国家自然科学基金(81170381)
- 作品数：8 被引量：8H指数：1
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- miR-291b-3p在肝脏脂质代谢中的作用机制研究
- <正>目的:miR-291b-3p是miR-290家族中的一员,在胚胎发育过程中起重要作用,而在脂代谢中的作用尚未见报道,本研究旨在阐明其在肝脏脂质代谢中的作用及其机制。方法:首先在NCTC1469细胞内通过油酸/棕榈酸...
- 孟祥宇郭君李萌黄秀清黎健
- 文献传递
- 在HepG2细胞中11β-HSD1通过SREBP1调控脂代谢
- <正>目的:通过在HepG2细胞中高低表达Ⅰ型羟基固醇脱氢酶(11beta-hydroxystercid dehydrogenase type 1,11β-HSD1),分析其影响脂代谢的分子机制。方法:1、用肿瘤坏因子(...
- 徐杰李国平唐蔚青黎健
- 文献传递
- 肝脏胰岛素受体急性敲除对载脂蛋白B和三酰甘油分泌的影响
- 2013年
- 目的分析肝脏组织特异性的胰岛素信号急性缺失对载脂蛋白B和三酰甘油分泌的影响。方法应用Cre-LoxP系统原理，在重组酶基因的上游插入肝组织特异性白蛋白基因启动子，以此构建组织特异性表达的腺病毒。扩增纯化后的腺病毒经胰岛素受体Floxed小鼠尾静脉注射，分别在注射2d、4d和6d后收集小鼠血浆，测定新生载脂蛋白B和极低密度脂蛋白三酰甘油分泌速率，抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量，并用免疫印迹法分析胰岛素受体和脂代谢相关蛋白在肝脏内的表达。结果小鼠在注射含重组酶的腺病毒2d、4d和6d后，胰岛素受体表达依次降低30．50％（P〈0．05）、60．12％（P〈0．01）和99．54％（P〈0．001），极低密度脂蛋白三酰甘油的分泌速率分别降低20．43％（P〈0．05）、33．63％（P〈0．05）和44．21％（P〈0．01）；下调了固醇调控结合蛋白1和脂肪酸合成酶以及极低密度脂蛋白形成相关蛋白的表达，但不影响新生载脂蛋白B100的分泌和肝脏脂质含量；而在含重组酶的腺病毒注射6d后新生载脂蛋白B48升高约35．07％（P〈0．05）。结论肝脏胰岛素信号急性缺失降低极低密度脂蛋白中三酰甘油的分泌速率并呈现时间依赖性，揭示小鼠肝脏分泌较小的极低密度脂蛋白颗粒，这种变化可能和肝脏内脂肪酸的合成速度下降有关。
- 李国平唐蔚青隋靖喆黎健陈保生
- 关键词：肝细胞脂蛋白类VLDL载脂蛋白B类
- miRNA-152和miRNA-200s在IL-6诱导的肝胰岛素抵抗中的作用
- 2013年
- 目的胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要发病机制之一。microRNA（miRNA）是-簇长度约为20—24个核苷酸的单链非编码的小分子RNA。它们在转录后水平对下游靶基因进行调控。miRNA广泛表达于各种组织器官中，对组织器官的功能和发育具有重要的作用。miRNA参与糖尿病及其并发症的发生。它们调控胰岛素的合成、分泌、胰岛素信号通路和糖脂代谢等过程。目前，与肝胰岛素抵抗相关的miRNA报道尚少。研究证明miRNA．152和miRNA-200s与肿瘤的发生密切相关，但miR—NA-152和miRNA-200s是否在肝胰岛素抵抗发生中起重要作用？目前尚不清楚。本研究通过建立IL-6诱导的胰岛素抵抗的细胞和动物模型，分析细胞或肝脏组织中miRNA-152和miRNA-200s的表达变化，探讨miRNA-152和miRNA-200s在IL-6诱导的肝胰岛素抵抗中的作用，明确miRNA-152和miRNA．200s调节P13K／AKT信号通路的分子机制。方法（1）以12周龄db／db小鼠作为胰岛素抵抗模型小鼠，收集小鼠肝脏组织，用miRNA芯片分析肝脏中miRNA表达谱变化，并用Real—timePCR进一步验证芯片结果。（2）10斗∥LIL-6处理小鼠肝细胞系NCTCl469和C57BL／6小鼠原代肝细胞24h，建立胰岛素抵抗的细胞模型，检测P13K／AKT信号和miRNA．152、miRNA-200s表达水平；在c57BL／6J小鼠背部皮下埋泵缓释注射IL-61周，建立IL-6诱导的胰岛素抵抗动物模型，观察肝脏中P13K／AKT信号通路和miRNA-152、miRNA-200s表达水平。（3）合成miRNA-152、miRNA-200smimics和inhibitors，并转染入NCTCl469细胞，用Real—timePCR测定细胞中miRNA-152和miRNA．200S的水平，并且检测P13K／AKT信号通路和糖原水平。（4）用生物信息学方法预测miRNA-200s的下游靶基因；以Westernblot分析miRNA-200s对下游基因FOG2和PTEN表达的影响。（5）利用siRNA干扰FOG2和lrFEN的表达，检测P13K／AKT信号通路和糖原合成水平。结果（1）与对照组小鼠�
- 窦琳黎健
- 关键词：IL-6PTENP13KAKT信号通路糖原合成
- 树鼩载脂蛋白AV系列突变体的细胞内定位分析
- <正>目的研究不易感动脉粥样硬化动物-树鼩载脂蛋白AV基因不同结构域对细胞内定位的影响。方法前期我们实验室利用快速扩增cDNA末端技术成功获得了该基因的cDNA全长,该基因有两个转录本,分别为1948 bp和1937 b...
- 李国平王艳满永王抒黎健陈保生
- 关键词：动脉粥样硬化基因突变体细胞定位
- 文献传递
- Ⅰ型11β羟基类固醇脱氢酶在肿瘤坏死因子-α诱导的胰岛素抵抗中的作用被引量：7
- 2016年
- 目的探讨Ⅰ型11β羟基类固醇脱氢酶（11β—HSD1）在肿瘤坏死因子-α（TNFα）诱导的胰岛素抵抗中的作用机制。方法筛选适宜浓度和时间的TNFα处理HepG2细胞，分别用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）技术分析TNFα对11β—HSD1，糖皮质激素受体（GR），磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）mRNA和蛋白表达的影响；用葡萄糖检测试剂盒检测糖异生的水平，肌／肝糖原检试剂盒和高碘酸-希夫（PAS）染色法检测细胞糖原合成的水平；分析AKT／GSK胰岛素信号通路的表达；并用11β-HSD1特异性抑制剂BVT2733预处理HepG2细胞，检测AKT／GSK信号通路、糖异生和糖原水平。结果从0μg／L到20μg／L随着TNFα处理浓度的升高11β-HSD1表达增加，并呈剂量依赖效应。在10μg／L TNFα处理24h这一条件处理下，GR表达升高，糖异生水平升高，其相关基因PEPCK、G6Pase也表达升高；p—AKT，p-GSK水平降低，糖原合成水平降低。11β-HSD1特异性抑制剂BVT2733预处理HepG2细胞后逆转了上述TNFα的作用。结论在HepG2细胞中，11β-HSD1参与了TNFα诱导的胰岛素抵抗，其抑制剂可以显著提高胰岛素敏感性。
- 徐杰李国平唐蔚青满永王抒黎健
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α糖皮质激素类胰岛素
- 树鼩载脂蛋白AV的原核表达纯化
- ：构建树鼩载脂蛋白AV原核表达载体并利用His标签纯化该蛋白.方法：从树鼩肝细胞中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一链.设计载脂蛋白AV特异性引物,含有6个保护碱基和XhoI和EcoRI酶切位点序列.以cDNA第一链...
- 王艳李国平满永王抒黎健
- 关键词：动物模型原核表达蛋白纯化
- miR-291b-3p在脂质代谢中的作用及其机制
- 2013年
- 目的探讨在db／db小鼠模型中miR-291b-3p的表达并进一步探讨其在NCTCl469细胞系脂质代谢中的作用及其机制。方法首先通过qRT—PCR检测正常C57BIM6小鼠及db／db小鼠肝脏中miR-291b．3p的表达水平，wlesternblot检测肝脏中脂质代谢分子如FAS、LDLR、SREBPl等的表达。其次通过对NCTCl469细胞转染mimics48h建立miR-291b-3p高表达细胞模型，转染inhibitor48h建立miR-291b-3p低表达细胞模型，qRT—PCR检测模型的建立，油红O染色检测两种细胞模型中脂质蓄积情况，Westernblot检测细胞模型内脂质代谢通路分子的表达情况，酶法检测细胞内甘油三酯含量。结果与正常C57BIJ6小鼠相比，db／db小鼠肝脏中miR-291b-3p表达明显升高，FAS、LDLR、SREBPl等的表达明显上升；NCTCl469细胞中转染mimics可导致细胞内miR-291b．3p高表达，脂代谢通路激活，细胞油红O染色增强，甘油三酯含量增多；转染inhibitor可明显降低细胞内miR-291b-3p的表达，伴随脂代谢通路被抑制，细胞内油红O染色减弱，细胞内甘油三酯含量减少。结论miR-291b-3p参与NCTCl469细胞内脂质代谢，其机制可能与靶向多个脂代谢基因有关。
- 孟祥宇郭君黄秀清李萌唐蔚青黎健
- 关键词：MICRORNA脂代谢紊乱非酒精性脂肪肝
- G蛋白偶联受体120缓解肝X受体诱导的HepG2细胞甘油三酯积聚
- ：观察GPR120激活在LXR诱导的肝细胞脂肪性变中的作用,为防治脂代谢紊乱及相关疾病提供新线索.方法：用半定量PCR的方法检测人肝癌细胞系HepG2的GPR120表达情况;分别以50μM和100μM的GW9508(GP...
- 李萌唐蔚青黎健
- 关键词：肝X受体人肝癌细胞
- G蛋白偶联受体120通过AMPK信号通路缓解肝x受体诱导的HepG2细胞甘油三酯积聚
- 2013年
- 目的拟观察G蛋白偶联受体120（GPRl20）激活在肝x受体（LXR）诱导的肝脏脂肪性变中的作用，为防治脂代谢紊乱及相关疾病提供新线索。方法将人肝癌细胞系HepG2进行如下分组：对照组、GW9508（GPRl20的激动剂）处理组、T0901317处理组、GW9508预处理＋T0901317处理组，酶学法测定细胞内甘油三酯水平；实时荧光定量PCR检测细胞SREBPl．c、SCDl、
- 李萌孟祥字郭君徐杰唐蔚青黎健
- 关键词：肝X受体
