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大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析被引量：7: 2007年; [目的]了解本院产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌分布及耐药特点。[方法]采用NCCLS推荐的纸片扩散法对我院从临床标本中分离的107株大肠埃希菌和95株肺炎克雷伯菌进行ESBL的确诊试验,并应用ATB G-5药敏卡对20种抗生素进行药敏试验。[结果]107株大肠埃希菌分离到产ESBLs菌株44株,检出率为41.12%,95株肺炎克雷伯菌分离到产ESBLs菌株35株,检出率为36.84%。ESBLs检出模式以单用头孢噻肟、头孢噻肟/棒酸一组为底物阳性率最高,分别占68.18%和62.85%;单用头孢他定,头孢他定/棒酸一组为底物,会造成大肠埃希菌68.18%和肺炎克雷伯菌62.85%的漏检。产ESBLs菌株对青霉素类、头孢菌素类的耐药率为55%～100%;但对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率大于77%,对亚胺培南,美洛培南的敏感率均大于91%。[结论]本院分出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs严重,且产ESBLs菌多呈多重耐药。建议各地根据感染菌株的特点及三代头孢菌素的使用情况,采用多种底物检测ESBLs。碳青酶烯类应作为治疗产ESBLs菌株的首选药物。; 黄烈聂署萍张银辉韦洁宏陆学东; 关键词：大肠埃希菌肺炎克雷伯菌耐药

MRFQ SYBR Green I-PCR结合融解曲线快速检测产ESBLs菌耐药基因被引量：1: 2009年; 目的探讨SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法快速检测常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因的可行性。方法选取经测序验证携带有tem、shv、ctx-m-1组、ctx-m-9组耐药基因的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作为阳性菌株,建立细菌耐药基因SYBR Green I实时荧光定量多重PCR检测体系,这四种耐药基因的扩增产物片段长度和融解温度(Tm值)都不同,可通过结合融解曲线分析加以区别。用此体系检测110株大肠埃希菌和94株肺炎克雷伯菌,根据特异性Tm值的有无和差别判断是否携带有耐药基因及携带耐药基因型别,结果与耐药表型、琼脂糖电泳、测序结果对照。结果经SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析,分别有47株(42.7%)大肠埃希菌和34株(36.2%)肺炎克雷伯菌携带有这四种常见的ESBLs耐药基因,与表型确证实验和电泳结果比较达到100%的一致性;根据Tm值的不同,对耐药基因进行鉴别,携带单个耐药基因菌株的检测与电泳结果和测序结果比较达到100%的一致性;对携带多个耐药基因菌株的检测不能达到较好的分辨性。结论SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法可以快速筛查常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因,对携带单个耐药基因的细菌的基因型能进行准确鉴定。这对指导临床医生合理使用抗生素进行临床治疗和对耐药细菌的流行病学监测具有重要价值。; 夏成静陆学东黄烈刘键杨来智王琼; 关键词：SYBR

葡萄球菌大环内酯类耐药基因检测及其意义被引量：4: 2006年; 目的了解葡萄球菌对大环内酯类药物表型耐药性和耐药基因以及分析大环内酯类耐药基因与诱导克林霉素耐药的相关性。方法用K—B纸片法检测2004—2005年分离的136株葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性，依据NCCLS2004年发布M100-S14的D-试验方法，测定红霉素对克林霉素的诱导耐药率；应用聚合酶链反应（PCR）法检测MsrA、Vgb、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、MefA／E、ereA、ereB10种耐药基因。结果136株葡萄球菌共栓出MsrA、Sat4、ermC、mphA、ereB5种耐药基因，耐药基因总检出率为80，15％（109／136）。MRSA、MRCNS、MSSA、MSCNS耐药基因的检出率分别为81．25％（13／16）、89，47（68／76）、73，08％（19／26）、50，00％（9／18），耐药基因主要存在于MRCNS。葡萄球菌对红霉素和克林霉素同时耐药株占43．38％，红霉素耐药而克林霉素敏感株占37，50％；D-试验阳性率为25，00％（34／136），阳性株数占红霉素耐药而克林霉素敏感株的66，67％（34／51）。耐药基因MsrA、Sat4、ermC、mphA、ereB的阳性率分别为24．26％、41．91％、56，62％、1．47％、18．38％，其中核糖体甲基化酶基因ermC是诱导克林霉素耐药的主要基因。结论ermC是诱导克林霉素耐药的主要基因，临床微生物实验室应同时开展D试验和耐药基因检测，以指导临床更加合理使用抗菌素。; 林广城黄烈刘键韦洁宏杨来智陆学东; 关键词：葡萄球菌红霉素克林霉素耐药基因诱导耐药

葡萄球菌中诱导型克林霉素株的耐药性分析被引量：1: 2006年; 目的了解葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性及其以红霉素诱导克林霉素耐药的发生率。方法用K-B法检测葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,依据NCCLS 2004年发布M100-S14的D-试验方法,测定红霉素对克林霉素的诱导耐药表型。结果耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)对红霉素及克林霉素同时耐药分别占80%和54.05%。D-试验阳性占所检测葡萄球菌的26.12%,占红霉素耐药而克林霉素敏感菌株的68.62%。红霉素耐药而克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中,D-试验阳性即对克林霉素具有诱导耐药性者分别为75%和66.66%。结论临床微生物室应开展D-试验,检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性,指导临床医生更合理使用抗生素。; 黄烈杨来智张银辉谭明芳陆学东; 关键词：葡萄球菌属红霉素克林霉素耐药

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌产ESBLs表型与基因型分析被引量：38: 2009年; 目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌发生率及主要基因型分布特点。方法采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散法对临床标本中分离的110株大肠埃希菌和94株肺炎克雷伯菌进行ESBLs的表型确定试验,同时分别用聚合酶链反应(PCR)扩增法检测TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9耐药基因,并对其产物进行序列分析。结果产ESBLs阳性菌株的检出率分别为:肺炎克雷伯菌占36.2%,大肠埃希菌占42.7%,总检出率为39.7%;ESBLs检出模式以头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸单组为底物阳性率最高,占阳性菌株的66.7%;单用头孢他啶,头孢他啶/克拉维酸一组为底物,会造成大肠埃希菌68.1%和肺炎克雷伯菌64.7%的漏检;耐药基因型分析显示,TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9基因检出率分别为54.3%、38.3%、21.0%、24.7%、70.4%,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均以CTX-M型为主要基因型,占91.4%;同时携带>2种耐药基因菌株占71.6%。结论医院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株携带多种耐药基因严重,需引起临床的高度重视。; 黄烈韦洁宏张银辉王琼夏成静陆学东; 关键词：大肠埃希菌肺炎克雷伯菌基因分型超广谱Β-内酰胺酶

急性下呼吸道感染患者支气管肺泡灌洗液非典型病原体与病毒检测被引量：26: 2007年; 目的探讨急性下呼吸道感染患者非典型病原体与病毒感染情况。方法采集71例社区获得性肺炎和21例急性气管-支气管炎患者支气管肺泡灌洗液(BALF),采用多重PCR技术与Luminex xMAP多重分析技术平台相结合,以荧光微球为载体检测非典型病原体与多种病毒。结果10种(14个亚型)病原体阳性检出率为50.00%,其中病毒阳性检出率为33.69%,以流感病毒A为主,其占病毒阳性检出的67.74%;非典型病原体阳性检出率为16.30%,以肺炎支原体(MP)为多,其占非典型病原体阳性检出的73.33%;MP、病毒和细菌混合感染率为13.04%。结论多重荧光微球检测技术具有高通量、敏感性高、特异性强、检测速度快、价格便宜的优点,可实用于临床病原微生物的快速检测;流感病毒A和肺炎支原体是本地区社区获得性肺炎和急性气管-支气管炎重要的病原体,并有相互混合感染或与细菌混合感染,临床应予重视。; 周一平陆学东陈小可夏利萍杨来智张国良; 关键词：社区获得性肺炎非典型病原体病毒支气管肺泡灌洗液

葡萄球菌属诱导型克林霉素耐药及耐药基因类型分析被引量：22: 2007年; 目的测定葡萄球菌属对红霉素及克林霉素的耐药性,分析红霉素诱导克林霉素耐药的发生率以及耐药基因的类型。方法用K-B法检测葡萄球菌属对红霉素及克林霉素的耐药性,依据NCCLS 2004年发布M100-S14的D-试验方法,测定红霉素对克林霉素的诱导耐药表型,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测msrA、Vgb、sat4、ermA、ermB、ermC耐药基因。结果耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌对红霉素及克林霉素同时耐药分别占80.00%和54.17%;D-试验阳性占所检测葡萄球菌属的26.15%,占红霉素耐药而克林霉素敏感菌株的68.00%;对红霉素耐药而克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中,D-试验阳性即对克林霉素具有诱导耐药性者分别为75.00%和65.88%;耐药基因分析表明:红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,占检出耐药基因的76.47%;ermC+sat4基因的检出率为8.82%。结论临床微生物实验室应开展D-试验,检测葡萄球菌属中红霉素对克林霉素的诱导耐药,指导临床医生更合理使用抗菌药物。; 黄烈林广城张银辉刘键杨来智陆学东; 关键词：葡萄球菌属红霉素克林霉素耐药基因

产ESBLs肺炎克雷伯菌基因型分析被引量：4: 2007年; 目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶(ESBL s)的主要基因型。方法用表型确定的临床分离产ESBL s的肺炎克雷伯菌34株,分别用TEM,SHV,CTX-M-1,CTX-M-2和CTX-M-9扩增引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果PCR扩增结果显示TEM,SHV,CTX-M-1,CTX-M-2和CTX-M 9的阳性率分别为47.06%,85.29%,26.47%,32.35%和52.94%,CTX-M型总阳性率为88.24%,序列分析证实扩增为目的产物。结论34株ESBL s肺炎克雷伯菌的主要基因型是CTX-M型和SHV型,且同时携带2种以上基因的菌株占所测菌株的82.35%,需引起临床的高度重视。; 韦洁宏黄烈林广城刘键杨来智陆学东; 关键词：肺炎克雷伯菌超广谱Β-内酰胺酶基因分型

液相芯片快速检测常见细菌大环内酯类和β内酰胺酶类耐药基因被引量：2: 2009年; 目的建立液相芯片快速、准确检测临床常见细菌大环内酯类和口内酰胺酶类耐药基因的多重技术平台并评价此平台用于细菌耐药基因多重检测的可行性。方法选取经测序验证携带有大环内酯类或β内酰胺酶类耐药基因的细茼阳性样本，经多重PCR扩增后，产物在液相反应条件下，与交联上大环内酯类和β内酰胺酶类常见型别耐药基因探针的荧光微球进行短时间的杂交反应，根据杂交信号和荧光信号同时来检测样本所携带的耐药基因型别和有无，建立细菌耐药基因的液相芯片多重检测平台，同时利用此平台对136例葡萄球菌和204例常见肠杆菌进行检测，结果和表型检测结果进行对照，评价此液相芯片耐药基因多重检测平台用于临床的可行性。结果携带有大环内酯类或β内酰胺酶类耐药基因的细菌阳性样本经液相芯片多重检测后结果与预先的测序结果100％一致，136例葡萄球菌和204例常见肠杆菌经此液相芯片耐药基因多重检测平台检测后与表型结果比较分别达到94．8％（129／136）和97．1％（198／204）的一致。结论此液相芯片耐药基因多重检测技术平台能准确快速地检测临床常见细菌大环内酯类和β内酰胺酶类耐药基因，能用于多重耐药基因的检测。; 夏成静陆学东黄烈; 关键词：液相芯片耐药基因大环内酯类 Β内酰胺酶

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深圳市科技计划项目(JH200505260279A)

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