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烟草miRNA169基因家族及启动子的生物信息学分析被引量：1: 2019年; miRNA169是介导植物低温早花的关键因子。为了明确低温诱导烟草miRNA169基因家族表达的调控机制,培育耐低温抗早花的烟草新品种,对miRBase数据库中烟草miRNA169基因数据进行了分析,并对该基因家族及其启动子的结构和功能进行了预测。结果表明:在烟草基因组中共有19个miRNA169基因,分布在1号、8号和9号染色体上,同一染色体上的miRNA169分布集中。除pre-miRNA169t外,其他pre-miRNA169均具有很高的同源性。同时,在所有烟草miRNA169的启动子上均发现低温胁迫应答元件LTR,以及参与低温应答的激素脱落酸(ABA)和茉莉酸(JA)的应答元件。因此,推测烟草miRNA169对低温胁迫的响应过程可能是LTR、ABA和JA途径三者共同作用的结果。; 蔡健宇贾蒙骜张孝廉余婧李勇雷波郭玉双; 关键词：烟草基因家族生物信息学低温胁迫启动子

高效液相色谱-串联质谱法快速测定吸烟者尿液中8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷被引量：2: 2021年; 在采集的尿液样品中依次加入内标和甲醇(控制样品介质中甲醇的体积分数约为50%),所得混合液经自主设计的样品离心分离和过滤装置处理,采用高效液相色谱-串联质谱法快速测定滤液中8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的含量。以Synergi Polar-RP色谱柱为固定相,以不同体积比的10g·L^(-1)乙酸铵溶液和甲醇的混合液为流动相进行梯度洗脱,串联质谱分析中采用电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式。以15 N5-8-羟基脱氧鸟苷为内标。8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的线性范围均为0.2~40μg·L^(-1),检出限(3S/N)依次为0.054,0.092μg·L^(-1),测定下限(10S/N)依次为0.18,0.32μg·L^(-1)。以中度吸烟者的尿液样品为基体进行加标回收试验,所得日内回收率、日间回收率分别为92.3%~96.3%,93.4%~96.3%,测定值的日内相对标准偏差(n=7)和日间相对标准偏差(n=7)分别为1.6%~3.0%,2.8%~3.4%。; 吴凡李惠杰杨光宇郭亚东胡秋芬梁梦洁; 关键词：高效液相色谱-串联质谱法 8-羟基脱氧鸟苷吸烟者尿液

烟草TILLING技术体系的建立及NtPhyB基因的筛选被引量：1: 2014年; 定向诱导基因组局部突变技术（Targeting Induced Local Lesions In Genomes，TILLING）是一种新近发展起来的高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究首次将TILLING技术用于EMS处理的烟草突变体筛选中，通过对正反向荧光引物使用量的摸索，确定了10μL PCR体系中IRDye-700标记的正向引物（1μM）适用量为0.32～0.64μL，IRDye-800标记的反向引物（1μM）适用量1.12～1.6μL；对异源双链CELⅠ酶切体系实验表明，10μL PCR产物中加入0.6μL CEL I酶，1.5μL 10× Buffer酶切效果最好。从而建立并优化了适用于普通烟草基因组研究的TILLING技术体系。在此基础上，以NtPhyB为目标基因，在1000份0.6% EMS诱变的M2突变体中进行筛选，共得到13个突变体，该基因突变频率约为1/94 kb。本试验建立的TILLING筛选体系能够快速、高效地筛选任意已知序列基因的突变体，对烟草功能基因组研究具有重要意义。; 宗鹏李凤霞王倩刘贯山龚达平陈雅琼孙玉合; 关键词：功能基因组学烟草化学诱变突变体

索氏提取装置的改良及其在烟草挥发性成分分析中的应用被引量：4: 2021年; 设计了一款带固相萃取功能的索氏提取装置,并优化了其提取检测方法,应用于烟草酸性及中性挥发性成分的分析。该装置于密闭环境中加热萃取,集萃取、净化和浓缩为一体,中途不需要转移样品;而且,针对烟草样品中生物碱含量高的特点,该装置有针对性地设计了带硅胶和硅钨酸的复合固相萃取柱,在样品提取过程中即可在线去除生物碱和其他大极性成分对酸性及中性挥发性成分分析的干扰,大大简化了样品前处理操作,有效缩短了样品前处理周期。与传统的索氏提取装置及同时蒸馏萃取装置相比,带固相萃取功能的索氏提取装置能够完全吸附提取液中的烟碱,而且对烟草样品中部分重要致香成分的提取效果较理想。该装置的设计以及其配套提取方法的建立为烟草中挥发性成分的提取检测分析提供了快速可靠的方法。; 黄海涛许永刘欣李晶孔维松杨叶昆李雪梅杨光宇; 关键词：烟草挥发性成分分析

绒毛状烟草钙依赖蛋白激酶基因家族分析被引量：8: 2012年; 钙依赖蛋白激酶(CDPK)是一个多基因家族,在植物的钙信号转导中具有重要作用。以拟南芥、普通烟草和烟草属其他种中已知的CDPK序列检索绒毛状烟草基因组框架图数据库,获得绒毛状烟草CDPK基因,并对其进行基因结构、GC含量、系统进化关系、主坐标和基因表达谱分析。结果表明:共分离获得25个绒毛状烟草CDPK基因,它们均具有完整的开放读码框;系统进化树和主坐标分析证实这25个CDPK分布于4个亚家族中;RT-PCR分析显示,绒毛状烟草CDPK基因家族的空间表达存在明显的差异性。此为进一步阐明CDPK基因家族在烟草的钙信号转导过程中的功能及分子机制奠定了重要基础。; 张丽张磊康乐王军伟王鲁龚达平刘贯山; 关键词：烟草进化树基因表达

高效液相色谱法测定新鲜烟叶中3种多胺被引量：3: 2020年; 新鲜烟叶样品经0.4mol·L-1高氯酸溶液超声提取,以4g·L-1的丹磺酰氯丙酮溶液为衍生化试剂,在40℃下衍生40min,采用高效液相色谱法测定样品溶液中腐胺、亚精胺、精胺等3种多胺的含量。以ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)为分离柱,用0.01mol·L-1乙酸铵溶液和乙腈以不同比例混合的溶液为流动相进行梯度洗脱,用二极管阵列检测器测定。3种多胺的质量浓度均在0.50~50.0mg·L-1内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.07~0.08mg·L-1,测定下限(10S/N)为0.23~0.28mg·L-1。方法用于新鲜烟叶样品的分析,加标回收率为86.4%~100%,测定值的相对标准偏差(n=6)为0.70%~4.4%。; 黄丽佳梁梦洁李应郡米其利黄海涛杨叶昆杨光宇李晶; 关键词：高效液相色谱法多胺腐胺亚精胺精胺

利用基因组简约法开发烟草SNP标记及遗传作图被引量：12: 2014年; 提出了一种基于基因组简约法开发SNP标记的方法,即利用特定限制性内切酶酶切降低基因组复杂度,利用高通量测序平台对酶切位点周围的目标片段进行富集测序,设计一个生物信息学流程进行序列分析和SNP鉴定。以烤烟DH群体为例,通过基因组简约法收集烟草基因组代表性片段和高通量测序产生11.4 Gb数据,经生物信息学分析获得了1015个高质量SNP位点。以SSR标记为骨架,绘制包括SNP标记在内、标记总数为1307的烤烟遗传连锁图。最后利用该遗传图谱和普通烟草2个祖先种的基因组序列,分析烟草24个连锁群(染色体)之间的同源关系,发现了大量染色体之间的重组或交换事件以及部分染色体之间的共线性。; 肖炳光邱杰曹培健桂毅杰卢秀萍李永平樊龙江; 关键词：烤烟 SNP标记限制性内切酶

烟草T-DNA插入位点侧翼序列扩增方法的筛选与优化被引量：2: 2014年; 烟草T-DNA激活标签插入突变体库的创制过程中,需要进行大量的T-DNA插入位点的侧翼序列扩增,因此选择一种适用于烟草T-DNA侧翼序列扩增的高效方法尤为必要。本研究比较了TAIL-PCR、PCR-walking、FPNI-PCR三种方法对T-DNA插入位点侧翼序列的扩增效率、插入位点确定的比例和同源蛋白比对结果,并对3种方法的PCR程序、体系和引物设计等方面进行了优化,确定TAIL-PCR更适合烟草的侧翼序列扩增,通过产率、条带长度、插入位点和同源蛋白比对结果的比较,得出TAIL-PCR更适合烟草的侧翼序列扩增。这一结果为应用烟草突变体开展烟草基因功能的研究奠定了基础。; 刘慧刘贯山刘峰龚达平张雪峰崔萌萌路铁刚王元英; 关键词：烟草 T-DNA 插入位点侧翼序列

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中国烟草总公司科技项目(JY-03)

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