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NaCl胁迫下拟南芥Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的克隆及序列分析被引量：12: 2005年; 以NaCl胁迫处理的拟南芥幼苗叶片为材料,用TRIzol一步法RNA提取试剂盒抽提总RNA,通过RT-PCR方法和DNA序列测定,证实获得了拟南芥Na+/H+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的cDNA克隆。该cDNA全长1 617 bp,包括538个氨基酸编码区和1个终止密码,具有多个物种Na+/H+逆向转运蛋白基因的高度保守序列氨氯砒嗪脒(amiloride)的结合位点(LFFIYLLPPI)。序列同源性分析结果显示,该cDNA片段与原序列的同源性高达99.75%,与同科芸薹属油菜的同源性为89.00%,但与不同科植物的同源性较低,仅为60%~70%,表明该基因在进化上存在多样性,但它们都具有氨氯砒嗪脒结合位点,对Na+具有高度专一性,对植物的耐盐性起着重要作用。; 张俊莲张金文陈正华王蒂; 关键词：拟南芥 NA^+/H^+逆向转运蛋白

抗生素对根癌农杆菌的抑菌效果及对烟草叶片分化的影响被引量：17: 2006年; 研究了卡那霉素和6种头孢霉素(头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢唑啉钠,头孢拉定和头孢他啶)对烟草叶片分化及对根癌农杆菌LBA4404和烟草转化植株的抑制效果。结果发现:不同烟草品种对卡那霉素的耐受性差异较大,品种CV为受体材料时,叶分化和茎段根再生的适宜浓度为50mg/L。品种T12为受体材料时,叶分化的适宜浓度为100mg/L,而茎段根再生则为200mg/L;头孢曲松钠和头孢噻肟钠对根癌农杆菌LBA4404的抑制效果好,并可使继代3次(60d)的烟草转化植株脱菌;不同浓度的6种头孢类抗生素对烟草叶片的分化影响不大。从头孢类抗生素对农杆菌和烟草转化植株的抑制作用、外植体的分化影响来考虑,在用农杆菌LBA4404作为介导菌株时,可选用200mg/L的头孢曲松钠或头孢噻肟钠来抑菌。; 王丽张俊莲王蒂张金文王沛雅; 关键词：抗生素农杆菌烟草抑菌分化

农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化体系优化研究被引量：12: 2006年; 以甘肃主栽品种的茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性出芽的影响,初步建立了马铃薯品种“陇薯3号”和“台湾红皮”的遗传转化体系并获得了转化植株。卡那霉素生根筛选和PCR鉴定结果表明,再生的转化植株假阳性率比较高,要获得预期的转基因植株群体需加大遗传转化工作中转基因植株的数量。; 贾笑英路平王蒂; 关键词：马铃薯根癌农杆菌茎段

马铃薯损伤诱导型启动子Wun1基因的克隆及其GFP表达活性被引量：7: 2006年; 通过聚合酶链式反应(PCR),以马铃薯基因组DNA为模板,根据已报道Wun1序列设计了一对特异引物,在优化的PCR反应条件下扩增出了Wun1基因片段,通过序列分析与文献报道的碱基序列有96.86%的同源性,该基因已登录到GenBank(No.AY803296)。以pBIPG(携带GFP基因)的质粒DNA为模板,通过PCR技术亚克隆到了源自水母(Aequorea)大小为756bp的绿色荧光蛋白(GFP)基因,与已知序列同源率为100%。利用GFP基因作为报告基因,构建了用于比较鉴定所克隆启动子活性的pBIG(35S-GFP)和pBIWG(Wun1-GFP)两个植物表达载体,采用基因枪法进行对洋葱表皮细胞的遗传转化,检测Wun1启动子在受体细胞中调控基因表达的活性,结果表明克隆到的Wun1启动子活性强于组成型表达的35S启动子,GFP瞬时表达的分析方法也让我们有效的筛选到用于进行马铃薯抗病育种的调控元件。; 贾笑英向云张金文王蒂; 关键词：GFP基因基因枪法启动子活性分析

大肠杆菌glgC基因的克隆及原核表达被引量：2: 2006年; 以大肠杆菌BL21染色体DNA为模板,根据glgC基因的全序列设计了1对引物,在优化的PCR反应条件下扩增出了glgC基因片段,测序结果显示该片段大小为1296 bp,编码432个氨基酸残基。将该基因克隆到原核表达载体pET-28a-c(+)中,重组载体pET-glgC转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定,得到了与理论推算的glgC基因表达产物分子质量(约53 kD)相符的特异蛋白条带。; 贾笑英张金文王蒂; 关键词：克隆原核表达

我国马铃薯育种方式的变迁及其转基因育种研究进展被引量：39: 2005年; 我国马铃薯品种选育经历了引种鉴定选育、杂交选育、细胞工程选育和基因工程选育4个阶段,培育出大量的各种类型品种,其中基因工程育种始于近年,已在抗病毒病、抗细菌和真菌病、品质改良和提高抗逆性方面取得了一定的进展。; 张俊莲王蒂; 关键词：马铃薯育种转基因

植物Na^+/H^+逆向转运蛋白与植物耐盐性的研究进展被引量：17: 2005年; 植物通过外排Na+和液泡区隔化Na+来减少Na+的毒害,这一过程由Na+/H+逆向转运蛋白来完成。通过概述植物Na+/H+逆向转运蛋白的基本特征、与植物耐盐性的关系及其分子生物学研究现状,为阐明植物复杂的盐胁迫机理和利用基因工程手段提高植物耐盐性奠定了基础。; 张俊莲张金文陈正华王蒂; 关键词：NA^+/H^+逆向转运蛋白植物基因耐盐性

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国家高技术研究发展计划(2004AA241132)