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实时荧光定量PCR方法检测非霍奇金淋巴瘤患者B淋巴细胞刺激因子表达水平被引量：3: 2012年; 目的:建立实时荧光定量PCR方法(RFQ-PCR)检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者B淋巴细胞刺激因子(BAFF)表达水平。方法:47例NHL患者及20例健康对照,采用实时荧光定量PCR方法检测其外周血单个核细胞中的B淋巴细胞刺激因子表达水平。结果:RFQ-PCR检测BAFF含量的示灵敏度为10 pg/ml,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为8.56%和11.32%,高浓度样本批内和批间CV分别为0.76%和4.58%。NHL患者和健康对照者BAFF mRNA表达量分别为(0.48±0.023,0.25±0.023),两者具有显著性差异(P=0.0001)。结论:RFQ-PCR检测BAFF mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性。NHL患者BAFF mRNA高表达,提示BAFF可能在NHL发生发展中发挥重要作用。; 王金湖王梅杨剑虹王旭东申娴娟浦江鞠少卿; 关键词：非霍奇金淋巴瘤 B淋巴细胞刺激因子

多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞微小RNA-202的表达及意义被引量：2: 2011年; 目的建立SYBR Green Ⅰ FQ-PCR检测人外周血单个核细胞（PBMC）中miR-202表达的方法,并初步探讨其检测MM的意义.方法采用特异miR-202茎环引物逆转录后,用FQ-PCR对21例MM患者及20名健康人PBMC中miR-202表达水平做相对定量分析；结果用Mann-Whitney法进行两组间miR-202表达差异比较.此外,用1份1∶125稀释标本重复检测5次；及同一标本连续检测3d,每天检测1次,每次重复5管,根据循环阈值（Ct）计算标准差和变异系数（CV）,以评价所建方法的重复性.结果 FQ-PCR检测PBMC中miR-202的扩增曲线呈标准的S型,熔解曲线峰值单一,未见杂峰,显示其特异性较好.批内CV为1.2％,批间CV为3.2％,当标本miR-202浓度被稀释为12.8 pmol/μl时,仍可稳定地得到扩增曲线.FQ-PCR检测MM组中miR-202表达量为1.844（0.162 ～3.966）,健康对照组表达量为0.014（0.007～0.221）,MM组中miR-202表达明显高于健康对照组（U=48.000,P＜0.01）.结论 FQ-PCR是一种快速简便、特异性和重复性较好的检测miR-202的方法,MM患者PBMC中miR-202表达升高,其可能参与MM的发生过程,并有可能成为MM诊断和治疗的新指标.; 张霞王旭东申娴娟吴信华施维祝文彩刘振宗鞠少卿; 关键词：聚合酶链反应微小RNAS 多发性骨髓瘤

IFN-γ对多发性骨髓瘤细胞上B细胞活化因子受体表达的影响及相关机制研究被引量：1: 2011年; 目的探讨IFN-γ对多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞上B细胞活化因子受体（BAFF-R）的表达变化影响及相关机制.方法应用RT-PCR和ELISA法检测IFN-γ诱导多发性骨髓瘤细胞BAFF-R的表达水平,观察NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082对其mRNA和蛋白表达水平的影响;应用Western blot检测NF-κB在IFN-γ诱导的多发性骨髓瘤细胞反应中的活化程度.结果 IFN-γ以时间和剂量依赖方式上调多发性骨髓瘤细胞BAFF-R表达.BAY11-7082以剂量依赖方式在基因转录和翻译水平显著抑制IFN-γ诱导的BAFF-R表达.结论 NF-κB信号通路参与了多发性骨髓瘤细胞BAFF-R的表达,如何参与有待进一步研究.; 申娴娟王跃国吴信华袁宏香祝文彩丛辉王惠民鞠少卿; 关键词：多发性骨髓瘤 IFN-Γ NF-ΚB信号通路

人BAFF-R基因启动子活性的初步研究: 2010年; 目的以B淋巴细胞刺激因子受体BAFF-R基因5'上游区序列为研究对象,初步鉴定、分析该基因的启动子所在区域。方法克隆BAFF-R基因5'侧翼区1823 bp序列,构建8个含有不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-B1～B8,将这8个序列缺失重组质粒与psv-β-gal质粒共转染细胞,检测荧光素酶的相对活性,确定启动子所在区域。结果8个重组质粒中pGL3-B2、pGL3-B3、pGL3-B5、pGL3-B6启动子的活性较低;pGL3-B7启动子的活性最强,pGL3-B8启动子活性最低。结论BAFF-R基因5'端-288～-430、-712～-868和-1420～-1562三个区段可能存在转录沉默子元件,-617～-712和-1277～-1420区段存在转录增强子元件,BAFF-R基因的核心启动子可能位于-1420～+261区域。; 袁宏香钱晶晶王惠民王跃国吴信华祝文彩浦江申娴娟鞠少卿; 关键词：启动子报告基因

多发性骨髓瘤中MAPK信号通路对BLyS表达的调控研究被引量：4: 2011年; 目的研究多发性骨髓瘤（MM）细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的表达及活化情况,探讨MAPK信号通路对MM细胞B淋巴细胞刺激因子（BLyS）表达变化的影响及对MM细胞增殖与存活的影响,并初步探讨MAPK信号通路在IFN-γ（MM重要的促生长因子）上调MM细胞BLyS表达过程中的作用.方法应用Western blot方法检测MM细胞中蛋白ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、p38及p-p38的表达情况；应用RT-PCR及Western blot检测MAPK信号通路对BLyS表达的影响；应用WST-1法检测靶向JNK的MAPK信号通路抑制剂SP600125对MM细胞增殖与存活的影响.结果 MM细胞株中,除了ERK、JNK及p38的表达外,还有活化蛋白p-JNK的表达；靶向JNK的MAPK信号通路抑制剂SP600125可下调MM细胞BLyS的表达,其激动剂茴香霉素（anisomycin）可上调BLyS的表达；IFN-γ可上调MM细胞BLyS的表达,SP600125可部分抵消IFN-γ对BLyS的上调作用；SP600125可抑制MM细胞的增殖与存活.结论 MM细胞中有JNK/SAPK信号通路的活化；JNK/SAPK信号通路的活化程度与BLyS的表达高低呈正相关；JNK/SAPK信号通路在IFN-γ上调MM细胞BLyS表达过程中发挥重要作用.; 徐光浦江褚少朋王旭东申娴娟吴信华张霞孙长江鞠少卿; 关键词：MAPK信号通路

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江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目(2008095)