国家自然科学基金(30860285)
- 作品数：7 被引量：25H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 早期激素性股骨头缺血性坏死模型的建立及半胱天冬酶3活性测定被引量：15
- 2010年
- 背景:有研究表明骨细胞凋亡与激素性股骨头缺血性坏死的发病机制密切相关,而活化的半胱天冬酶3可作用于其他半胱天冬酶家族成员,使蛋白酶级联反应放大,最终导致细胞凋亡。但半胱天冬酶3参与的骨细胞凋亡与早期激素性股骨头缺血性坏死的相关研究则罕见报道。目的:采用大剂量激素联合强迫兔直立负重的方法建立早期激素性股骨头缺血性坏死模型并测定骨细胞半胱天冬酶3活性。方法:将4月龄新西兰大白兔随机分成模型组和对照组。模型组每周3次臀肌注射地塞米松,每日强迫兔直立1h,对照组注射等量生理盐水。分别于3,6,9和12周处死动物,取其双侧股骨头,光镜及电镜下观察组织病理学改变,应用对-硝基酰苯胺比色法测定骨细胞半胱天冬酶3活性。结果与结论:给药3周后,模型组光镜下可见脂肪细胞肥大和增多,骨髓间充质干细胞及造血干细胞数量相对减少;给药6周后,模型组空骨陷凹率均大于对照组(P<0.05);给药9周后,模型组出现骨小梁变细、断裂,电镜下见模型组部分骨细胞体积缩小,染色质浓集,核固缩和碎裂等凋亡特征。给药6周后,模型组骨细胞半胱天冬酶3活性高于对照组(P<0.05)。实验以此推论采用大剂量激素联合强迫兔直立负重可以诱导建立早期激素性股骨头缺血性坏死模型,半胱天冬酶3参与的骨细胞凋亡可能与早期激素性股骨头缺血性坏死发病过程有关。
- 胡峰赵劲民李晓峰梁晓南陆荣斌
- 关键词：激素性股骨头坏死骨细胞半胱天冬酶3骨组织工程
- 兔股骨头蛋白质双向电泳样品制备方法的比较被引量：2
- 2010年
- 蛋白质组学是目前生物医学研究的热点领域之一，已经广泛应用于疾病的发病机制、诊断、治疗等方面的研究。双向电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术方法。兔股骨头坚硬而且基质成分复杂，我们通过对几种制备方法进行比较，以确定更适合于骨组织样本蛋白质提取的方法。
- 胡峰赵劲民李晓峰梁晓南陆荣斌
- 关键词：蛋白质组学双向电泳股骨头蛋白质提取发病机制
- 膜联蛋白A1生理功能的研究进展被引量：3
- 2012年
- 膜联蛋白（Annexins）是一类结构相关钙依赖的磷脂结合蛋白超家族,在结构上均具有保守中心结构域和承担独特功能的N端结构域,中心结构域延伸为C-末端结构,由4组（在Annexin A6为8组）、每组70个氨基酸残基组成的重复序列,每个重复序列均含有钙离子和磷脂结合位点[1]。Annexins按在生物界的分布分为5组,脊椎动物为A组,
- 梁博伟赵劲民殷国前胡峰
- 关键词：膜联蛋白A1生理功能
- 兔膜联蛋白A1基因短发夹RNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率的鉴定被引量：1
- 2012年
- 背景:膜联蛋白A1参与细胞凋亡的调控。目的:针对兔膜联蛋白A1基因构建短发夹RNA慢病毒载体,并检测其对成骨细胞的沉默效率。方法:针对兔膜联蛋白A1基因设计RNA干扰靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与BamHI和EcoRI双酶切后的pGLV/H1/GFP载体连接成pGLV-shANXA1,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。pGLV-shANXA1和pGLV/helper-1、pGLV/helper-2、pGLV/helper-3共转染293FT细胞包装产生慢病毒颗粒LV-shANXA1,并测定其滴度,随后将LV-shANXA1感染兔成骨细胞。结果与结论:经PCR和测序证实构建片段大小及DNA序列与目标序列一致,shANXA1片段完全正确插入慢病毒载体pGLV/H1/GFP中。包装浓缩慢病毒颗粒LV-shANXA1的滴度为3.8×108TU/L。经嘌呤霉素筛选后,感染复数为50时,LV-shANXA1对成骨细胞感染效率为80%;感染复数为100时,感染效率为95%。Real-time PCR和Western blot检测显示,LV-shANXA1-901对膜联蛋白A1基因的沉默效率最高,在感染复数为50时,沉默效率可达71.2%。表明实验成功构建的兔膜联蛋白A1基因短发夹RNA慢病毒载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。
- 梁博伟潘新元赵劲民殷国前胡峰
- 关键词：膜联蛋白A1短发夹RNA慢病毒载体RNA成骨细胞
- 沉默膜联蛋白A1基因影响兔骨髓间充质干细胞的增殖及成骨分化能力被引量：4
- 2012年
- 背景:膜联蛋白A1蛋白参与细胞的增殖和分化的调控。激素性股骨头坏死与骨髓间充质干细胞增殖和分化能力的改变相关。目的:观察沉默膜联蛋白A1基因对兔骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力的影响。方法:将新西兰大白兔的骨髓间充质干细胞分离培养后分为RNA干扰组,用携带针对膜联蛋白A1基因的短发夹RNA慢病毒载体LV-shANXA1感染骨髓间充质干细胞下调膜联蛋白A1基因的表达;阴性对照组,用携带无义基因序列的慢病毒载体LV-shANXA1-NC感染骨髓间充质干细胞;空白对照组,不加任何干预措施。结果与结论:纯化后的骨髓间充质干细胞CD44和CD105表达阳性率分别为97.2%和95.8%,而CD45阳性率为2.5%。经嘌呤霉素筛选后,感染复数为50时,LV-shANXA1对骨髓间充质干细胞感染效率为80%;感染复数为100时,感染效率为95%。实时PCR和Western blot检测显示感染复数为50时,LV-shANXA1对膜联蛋白A1基因的沉默效率效率可达72.4%以上。膜联蛋白A1表达下调后,骨髓间充质干细胞出现明显生长抑制,在随后成骨分化诱导后,细胞的碱性磷酸酶染色阳性率和碱性磷酸酶活性明显降低,且茜素红染色呈阴性反应。表明沉默膜联蛋白A1基因降低骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力,这可能是激素性股骨头坏死发病机制之一。
- 梁博伟潘新元赵劲民殷国前胡峰
- 关键词：膜联蛋白A1基因沉默骨髓间充质干细胞成骨分化激素性股骨头缺血性坏死
- 膜联蛋白A1在兔骨髓间充质干细胞体外诱导成骨和成脂早期的表达被引量：1
- 2012年
- 背景:骨髓间充质干细胞分化过程中膜联蛋白A1表达变化的研究报道各有不同看法。目的:分析兔骨髓间充质干细胞在体外诱导成骨和成脂过程中膜联蛋白A1基因的表达变化。方法:应用全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,分别加入含成骨诱导剂、成脂诱导剂及不添加任何诱导剂的培养基进行培养。结果与结论:膜联蛋白A1基因在成骨诱导过程中与未诱导细胞相比有明显下调趋势,差异有显著性意义(P<0.01),而在成脂诱导剂中则为上升(P<0.01)。成骨诱导剂对细胞生长存在抑制作用并增加细胞凋亡(P<0.01),而成脂诱导剂对细胞生长与凋亡作用较小(P>0.05)。因此排除了诱导剂对细胞的作用之后,推测膜联蛋白A1基因可能与骨髓间充质干细胞体外向脂肪细胞分化存在一定关系,但尚不能肯定其在成骨分化中的作用。
- 潘新元梁博伟赵劲民殷国前
- 关键词：膜联蛋白A1骨髓间充质干细胞荧光定量RT-PCR干细胞
- 低剂量激素诱导股骨头缺血性坏死模型的建立被引量：3
- 2011年
- 背景:激素性股骨头缺血性坏死的发病机制尚未明确。目的:单纯应用低剂量激素作用于新西兰大白兔,建立激素性股骨头缺血性坏死模型并观察造模效果。方法:将30只新西兰大白兔随机分为2组。实验组每周经臀肌注射4mg/kg甲泼尼龙琥珀酸钠,对照组于相同时间点注射等量生理盐水。同时迫使动物直立进食、饮水,以增加股骨头的负重。结果与结论:肌注甲泼尼龙琥珀酸钠后,白兔出现不同程度的精神萎靡、活动减少、体质量减轻等。给药4周后,兔血清总三酰甘油及低密度脂蛋白增高、高密度脂蛋白降低(P<0.05);血清碱性磷酸酶及总胆固醇分别在给药6,8周后明显增高(P<0.05)。苏木精-伊红染色显示;给药4周后,兔股骨头骨髓腔内脂肪细胞体积增大,数量增多;给药6周后,空骨陷窝率增大;给药8周后,骨小梁稀疏变细、结构紊乱,软骨区可见死骨形成及部分性坏死和软骨面塌陷。说明单纯注射低剂量激素可以复制出典型的激素性股骨头缺血性坏死模型。
- 刘伟赵劲民苏伟李晓峰秦义武
- 关键词：骨坏死激素缺血
