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人Sef基因重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：2: 2008年; 构建人Sef-L和Sef-S基因的复制缺陷型重组腺病毒表达载体,为研究Sef的功能和作用机制以及Sef的基因治疗奠定基础。通过PCR方法以hSef的表达质粒为模板扩增得到hSef的编码序列,亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV中,经测序验证之后,将穿梭载体使用Pine I酶切线性化,然后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,得到重组的Ad-hSef-L和Ad-hSef-S质粒,最后将Ad-hSef-L和Ad-hSef-S质粒使用Pac I线性化,转染到HEK293细胞中,包装收获病毒颗粒,免疫印迹实验鉴定表达,荧光素酶报告实验验证其功能。成功构建了人Sef基因的复制缺陷型重组腺病毒表达载体,获得了有功能的Ad-hSef-L和Ad-hSef-S病毒重组子。; 李智勇任永明荣知立李颖华程龙王银银常智杰; 关键词：SEF 腺病毒 FGF MAPK PI3K

白血病抑制因子LIF第29位氨基酸突变导致其功能完全丧失(英文): 2005年; 白血病抑制因子(LIF)为一种多功能细胞因子,在生物发育及维持正常生理功能中发挥着重要的作用. LIF在所有的哺乳动物中都具有高度的保守性,某些氨基酸在不同物种中保持不变. LIF中29位氨基酸在所有的哺乳动物中都是Q. 为了研究Q对LIF功能的重要性,利用随机PCR的方法将29位氨基酸突变为R,并将突变后的LIF克隆到真核表达载体pcDNA6,在哺乳动物细胞中成功表达. 同时以克隆到的野生型LIF作为对照. 将分泌到细胞培养基中的野生型和突变LIF因子收集,通过EMSA实验以及荧光素酶报告系统检测,发现野生型LIF因子具有激活STAT3信号通路的生物学活性. 同时,3H-TdR掺入实验结果表明,野生型LIF因子能显著抑制鼠骨髓白血病细胞系M1的增殖。而29位氨基酸突变的LIF因子则完全丧失了以上功能,但所发现的突变没有显性负的作用. 结果充分说明,LIF中高度保守的29位氨基酸对LIF功能的维持具有重要的作用.; 宁红秀陈钺张原江戎煜吴晓君张秀芳常智杰; 关键词：突变细胞增殖

利用四环素调控系统研究CHIP对TGF-β信号通路的抑制性调节被引量：2: 2005年; 为了研究伴侣分子相互作用蛋白CHIP对TGF-β信号通路的调控,利用四环素基因表达调控系统,建立四环素调控表达CHIP的稳定细胞系(Mv1Lu-Tetoff-CHIP).利用此细胞模型,发现CHIP的过量表达可显著降低细胞内Smad2/3蛋白水平;荧光素酶报告分析也表明开启CHIP蛋白表达可明显降低Smads介导的基因转录活性;进一步的免疫印迹结果显示CHIP蛋白可明显下调TGF-β所诱导的下游基因JunB的表达.上述结果提示CHIP可以作为一种新的蛋白质分子抑制性调节TGF-β信号通路.; 徐夏莲辛宏张新军任芳丽王银银常智杰; 关键词：四环素调控 CHIP TGF-Β SMAD2/3 JUNB

c-Cbl介导了hSef的泛素化和降解(英文): 2008年; Sef(similar expression to fgf genes)作为FGF信号通路中可诱导的拮抗分子相继在斑马鱼,小鼠,和人类中被鉴定出来,并进行了相应的功能研究.目前对于Sef蛋白本身稳定性的研究还未见报道.对c-Cbl对Sef稳定性的影响进行了研究.免疫荧光实验表明Sef能够和c-Cbl蛋白在细胞中发生共定位,随后的免疫共沉淀实验证明Sef能够和c-Cbl发生相互作用.体内泛素化实验表明c-Cbl能够使Sef发生明显的泛素化作用.这种泛素化最终导致了Sef本身的剂量依赖性的降解.针对c-Cbl的siRNA表达也使Sef稳定细胞系的表达水平得到恢复.结果表明,c-Cbl对Sef的泛素化及降解可能作为一种调控拮抗因子的蛋白质水平从而最终调节信号通路的一种机制.; 任永明荣知立李智勇程龙李颖华王银银任芳丽David M.Irwin常智杰; 关键词：C-CBL 泛素化降解

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国家自然科学基金(30470888)