河南省科技攻关计划(072102310042)
- 作品数：8 被引量：23H指数：4
- 相关作者：李珊珊轩小燕王丰郑献召李娜更多>>
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- 转化生长因子β1与食管鳞状细胞癌上皮间质转化的关系被引量：6
- 2008年
- 目的探讨食管鳞状细胞癌中转化生长因子β1（TGFβ1）与上皮间质转化的关系以及阻断TGFβ1通路对食管鳞状细胞癌上皮间质转化的影响。方法将化学合成的TGFβ1反义寡核苷酸（TGFβ1—ASODN）转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706，采用RT—PCR、免疫细胞化学及流式细胞术检测阻断前后对TGFβ1活性的影响以及对上皮性标志物E—cadherin及间质性标志物波形蛋白表达的影响；观察TGFβ1—ASODN转染前后细胞形态学的变化；采用细胞划痕试验检测TGFβ1—ASODN转染前后细胞迁移能力的变化。结果转染TGFβ1—ASODN可有效的抑制EC9706细胞中TGFβ1的活性，其mRNA（0．25±0．07）及蛋白（35．07％±1．42％）的表达均明显低于转染前mRNA（0．43±0．09）及蛋白（43．57％±1．77％）的水平（Х^2=13．847及x。=84．120，均P〈0．05）；并提高E—cadherin的表达，抑制波形蛋白的表达。转染后E—cadherin mRNA（0．38±0．09）及蛋白（17．13％±1．45％）的表达明显高于转染前mRNA（0．22±0．06）及蛋白（12．53％±1．31％）的水平（Х^2=0．160及Х^2=40．008，均P〈0．05）；波形蛋白mRNA（0．73±0．07）及蛋白（14．15％±1．46％）的表达低于转染前mRNA（0．89±0．09）及蛋白（17．97％±1．42％）水平（Х^2=0．160及Х^2=21．103，均P〈0．05）。TGFβ1-ASODN转染可明显抑制细胞的运动能力，转染后细胞迁移距离（0．45±0．05）比转染前（0．81±0．11）明显缩小（Х^2=16．854，P〈0．05）。结论TGFβ1可能参与了食管鳞状细胞癌的上皮间质转化，TGFβ1—ASODN可导致食管鳞状细胞癌细胞上皮性标志物E—cadherin表达上调、间质性标志物波形蛋白表达下调、形态发生改变以及细胞移动能力降低，阻断TGFN信号可抑制食管鳞状细胞癌细胞的上皮间质转化。
- 孙洋李珊珊王新华王小军阎爱华
- 关键词：食管肿瘤转化生长因子Β1
- PTEN与食管鳞状细胞癌上皮-间质转化的关系被引量：7
- 2010年
- 目的探讨食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中PTEN表达与上皮-间质转化的关系。方法采用免疫组织化学技术检测95例食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中的PTEN、E-cadherin和vimentin蛋白的表达。结果食管鳞癌组织中PTEN、E-cadherin和vimentin阳性表达率分别为49.5%、40.0%、58.9%,与癌旁正常组织(89.5%、76.8%、29.4%)相比具有明显差异(P<0.05)。食管鳞癌组织中PTEN蛋白与E-cadherin蛋白表达呈正相关(r=0.362,P=0.001),而与vimentin蛋白表达呈负相关(r=-0.208,P=0.018)。结论 PTEN的缺失表达伴随E-cadherin的表达下调和vimentin的表达上调。PTEN可能与食管鳞癌的上皮间质转化有关,并与食管鳞癌的发生及浸润转移相关。
- 王志强轩小燕张红燕高远曾庆汝李珊珊
- 关键词：鳞状细胞癌PTEN蛋白E-CADHERINVIMENTIN
- 转染KISS-1对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的影响被引量：4
- 2010年
- 目的探讨KISS-1基因对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的影响。方法通过脂质体介导将pcD-NA3.1-KISS-1转染人食管鳞癌细胞EC-1,用Western blot法检测转染前、后KISS-1蛋白的表达。将单纯EC-1细胞、稳定转染空质粒的EC-1细胞、稳定转染pcDNA3.1-KISS-1的EC-1分别接种于BALB/c-nude裸鼠,构建裸鼠食管鳞癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积和瘤质量并绘制肿瘤生长曲线;免疫组织化学和半定量RT-PCR技术检测肿瘤组织中KISS-1蛋白和mRNA的表达。结果KISS-1基因转入食管鳞癌EC-1细胞,KISS-1蛋白的表达(1.143±0.218)较空质粒转染组(0.745±0.130)和对照组(0.855±0.184)明显增加(P<0.05),转染KISS-1基因组裸鼠较空质粒转染组和对照组肿瘤生长速度慢,体积(949.42±102.26)mm3与空质粒转染组(1339.82±72.23)mm3和对照组(1384.04±97.07)mm3相比明显减小(P<0.05),瘤体重量(0.498±0.654)g与空质粒转染组(0.638±0.066)g和对照组(0.676±0.108)g相比明显减轻(P<0.05)。结论通过基因转染的方法能表达有活性的KISS-1,并能抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长。
- 李娜李娜李珊珊张红艳轩小燕郑献召王丰
- 关键词：KISS-1转染食管鳞癌裸鼠
- NF-κBp65对食管鳞癌细胞上皮间质转化的影响
- 2010年
- 目的:探讨NF-κBp65对食管鳞癌细胞EC9706上皮间质转化的影响。方法:NF-κBp65反义寡核苷酸(NF-κBp65-ASODN)转染食管鳞癌细胞EC9706,采用RT-PCR、免疫细胞化学及流式细胞术检测NF-κBp65-ASODN转染前后EC9706细胞中NF-κBp65、上皮性标志物E-cadherin及间质性标志物Vimentin mRNA及蛋白表达的变化,观察转染前后细胞形态学的改变,细胞划痕实验检测转染前后细胞运动能力的变化。结果:转染NF-κBp65-ASODN的EC9706细胞,其NF-κBp65 mRNA(0.14±0.06)及蛋白(免疫细胞化学:11.33±1.40%,流式细胞术:11.78%)的表达低于转染前(mRNA:0.45±0.05;蛋白:免疫细胞化学:17.17±1.66%,流式细胞术:15.76%)(P<0.05),上皮性标志物E-cadherin mRNA(0.36±0.08)及蛋白(免疫细胞化学:17.58±1.86%,流式细胞术:14.98%)的表达高于转染前(mRNA:0.22±0.06;蛋白:免疫细胞化学:14.42±1.63%,流式细胞术:12.22%)(P<0.05),间质性标志物Vimentin mRNA(0.75±0.07)及蛋白(免疫细胞化学:16.00±1.41%,流式细胞术:12.90%)的表达低于转染前(mRNA:0.89±0.09;蛋白:免疫细胞化学:19.50±0.89%,流式细胞术:17.76%)(P<0.05)。转染NF-κBp65-ASODN后,EC9706细胞形态发生改变,细胞迁移距离(0.45±0.08)较转染前(0.81±0.11)明显缩短(P<0.05)。结论:NF-κBp65可能参与食管鳞状细胞癌的上皮转化。NF-κBp65-ASODN转染可抑制食管鳞癌细胞上皮间质转化,上皮性标志物E-Cadherin表达上调、间质性标志物Vimentin表达下调,且细胞形态发生改变、细胞运动能力降低。
- 张红燕王小军王丰王新华孙洋李珊珊
- 关键词：上皮间质转化NF-ΚBP65食管鳞癌
- 体外转染KISS-1基因对食管鳞癌细胞EC-1侵袭及增殖能力的影响被引量：4
- 2009年
- 目的观察KISS-1基因对食管鳞癌细胞EC-1侵袭及增殖能力的影响，探讨KISS-1基因与食管鳞癌生物学行为的关系。方法检测KISS-1在EC-1、Eca109、EC9706和TE-1四种食管癌细胞株中的表达；利用脂质体介导在体外将KISS-1基因转染人食管鳞癌细胞EC-1，利用Western blot和RT-PCR方法检测转染之后KISS-1表达的改变，并采用Boyden小室体外侵袭实验及Mrrr、软琼脂克隆形成实验，观察KISS-1对食管鳞癌细胞侵袭及增殖能力的影响。结果4种食管癌细胞株的Western blot和RT-PCR检测结果显示：EC-1中KISS-1蛋白（0．715±0．109）及mRNA（0．670±0．176）表达均最低；转染之后Western blot和RT-PCR结果显示：KISS-1蛋白和mRNA在转基因组的表达分别为1．143±0．218和0．877±0．162，均显著高于转空质粒组（0．745±0．130，0．685±0．128；t=3．850，2．481，P均〈0．05）和对照组EC-1细胞（0．855±0．184，0．677±0．138；t=2．275，2．306，P均〈0．05）；Boyden小室检测细胞体外侵袭力实验发现转基因组在培养24、48和72h后的穿膜细胞数分别为91．8±11．7，117．8±11．1和139．2±11．8，均显著低于转空质粒组（118．1±14．7，141．7±13．2，162．2±22．7；t=3．153，4．215，3．569，P值均〈0．01）和对照组EC-1细胞（112．2±15．6，138．1±13．0，162．3±14．0；t=4．154，3．797，2．702，P值均〈0．05）。MTT检测结果显示，转基因组细胞在培养48h和72h后的增殖能力分别为0．517±0．127和0．394±0．137，与转空质粒组（0．636±0．186，0．513±0．150；t=2．054，2．709，P值均〈0．05）和对照组（0．646±0．135，0．511±0．153；f=2．276，2．205，P值均〈0．05）相比，细胞生长受到明显抑制；克隆形成实验结果显示，转基因组细胞的克隆形成数为157．2±36．4，明显低于转空质粒组（236．3±78．1；t=3．441，P〈0．01）和对照组（242．5±48．6；t=2．250�
- 李娜李娜李珊珊张红燕轩小燕郑献召王丰
- 关键词：食管肿瘤转染细胞系肿瘤KISS-1基因
- 食管鳞癌组织中MMP-2和E-cadherin的表达及其意义被引量：4
- 2007年
- 目的探讨食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706中MMP-2和E-cadherin的表达及其与食管鳞癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化S-P法检测100例食管鳞癌组织及食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706中MMP-2和E-cadherin蛋白的表达,应用RT-PCR技术检测两株细胞系中MMP-2 mRNA和E-cadherin mR-NA的表达。结果食管鳞癌组织中MMP-2蛋白阳性率明显高于正常黏膜组织(P<0.01),且与癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05);E-cadherin蛋白在食管鳞癌组织中阳性率明显低于正常黏膜组织(P<0.01),与癌组织分化程度、有无淋巴结转移呈负相关(P<0.05),与浸润深度无明显相关性(P>0.05);MMP-2和E-cadherin在食管鳞癌中的表达呈负相关(P<0.01);细胞系中MMP-2 mRNA和E-cadherin mRNA的表达有显著性差异(P<0.01)。结论食管鳞癌组织中MMP-2呈高表达;E-cadherin呈低表达,二者对食管癌的发生、浸润转移具有相反的调节作用;联合检测其变化可更准确预测食管癌的恶性生物学行为。
- 郑献召李珊珊轩小燕李娜王丰
- 关键词：食管鳞癌MMP-2E-CADHERIN
- pcDNA3.1-KISS-1真核表达载体的构建及其对EC1细胞转移的抑制作用被引量：1
- 2009年
- 目的克隆人食管组织KISS-1基因及构建真核表达载体pcDNA3.1-KISS-1,并观察其在食管癌EC1细胞中的表达及对EC1细胞侵袭及运动能力的影响。方法从人正常食管组织中提取总RNA,设计特异性引物,通过逆转录-聚合酶联链反应(RT-PCR)扩增KISS-1基因cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-KISS-1,酶切鉴定及测序分析后用Lipofectamine脂质体将其转染到食管癌细胞,Westernblot法检测其蛋白在EC1细胞中的表达情况;应用细胞运动实验及重建基底膜侵袭实验分析KISS-1表达对EC1细胞运动和侵袭能力的影响。结果成功克隆了人KISS-1基因全长编码序列,构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-KISS-1,脂质体转染后KISS-1基因在EC1细胞中成功表达;转基因组细胞的运动能力(174.6±14.24)和体外穿越重建基底膜的能力(90.44±12.83)明显低于转空质粒组(222.6±30.08,110.22±15.87)和对照组EC1细胞(234.40±14.72,124.78±18.14)(P均<0.05)。结论重组pcDNA3.1-KISS-1真核表达质粒构建成功,并且KISS-1对食管癌细胞的侵袭和运动能力具有抑制作用。
- 李娜李娜李珊珊张红艳轩小燕郑献召王丰
- 关键词：KISS-1基因真核表达载体食管癌细胞株
- KISS-1与基质金属蛋白酶9在食管鳞癌中的作用及相关性
- 2009年
- KISS-1是1996年克隆的一个新的肿瘤转移抑制基因，有文献报道其可能是通过降低基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达，抑制细胞的浸润和转移。关于KISS-1与食管鳞癌浸润转移的关系，国内外鲜见相关报道。
- 李娜李珊珊张红艳轩小燕郑献召王丰闫爱华
- 关键词：基质金属蛋白酶9KISS-1食管鳞癌肿瘤转移抑制基因癌浸润转移抑制细胞
