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尘螨变应原Derf1植物表达产物诱导哮喘小鼠免疫耐受的研究被引量：1: 2010年; 目的:采用尘螨变应原组分Derf1植物表达产物免疫治疗哮喘小鼠,了解其诱导哮喘小鼠免疫耐受的效果及机制。方法:将BALB/c小鼠分为正常组、哮喘组和治疗组,治疗组在致敏后分别给予尘螨变应原Derf1原核表达产物(rDE)和烟草叶片中的表达产物(rDP)免疫治疗,处死小鼠,取支气管肺泡灌洗液(BALF)、血清和肺组织,分别进行细胞学、螨特异性抗体、细胞因子和组织病理学检查,观察这些指标的变化。结果:哮喘组和治疗组BALF中细胞总数明显增多,中性和嗜酸性粒细胞超过50%;rDE和rDP治疗后,小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞减少;哮喘组和治疗组小鼠螨特异性IgE、IgG和IL-4水平升高,IFN-γ水平下降(P<0.01);rDE和rDP治疗后,IgE、IgG和IL-4水平下降,IFN-γ水平上升(P<0.01-0.05),以rDP疗效更好;哮喘组小鼠支气管、细支气管和小血管周围可见明显炎性细胞浸润,rDE和rDP治疗后,炎症减轻,以rDP改变更为明显。结论:尘螨变应原Derf1植物表达产物较原核表达产物能更有效地减轻螨性哮喘小鼠的气道炎症,诱导免疫耐受形成。; 彭江龙牛莉娜吴洁周鹰崔玉宝; 关键词：尘螨哮喘免疫治疗

尘螨变应原Der f1植物表达载体的构建及表达被引量：1: 2010年; 目的:构建尘螨变应原Der f1植物表达载体并侵染烟草叶片表达。方法:从保存的含pET28a(+)-Der f1的甘油菌株中扩增Der f1基因,并克隆到质粒载体中,提取质粒,进行测序;以ClaⅠ、SalⅠ双酶切,将Der f1基因克隆到马铃薯X病毒(PVX)载体中,构建植物病毒表达载体;将PVX-Der f1转化脓杆菌,挑取Kan、Tet抗性阳性的菌株侵染烟草叶片进行蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定和分析。结果:经SDS-PAGE分析,有4株烟草叶片蛋白提取物在34Mr处有特异性蛋白条带;经Western blot进一步验证其变应原,结果显示,烟草叶片中获得的重组蛋白在34Mr处与阳性血清发生特异性结合,而与阴性血清并不发生结合。结论:成功构建了植物病毒表达载体PVX-Der f1并获得表达,为尘螨变应原Der f1的研究提供新思路。; 彭江龙崔玉宝王华民周鹰牛莉娜吴洁; 关键词：尘螨植物表达

粉尘螨变应原第5组分基因克隆及分子特征分析: 2009年; 目的获得粉尘螨变应原第5组分的编码基因（Derf5）并了解其分子特征。方法用RNAiso试剂盒提取粉尘螨总RNA，根据GenBank已公布的Derf5核酸序列设计引物，用RT—PCR扩增获得其编码基因，插入pMD19-T Simple载体进行序列测定和分析。结果获得的Derf5基因与参考序列（GenBank AY283283）同源件达97．8％，含1个完整的开放阅读框架（ORF），由132个氨基酸组成，信号肽位于1～19AA、跨膜Ⅸ域位于1-19AA，为细胞外疏水性蛋白。二缴结构由延伸主链（1．52％）、无规则卷曲（7．58％）和α螺旋（90．91％）组成。具有酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点2个。其氨基酸序列与屋尘螨变应原第5组分相似率为78％。结论成功克隆了Der f5，并初步预测得其分子特征。; 崔玉宝彭江龙周鹰王颖孙炜; 关键词：粉尘螨变应原生物信息学

尘螨变应原Derf1真核表达载体的构建及转染CHO细胞: 2011年; 目的:构建尘螨变应原Der f1真核表达载体,转染真核细胞并进行蛋白表达。方法:根据Genebank中Der f1基因的核酸序列(AB034946),设计引物,采用PCR法,从保存的JM109工程菌中扩增Der f1编码基因,克隆到真核表达质粒pcDNA3.1/myc-his A上,以脂质体法转染CHO细胞,经G418筛选,进行稳定表达细胞株的筛选和鉴定。结果:将目的基因Der f1成功连接到pcDNA3.1/myc-hisA-Derf1并转染CHO细胞,获得稳定表达的CHO细胞株。结论:成功构建了尘螨变应原Der f1真核表达载体,并转染CHO细胞表达蛋白质。; 彭江龙崔玉宝钱士匀裴华陈年根黄幼生; 关键词：尘螨 CHO细胞

尘螨主要变应原Der f1融合基因真核表达载体的构建被引量：2: 2011年; 目的:构建尘螨主要变应原Derf1融合基因真核表达载体,为进一步转染真核细胞表达融合蛋白奠定基础。方法:根据Genebank中Derf1基因的核酸序列(AB034946),设计引物,采用PCR法,从保存的JM109工程菌中扩增Derf1编码基因,将其连接到小鼠IL-12(mIL-12)基因3′端,组成融合基因mIL-12/Derf1,再克隆到真核表达质粒pcDNA3.1/myc-hisA上。结果:经测序、比对,内切酶酶切,证实融合基因片段成功连接并亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1/myc-hisA。结论:成功构建了尘螨变应原Derf1和小鼠IL-12融合基因的真核表达载体,为尘螨变应原Derf1融合蛋白的表达奠定了基础。; 彭江龙崔玉宝钱士匀裴华陈年根黄幼生; 关键词：尘螨真核表达

粉尘螨变应原第6组分全长cDNA克隆及生物信息学分析被引量：2: 2009年; 目的:获得粉尘螨变应原第6组分编码基因并了解其分子特征。方法:根据GeneBank已公布的Derf6核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体进行序列测定和生物信息学分析。结果:获得的Der f6 cD-NA全长为840 bp,与参考序列同源性达96.8%,含1个完整的开放读码框。推测编码蛋白由279个氨基酸组成,信号肽序列位于1～19 aa,亲水性指数为-0.139,跨膜区域位于1～19 aa,二级结构由α-螺旋(7.17%)、延伸主链(36.56%)和无规卷曲(56.27%)组成;亚细胞定位于细胞外,N-端第6位和第11位的亮氨酸有明显的序列核输出信号;可能为糜蛋白酶,具有cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、N端酰基化位点等。结论:获得了Derf6基因全长,其编码的细胞外疏水性蛋白可能具有糜蛋白酶活性。; 崔玉宝周鹰彭江龙孙炜王颖; 关键词：粉尘螨变应原生物信息学

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国家自然科学基金(30860261)