量：1
- 2007年
- 目的:利用双向启动子型RNA干涉载体pRHU构建随机RNA干涉文库。方法:分别构建基于pRHU载体的绿色荧光蛋白EGFP和p53的干涉质粒,验证双向启动子型RNA干涉载体的可用性。设计合成满足pRHU载体特点的干涉文库随机模板,经PCR扩增克隆入pRHU载体,转化感受态细胞获取随机干涉文库。随机挑选20个菌落测序,评价随机文库质量。结果:双向启动子型RNA干涉载体pRHU能在哺乳动物细胞中对外源基因EGFP和内源基因p53进行有效的干涉,表明该载体是一个有效的干涉载体,可以用于构建随机RNA干涉文库。本研究采用的构建策略可在较短时间内,用50μg pRHU载体获得4×106个克隆。随机挑选20个克隆测序结果表明均插入了GN17-19序列,并且不存在序列重复性。结论:采用本研究的构建策略可以简便快速地利用双向启动子型干涉载体成功构建随机RNA干涉文库,为进一步筛选功能基因奠定了基础。
- 李婧付汉江朱捷邢瑞云凌世淦孙志贤郑晓飞
- 关键词：双向启动子基因文库质粒
- RNA干涉文库的设计与应用被引量：1
- 2006年
- 人类基因组计划的巨大发展提供了大量原始生物学信息,但对其功能信息的了解还相当有限。RNA干涉技术为研究基因功能提供了一种快速而经济的方法。构建靶向大量基因的RNA干涉文库在基因组范围内实现基因的沉默,已成为研究细胞生物学行为的一种新的功能基因组学研究方法。近年来相继出现许多针对RNA干涉文库的设计策略,并在一定规模内成功实现遗传学筛选,为将RNA干涉文库用于功能基因组学的研究进行了意义深远地探索与尝试。
- 李婧凌世淦郑晓飞
- 关键词：功能基因组学
