国家自然科学基金(81041043)
- 作品数：28 被引量：133H指数：8
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- 铁过载诱导活性氧物质生成对骨髓造血功能影响的体外实验研究被引量：14
- 2011年
- 目的建立体外铁过载骨髓造血细胞模型，检验铁过载对细胞活性氧物质（ROS）水平的影响以及ROS升高对骨髓造血功能的影响。方法在骨髓单个核细胞培养的过程中添加枸橼酸铁铵（FAC），使细胞铁过载，检验这一过程中细胞ROS水平、细胞凋亡水平、造血细胞集落形成和CD34＋细胞计数的变化。再用去铁胺（DFO）祛铁或抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）清除过多的ROS后，检测上述指标的变化。结果①在培养液中加入不同浓度FAC培养不同时间，发现骨髓造血细胞内可变铁池（LIP）水平升高，且具有时间和浓度依赖性，在含400μmol／LFAC的培养液中培养24h时LIP水平达到最高。②在400μmol／LFAC浓度下，培养骨髓造血细胞24h后骨髓造血细胞内总的ROS、粒细胞和红细胞内ROS显著升高，分别为对照组的1．77、1．75和2．12倍。与对照组比较，DFO和NAC处理后均能明显降低细胞内ROS水平（P〈0．05）。⑧对骨髓细胞造血功能的检测发现FAC组细胞凋亡比例[（24．80±2．99）％]较对照组[（8．90±0．96）％]显著升高；造血细胞集落形成单位（CFU—E、CFU—GM、BFU—E和CFU—mix）计数明显低于对照组（P值均〈0．05）；CD34＋细胞比例[（0．39±0．07）％]较对照组[（0．91±0．12）％]也显著降低。且这些损伤都可以通过DFO和NAC处理而部分恢复。结论铁过载通过诱导ROS生成影响骨髓造血功能，这种损伤可以通过祛铁和抗氧化处理减轻。可能为治疗铁过载患者骨髓造血功能低下寻找新的靶点。
- 谢芳赵明峰李玉明朱海波江燕徐新女肖霞穆娟刘鹏江吕海蓉
- 关键词：铁超负荷活性氧骨髓细胞
- 小鼠铁过载模型的建立及其对骨髓造血功能的影响被引量：14
- 2013年
- 目的通过给小鼠腹腔注射右旋糖酐铁,建立小鼠铁过载模型并观察铁过载对小鼠骨髓造血功能的影响。方法使用随机区组法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、低剂量铁剂组(质量浓度为12.5 mg/ml)、中剂量铁剂组(质量浓度为25 mg/ml)和高剂量铁剂组(质量浓度为50 mg/ml)。对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.2 ml/次,低、中、高剂量铁剂组小鼠腹腔注射右旋糖酐铁0.2 ml/次,每3天注射1次,共注射6周。6周后观察小鼠状态及骨髓、肝脏、脾脏等脏器改变,分析骨髓单个核细胞(BMMNCs)可变铁池水平,并检测外周血象及BMMNCs数目和功能。结果小鼠肝脏、脾脏、骨髓均出现铁过载,骨髓铁过载主要存在于骨髓基质中,BMMNCs内可变铁池无改变;低、中、高剂量铁剂组小鼠骨髓细胞粒-单系集落形成单位数和对照组相比均显著下降(P<0.05);且中、高剂量铁剂组小鼠骨髓细胞红系集落形成单位数、混合系集落形成单位数和对照组相比也显著下降(P<0.05);BMMNCs计数无变化;低、中、高剂量铁剂组外周血白细胞、血小板、红细胞、血红蛋白和对照组相比,差异均无统计学意义,血小板数低剂量铁剂组(780.7±39.60)×109/L、中剂量铁剂组(676.2±21.43)×109/L、高剂量铁剂组(587.3±19.67)×109/L,和对照组(926.0±28.23)×109/L相比有轻度下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过腹腔注射右旋糖酐铁,成功建立了小鼠铁过载模型。进一步研究显示铁过载不但对肝脏、脾脏造成损害,而且可以损伤骨髓造血功能,但对正常骨髓功能的损伤未引起外周血象的改变。本模型为深入研究铁过载对骨髓造血功能的影响及作用机制提供了实验基础。
- 柴笑赵明峰李德冠孟娟霞卢文艺穆娟孟爱民
- 关键词：铁过载动物模型骨髓造血功能
- 铁过载对脐带血来源的造血干祖细胞及造血支持细胞的作用观察被引量：2
- 2013年
- 目的探讨铁过载对脐带血(UCB)来源的造血干祖细胞及造血支持细胞,尤其是间充质干细胞(MSCs)的损伤作用。方法体外培养脐带血单个核细胞(UCB-MNCs)和脐带血间充质干细胞(UCB-MSCs),向培养液中添加200μmol/L的枸橼酸铁胺(FAC)24 h建立铁过载模型。分为MNCs-CTL组、MNCs-FAC组、MSCs-CTL组、MSCs-FAC组,每组设3个复孔,实验重复3次。检测细胞内活性氧物质(ROS)水平变化、细胞增殖、分化、凋亡以及造血支持作用。结果对UCB-MNCs进行铁过载,MNCs-FAC组造血集落形成单位(CFU-E、CFU-GM、BFU-E、CFU-mix)计数显著低于MNCs-CTL组(P<0.05),MNCs-FAC组造血干细胞(CD3+4)、髓系造血细胞(CD3+3)、红系造血细胞(GlyA+)比例及计数均显著低于MNCs-CTL组(P均<0.05);MNCs-FAC组的凋亡率高于MNCs-CTL组(P<0.05)。MSCs-FAC组的群体倍增时间明显长于MSCs-CTL组,且其凋亡率亦高于MSCs-CTL组(P<0.05)。结论铁过载可抑制造血干祖细胞的增殖、分化,诱导其凋亡,也可抑制MSCs的增殖能力,诱导其凋亡,降低其造血支持能力,且此过程中ROS升高。
- 肖霞赵明峰卢文艺柴笑穆娟邓琦李青李玉明
- 关键词：脐带血造血干祖细胞铁过载活性氧
- 活性氧介导铁过载对脐带间充质干细胞及其造血支持作用的研究被引量：5
- 2013年
- 目的探讨铁过载对脐带间充质干细胞（UC-MSC）的损伤作用及活性氧物质（ROS）在该机制中的意义。方法体外培养UC．MSC，用不同浓度的枸橼酸铁胺（FAC）处理UC-MSC不同时间建立铁过载模型。采用细胞倍增时间计算细胞的增殖能力；用AnnexinV／PI双染法检测细胞的凋亡；用共培养方法检测UC-MSC的造血支持能力；并用DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平；Western印迹法检测铁过载及抗氧化处理后UC-MSC内ROS相关信号蛋白p-p38MAPK、p38MAPK及1953的表达。结果（1）加铁组UC-MSC的群体倍增时间明显长于对照组[第3代细胞：（24．43±2．72）h比（16．03±2．31）h，P〈0．05]，但传代次数增加2代后两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）加铁组UC-MSC的凋亡率（12．75％±0．32％）明显高于对照组（3．63％±0．80％）（P〈0．05）；（3）脐血单个核细胞（MNC）与加铁组UC-MSC共培养1和2周时，其造血集落形成能力均明显低于对照组（均P〈0．05）；（4）加铁组UC-MSC内ROS水平明显高于对照组，且ROS的水平呈时间与浓度依赖性，在400LLm0L／LFAC浓度下作用12h达到最高值（1499±86比548±97，P〈0．05）；（5）加铁组UC-MSC的p-p38MAPK、P53蛋白表达明显高于对照组，当给予抗氧化剂处理后，相关信号通路可被抑制。结论铁过载可能通过激活ROS相关信号传导因子p-p38MAPK、1953抑制UC-MSC的增殖能力，诱导其凋亡，降低其造血支持能力。
- 卢文艺赵明峰柴笑孟娟霞赵楠SajinRajbhandary徐新女马立李玉明
- 关键词：铁超负荷间质干细胞脐带活性氧物质
- 铁过载骨髓造血细胞体外模型的建立及其对造血的影响被引量：7
- 2011年
- 本研究通过铁与骨髓单个核细胞共培养,建立铁过载骨髓造血细胞模型并观察其对造血功能的影响。在体外培养骨髓单个核细胞的过程中,在培养液中添加枸橼酸铁铵(FAC),使细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,然后检验这一过程中造血细胞的凋亡水平、造血集落形成(CFU-E、CFU-GM、BFU-E和CFU-mix)和CD34+细胞的计数变化。再用去铁胺(DFO)祛铁,观察上述指标的变化。结果发现:在不同时间加入培养液中不同浓度FAC,骨髓造血细胞内可变铁池(LIP)水平升高,且具有时间和浓度依赖性,在含400μmol/L FAC的培养液中培养24小时时LIP水平达到最高。骨髓细胞造血功能检测表明,FAC组细胞凋亡比例(24.8±2.99%)较对照组(8.9±0.96%)显著升高(p(0.01);造血集落形成单位计数明显低于对照组(p(0.05);CD34+细胞比例(0.39±0.07%)与对照组(0.91±0.12%)相比也显著降低(p(0.01)。这些损伤影响可以通过DFO的处理部分消除。结论:在体外培养过程中添加铁能诱导骨髓单个核细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,并能引起骨髓造血功能损伤,而这种损伤作用可以通过祛铁法减轻。本模型为深入研究铁过载对骨髓细胞造血功能的作用机制提供实验方法,并为骨髓造血功能低下的铁过载病人治疗提供新的靶点。
- 谢芳赵明峰朱海波肖霞徐新女穆娟李玉明
- 关键词：铁过载造血功能
- 白血病干细胞免疫表型与急性白血病疗效及预后的关系被引量：4
- 2012年
- 研究表明，白血病细胞中的CD34＾＋CD38＾-CDl23＾＋亚群［1］和CD34＾＋CD38＾-CD96＾＋亚群［2］同样具备白血病干细胞（LSC）的特性。但是，目前为止，还没有哪个表面标志是公认的LSC特异标志，如何准确界定LSC仍然是研究的难点和热点。LSC表面标志对白血病疗效和预后判断的作用如何？
- 朱海波赵明峰李玉明谢芳江燕徐新女邓琦耿莉肖霞刘鹏江穆娟
- 关键词：急性白血病预后判断细胞免疫表型白血病干细胞白血病细胞
- 铁过载对骨髓损伤小鼠造血功能的作用及机制研究被引量：5
- 2014年
- 目的 探讨铁过载对骨髓损伤小鼠造血功能的作用及可能机制.方法 将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、铁剂组、照射组、照射＋铁剂组,每组5只.通过给予小鼠4Gyγ射线照射及腹腔注射右旋糖酐铁建立骨髓损伤小鼠铁过载模型,观察各组小鼠铁负荷情况及骨髓单个核细胞（BMMNC）内可变铁池水平,检测各组小鼠外周血常规的改变;检测BMMNC数,红系、粒-单核系细胞比例及造血干/祖细胞功能改变;分析骨髓细胞,红系和粒-单核系细胞活性氧物质（ROS）水平.结果 ①骨髓活检及流式细胞术检测均显示发生铁过载.②与对照组相比,照射组小鼠血小板计数显著降低[（801.9±81.2）×10^9/L对（926.0±28.2）×10^9/L],BMMNC数及红系、粒-单核系细胞比例明显降低,骨髓造血集落形成单位（CFU）数和造血干细胞单克隆培养数明显减少（P值均＜0.05）.③与照射组相比,照射＋铁剂组小鼠血小板计数显著降低[（619.0±60.9）×10^9/L对（801.9±81.2）×10^9/L],红系、粒-单核系细胞比例明显降低,骨髓造血CFU数和造血干细胞单克隆形成数明显减少（P值均＜0.05）.④照射＋铁剂组BMMNC、红系和粒-单核系细胞ROS水平较照射组分别升高1.94、1.93和2.70倍（P值均＜ 0.05）.结论 4Gyγ射线照射可造成小鼠骨髓损伤,在骨髓损伤基础上发生铁过载会加重损伤造血干/祖细胞功能,进一步研究发现可能由铁过载引起BMMNC内ROS水平升高所致.
- 柴笑赵明峰李德冠张宇辰卢文艺曹小立孟娟霞游权孟爱民
- 关键词：铁超负荷造血干细胞骨髓损伤
- 白血病干/祖细胞相关基因表达在急性白血病中的临床意义被引量：2
- 2011年
- 本研究旨在检测白血病干/祖细胞(LSPC)相关基因ABCB1、BMI-1、HOXB4在急性白血病患者骨髓中的表达,并探讨其在急性白血病中的临床意义。采集41例初治急性白血病患者的骨髓、16例缓解期患者的骨髓及10例非恶性血液病患者骨髓标本(作为对照)。采用SYBR Green相对定量RT-PCR法检测ABCB1、BMI-1、HOXB4基因的表达水平,并分析它们与急性白血病疗效、预后的关系。结果表明,ABCB1、BMI-1、HOXB4在对照组均无表达,在初治组相对表达量分别为4.26±2.26、3.72±1.91、3.74±2.38;而在缓解标本组分别为2.14±1.47、2.07±0.99、1.47±0.89,均明显低于初治组(p<0.05);正规化疗2个疗程内能够获得完全/部分缓解的患者的基因相对表达量分别为1.77±1.29、2.09±1.26、1.78±1.49,明显低于未缓解的难治病例(分别为7.23±1.78、3.96±0.92、4.48±2.57)(p<0.01)。单因素分析发现,各个基因高表达患者的白血病干/祖细胞免疫表型(CD34+CD38-CD96+和CD34+CD38-CD123+)表达阳性的比例及出现高白细胞(≥30×109/L)的几率均高于低表达患者,差异显著(p<0.05);而综合分析各个基因的表达,上述变化的p值均小于单因素分析p值,差异更显著(p<0.01)。结论:LSPC相关基因(ABCB1、BMI-1、HOXB4)表达与LSPC免疫表型呈相关性,在急性白血病患者发病初期表达增高,缓解后其表达水平明显下降;表达高者易出现高白细胞,化疗效果差,缓解率低。综合多指标分析可能是一种更好地临床评估疗效和预后的方法。
- 朱海波赵明峰谢芳肖霞徐新女穆娟杨皎娃刘鹏江吕海容李玉明
- 关键词：白血病干细胞BMI-1HOXB4急性白血病
- 内源性表达白细胞介素21的CIK细胞的抗白血病作用及其机制被引量：8
- 2013年
- 目的研究内源表达白细胞介素2l（IL-21）对外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）抗自血病的作用及其作用机制。方法采集分离健康人外周血单个核细胞，加用细胞因子诱导培养CIK细胞，构建表达IL-21基因的慢病毒载体，感染CIK细胞并鉴定后，四甲基偶氮唑盐（Mqq＂）法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用；半定量反转录（RT）-PCR法检测CIK细胞干扰素1（IFN-y）、肿瘤坏死因子0（TNF．OL）、TNF．B、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、Fas配体（FasL）和NKG2D分子（NKG2D）的mRNA表达；流式直接免疫标记法检测CIK细胞免疫表型、细胞表面IL-21受体（IL．21R）、FasL及细胞内穿孔素、颗粒酶B的表达；酶联免疫法检测培养上清中IFN-^v和TNF-OL的表达。结果经酶切与测序鉴定，IL-21慢病毒载体构建正确，共转染CIK细胞中有目的基因IL-21的表达。（1）与空载体组相比，内源表达IL-21组总的细胞增殖之间差异无统计学意义（P=0．856），内源表达IL-21组CIK细胞阳性细胞数高于空载体组（24．60％±2．10％比16．95％±4．70％，P=0．042）。（2）内源表达IL．21组CIK细胞对K562细胞的杀伤率高于空载体组（58．4％±8．3％比23．3％±2．8％，P=0．009），作用第5天时，杀伤作用仍能维持在61．2％±6．2％（P：0．003），相比外源性IL-21作用的CIK细胞的杀伤率（44．6％±8．3％比22．8％±2．8％，P=0．034）更强，而且作用时间更长久。（3）内源表达IL-21组CIK细胞表面IL-21R的表达比空载体组增加约2倍。（4）与空载体组比较，内源表达IL-21组CIK细胞IFN--,／和TNF-仪mRNA的表达升高约1．5倍，穿孔素、颗粒酶B、FasLmRNA的表达量升高近2倍，颗粒酶A、TNF-B和NKG2DmRNA的表达与空载体组差异无统计学意义。（5）对mRNA表达差异有统计学意义的指标进-步行蛋白质表达的检测发现
- 赵楠赵明峰Sajin Rajbhandary卢文艺朱海波马立游权肖霞邓琦李玉明
- 关键词：白血病细胞因子诱导杀伤细胞白细胞介素21抗白血病作用
- 氧化应激对骨髓间充质干细胞的影响被引量：6
- 2012年
- 骨髓间充质干细胞(MSCs)是一种成体干细胞,它具有多向分化的能力及免疫调节特性,对维持正常的造血功能及应用于干细胞治疗方面意义重大。氧化应激是指因活性氧增多而引起的机体氧化还原水平失调的状态。氧化应激是影响骨髓MSCs生存的重要因素之一,它可通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、p53等途径诱导MSCs的衰老及凋亡,通过脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1(APE/REF-1)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)途径抑制MSCs的增殖及分化;抗氧化应激预处理可增强MSCs的功能。研究氧化应激对MSCs的影响、相关信号转导通路以及如何增强骨髓MSCs的抗氧化应激能力,对更好地治疗造血系统疾病及利用MSCs的再生修复功能进行细胞治疗具有重要意义。
- 卢文艺赵明峰
- 关键词：氧化应激间充质干细胞骨髓信号传导
