湖北省卫生厅科研基金(JX6C-26)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：张艳琼吴江锋柳长柏曾宪一王晓丹更多>>
- 相关机构：三峡大学湖北工业大学更多>>
- 发文基金：湖北省卫生厅科研基金国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MicroRNA-29与肝纤维化被引量：1
- 2014年
- 微小RNA(microRNA,miRNAs,miR)是一类在转录后水平进行基因调控的非编码小RNA分子。miRNAs分子参与细胞生长、增殖、信号通路调控以及细胞凋亡等多个环节,与多种癌症发生发展有关。目前许多研究表明miR-29可调控多种靶基因的表达,参与多种纤维化疾病的发生、发展过程,miR-29有望成为肝纤维化基因治疗的新靶点,为阐述肝纤维化的发病机制和临床诊治提供了新思路。本文就miR-29与肝纤维化关系的研究进展做一综述。
- 王晓丹石慧肖和杰张艳琼
- 关键词：微小RNA肝纤维化细胞外基质
- 转化生长因子β/骨形成蛋白应答元件表达质粒的构建及功能检测
- 2014年
- 目的：为了确认与转化生长因子β/骨形成蛋白（TGF-β/BMP）信号通路相关的转录因子,建立靶向治疗肝纤维化的筛选平台.方法：通过分子生物学技术设计、合成TGF-β/BMP应答元件（TRE/BRE）,构建真核表达质粒pGLuc-TRE-MiniTK、pGLuc（BRE）2-MiniTK和pGLuc（GCCG） 9-MiniTK.通过脂质体将pGLuc-TRE-MiniTK转染到小鼠成纤维细胞L929内,并采用TGF-β的持续活化型受体CA-ALK5激活TGF-β信号;将p-GLuc（BRE）2-MiniTK和pGLuc-（GCCG）9-MiniTK分别转染到大鼠肝星状细胞HSC-T6内,用BMP的持续活化型受体CA-ALK3激活BMP信号.然后,通过荧光检测培养细胞上清中的GLuc表达量,以此确认TGF-β/BMP应答元件的功能.结果：酶切鉴定和测序分析证实TRE、（BRE）2及（GCCG）9的碱基序列、插入方向和阅读框架正确.荧光素酶检测显示TRE和（BRE）2的荧光素酶GLuc大量表达,而（GCCG）9的荧光素酶GLuc表达不理想.结论：真核表达质粒pGLuc-TRE-MiniTK和pGLuc-（BRE） 2-MiniTK具备筛选与TGF-β/BMP信号通路相关转录因子的功能.
- 胡青婷沈旭张凯贾岽艾文兵张艳琼柳长柏吴江锋
- 关键词：肝纤维化
- 肝纤维化病程中的miRNA对肝星状细胞的影响被引量：4
- 2015年
- MicroRNA (miRNA)广泛存在于真核生物中,是一类内源性的非编码单链小分子RNA,高度保守,长度约21～22个核苷酸,通过与靶基因序列发生特异的相互作用,在转录后或翻译水平负调控相关基因的表达.肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是由多种病因引起的肝细胞损伤和炎症反应,进而演变为慢性进行性肝病,最终导致肝硬化甚至肝癌的病理过程.在该病理进程中,伴随着大量miRNA的表达改变[1],miRNA表达谱的变化对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化、转分化、迁移、增殖和凋亡均有较大影响[2],同时,人为的干预部分miRNA的表达,也可调控与肝纤维化密切相关分子的表达.
- 曾宪一吴江锋张艳琼
- 关键词：肝纤维化MIRNAHSC肝星状细胞
- gremlin1基因的诱变及其真核表达载体的构建
- 2013年
- 目的：分别构建全长、无信号肽、无核定位系统和既无信号肽也无核定位系统的大鼠gremlin1基因的真核表达载体.方法：采用PCR技术获得全长大鼠gremlin1基因（gremlin1）和无信号肽的gremlin1基因（gremlin1-DS）,以全长gremlin1为模板运用重叠延伸PCR获得无核定位系统的gremlin1基因（gremlin1-DN）,继而在gremlin1-DN的基础上去掉信号肽获得既无信号肽也无核定位系统的gremlin1基因（gremlin1-DS-DN）.分别将4组重组质粒转染到非洲绿猴肾细胞株cos7中,免疫荧光和蛋白免疫印迹检测gremlin1基因的表达.结果：构建的真核表达载体pEF1/Myc-HisC-gremlin1、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN和pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS-DN经PCR与酶切鉴定显示目的片段大小与预期结果一致；经DNA测序显示pEF1/Myc-His C-gremlin1中的gremlin1片段与Gene Bank中的gremlin1序列（NM-019282）完全吻合；pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS中的gremlin1基因缺失信号肽序列；pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN中的gremlin1片段实现了4个定点突变：433-435位的AAG（赖氨酸）、487-489位的CCA（脯氨酸）、490-492位的CCC（脯氨酸）、496-498位的AAG（赖氨酸）均突变为TTC（苯丙氨酸）；pEF1/Myc-His Cgremlin1-DS-DN中的gremlin1基因既缺失信号肽序列又实现了4个定点突变.将它们分别转染到cos7细胞后,免疫荧光和蛋白免疫印迹检测显示,4者均能在细胞内成功表达.结论：成功构建了pEF1/Myc-HisC-gremlin1、pEF1/Myc-HisC-gremlin1-DS、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS-DN的真核表达载体.
- 万林燕张巧娟彭虎夏鑫柳长柏吴江锋张艳琼
- 关键词：诱变真核表达
