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天津市自然科学基金(09JCZDJC21800)
天津市自然科学基金(09JCZDJC21800)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：陈冲谢广茹欧阳华强潘战宇李玲更多>>
- 相关机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA沉默EphB2表达对胰腺癌CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响
- 2011年
- 目的:应用慢病毒介导的RNA干扰技术,靶向沉默人胰腺癌CFPAC-1细胞中的EphB2基因的表达,观察EphB2对CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向EphB2基因的siRNA干扰质粒,通过Lipofectamine^(TM)2000将干扰质粒转染进293T细胞,筛选出能有效抑制EphB2蛋白表达的干扰序列。构建含有效序列的慢病毒载体pLentiGFP-EphB2,感染CFPAC-1细胞,筛选出稳定干扰EphB2蛋白表达的CFPAC-1细胞系。定量PCR、Western blotting检测CFPAC-1细胞中EphB2mRNA和蛋白的表达,CCK8法和流式细胞术检测EphB2下调对CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响。结果:成功构建了EphB2慢病毒干扰载体pLentiGFP-EphB2,获得稳定转染pLentiGFP-EphB2的CFPAC-1细胞(CFPAC-1 EphB2 RNAi)。CFPAC-1EphB2 RNAi细胞中EphB2 mRNA和蛋白表达较空载体组显著降低,EphB2 mRNA的沉默效率为63%。与空载体组和未转染组相比,pLentiGFP-EphB2感染显著促进CFPAC-1细胞的增殖(1.89±0.17vs1.63±0.13、1.71±0.22,P<0.05),抑制细胞的凋亡[(7.02±1.27)%vs(13.37±1.89)%、(15.71±2.35)%,P<0.05]。结论:pLentiGFP-EphB2可有效下调胰腺癌CFPAC-1细胞中EphB2的表达,促进CFPAC-1细胞增殖和抑制其凋亡。
- 欧阳华强谢广茹潘战宇陈冲李玲
- 关键词：EPHB2RNA干扰胰腺癌增殖凋亡
