国家高技术研究发展计划(2007AA021307)
- 作品数：27 被引量：87H指数：6
- 相关作者：贺立卡郭安平冯家勋孔华阳辛凤更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学广西大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- 木聚糖酶基因umxyn10B的克隆与表达研究被引量：1
- 2009年
- 从富集培养物宏基因组文库中筛选获得1个表达木聚糖酶活性的克隆pXYN12。鉴定分析表明:pXYN12上潜在的木聚糖酶基因umxyn10B大小为999 bp,编码产物与嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophi-lus)的木聚糖酶基因(GenBank索引号AAZ74783)的氨基酸序列有63%的一致性和76%的相似性,属于糖基水解酶家族10的成员。PCR扩增了umxyn10B的含催化功能域编码区的DNA序列并连接到表达载体pET-30a(+)上,构建成表达质粒在大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS中实现了表达,并对表达条件进行研究。
- 陈春岚卢丽玲冯家勋
- 关键词：宏基因组文库木聚糖酶基因克隆
- 2株产纤维素酶放线菌的筛选及分类鉴定被引量：9
- 2010年
- 从海南热带生境中采集样品14份,以CMC-Na为唯一碳源的培养基,筛选获得纤维素酶活性较高的放线菌DA08506和DA08602,CMC酶活力分别为276.642U/mL、773.982U/mL,FPA酶活力分别为82.638U/mL、325.674U/mL。通过多相分类,初步鉴定菌株DA08506可能是Streoptomyces的一个新种;菌株DA08602鉴定为Streptomyces chartreusis。
- 黄惠琴黄美容叶建军朱军鲍时翔
- 关键词：纤维素酶放线菌RRNA基因
- 地下水中锰离子氧化细菌的分离与筛选鉴定被引量：3
- 2009年
- 从沈阳张士经济开发区净水厂的成熟生物滤池中,分离筛选得到了3株具有较强Mn2+氧化能力的革兰氏阴性细菌,分别命名为Mn1、Mn2和Mn3。经3个菌株的16S rDNA鉴定及其系统发育学分析表明,菌株Mn1和Mn2为Delftia属,菌株Mn3为Klebsiella属。进一步考察了3株菌对地下水中浓度为2 mg/L的Mn2+氧化及发酵能力。结果表明,3株菌均可在12 h内达到使1 m3生物滤料成熟时所需的最少生物量;且Mn1、Mn2和Mn3对Mn2+的相对氧化能力分别为96%、94%和85%,为生物滤池法去除地下水中铁锰的快速启动提供了菌种基础。
- 路杨刘相国杨朔宁波张晓英郝东云
- 关键词：系统发育学分析地下水
- 人碳酸酐酶单点突变Gln92Pro对酶活性、稳定性和折叠路径的影响(英文)
- 2012年
- 本文研究了单点突变Q92P对酶活性,稳定性以及折叠途径的影响.尽管该位点不直接参与底物催化,但92位氨基酸的突变对酶的活性,稳定性以及折叠过程产生了重大的影响.该突变的酶活性有较大程度的降低,通过模拟发现该位点的氢键网被破坏.而且光谱实验表明该突变导致更多被掩埋的色氨酸暴露于周边环境,但并没有较大的影响到二级结构和疏水面暴露程度.在对抗化学品诱导的去折叠程度上,相比于野生型蛋白,该突变蛋白稳定性较差.通过吉布斯自由能的计算发现该突变位点轻微的降低了中间体的稳定性,但相对更大的影响了天然态的稳定性,天然态至中间体的能量大约为野生型的20%左右.该结果有组于解释在折叠过程中倾向于聚沉的中间体的存在,该中间体的存在影响了正常的折叠路径.该实验表明92位氨基酸对人碳酸酐酶Ⅱ的活性和稳定性很重要.
- 刘畅蒋彦
- 关键词：基因突变稳定性
- 化学-酶法制备L-高苯丙氨酸被引量：4
- 2008年
- 以苯丙酸乙酯为原料，通过正交设计优化2-氧4-苯基丁酸盐的制备条件：苯丙酸乙酯与草酸二乙酯摩尔比为1：3，缩合反应时间为2．5h，H2SO4质量分数为20％，水解反应时间为15h，优化条件下2-氧-4-苯基丁酸盐的产率为68．24％。随后，利用E．coli A5所产的天冬氨酸转氨酶为生物催化剂制备L-高笨丙氨酸。酶转化反应的最适条件为：游离细胞体系pH、温度、底物质量浓度和细胞质量浓度分别为8．5、37℃、20g/L和30g／L；而固定化细胞体系则分别为7．0—9．0、40℃、10g／L和30g/L。采用廉价的L-谷氨酸（L—Glu）作为氨基供体，添加表面活性剂有利于提高L-HPA产率。通过研究固定化细胞转化反应进程，结果发现8h内90％的底物可转化为L—HPA。
- 贾红华陈永生陈美娟韦萍黄和
- 关键词：天冬氨酸转氨酶固定化
- 菌落PCR快速扩增工业酿酒酵母基因组DNA片段被引量：7
- 2010年
- 针对工业酿酒酵母细胞破壁难和提取基因酵母组DNA费时长(2-3 h/样品)的问题,研究了SDS-微珠涡旋破壁的方法。以破壁液上清为模板进行菌落PCR扩增酿酒酵母南阳K基因组中铜抗性蛋白基因(cup1)片段和rDNA片段。结果表明,在不需要提取酵母基因组前提下,利用该方法能有效地扩增酵母基因组DNA片段,同时该方法也适用于对转基因酿酒酵母进行菌落PCR从而实现对转化子的准确和快速地鉴定筛选,是一种成本低和易于操作的适于处理大量样品的方法。
- 阳辛凤高秋芳李锡敏郭安平孔华贺立卡
- 关键词：酿酒酵母菌落PCR破壁
- 用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达cbhⅡ基因
- 2010年
- 用套叠PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbh Ⅱ。通过电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌。用葡萄糖作为碳源摇瓶发酵3 d,分泌的重组蛋白CBHⅡ达到50 mg/L。用CMC酶活法测定发酵液中的CMC酶活力为2.05 U/mL。
- 易国辉屠发志张爱联张添元屈直罗进贤
- 关键词：毕赤酵母基因表达酶活力
- CUP1为筛选标记的酿酒酵母整合型多基因表达载体的构建
- 2011年
- 为了赋予工业酿酒酵母对淀粉和纤维素的降解活性,提高酿酒酵母对粗木薯粉进行酒精发酵时的酒精产率;另一方面,为了解决工业酿酒酵母不适于使用营养缺陷型筛选标记对转化子进行筛选的问题,以及避免引入抗药性标记基因带来的安全性问题,构建了以抗铜蛋白基因CUP1为筛选标记的酿酒酵母整合型多基因表达载体。以载体pYES2-PMF-rDNA为基础,以新的筛选标记基因CUP1替换原有的尿嘧啶Ura-基因,得到载体pYES2M。再顺序插入葡聚糖内切酶基因eg3、葡萄糖淀粉酶基因ga1和β-葡萄糖苷酶基因bgl1,构建得到以CUP1为筛选标记的酵母整合型三价表达载体pYES2M-eg3-ga1-bgl1,其中每个基因都具有独立而完整的表达盒,包括启动子、信号肽和终止子,从而实现多基因单表达载体一次转化。
- 阳辛凤徐林弓淑芳郭安平孔华贺立卡
- 关键词：酿酒酵母
- 黑曲霉β-葡萄糖苷酶产酶条件的优化
- 2012年
- 本研究对Aspergillus niger Glu05生产β-葡萄糖苷酶的培养基组分及培养条件进行了优化。优化后的培养基组成和培养条件分别为:麸皮4%,tryptone 4%,1μmol MnSO_4,1μmol NaCl,KH_2PO_4 0.2%,pH自然,摇床转速250 r/min,培养温度30℃,培养周期5 d。优化后发酵液中酶活力达到44.11 IU/mL,与初始的产酶水平32.87 IU/mL相比,提高了36%。
- 王茜孙海彦彭明
- 关键词：ASPERGILLUSNIGERΒ-葡萄糖苷酶
- 普鲁兰酶产生菌的筛选鉴定与发酵条件的研究被引量：8
- 2011年
- 从海洋中分离出了一株产普鲁兰酶活性较高的菌株BCT-1,初步鉴定为不动杆菌(Acinetobacter sp.)。通过对发酵培养基以及发酵条件的优化,使普鲁兰酶的酶活力达到2.347 U/mL。优化后的发酵培养基成分如下:0.02 g/mL玉米淀粉,0.01 g/mL^0.012 5 g/mL酵母膏,0.001 g/mL KH2PO4,0.000 5 g/mL MgSO.47H2O及0.000 01 g/mL FeSO4.7H2O。最佳培养条件为:发酵初始pH 6.0,接种量为8%,培养温度30℃,500 mL摇瓶装液量为150 mL,摇瓶转速为200 r/min,发酵周期72 h。
- 朱梦孙海彦彭明
- 关键词：普鲁兰酶发酵条件
