国家自然科学基金(91013014)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张俊平李英华胡振林厉建中吴红媛更多>>
- 相关机构：第二军医大学福建中医药大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 核糖体蛋白RPS3a腺病毒载体的构建和体外表达
- 2013年
- 目的构建核糖体蛋白RPS3a的腺病毒表达载体,并进一步验证其在细胞中的表达。方法应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,并将RPS3a亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及测序鉴定后,再将含RPS3a基因的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-RPS3a进行PineⅠ酶线性化处理,转化到含有骨架质粒的BJ5183感受态菌,进行同源重组。鉴定后,经PacⅠ线性化转染HEK293细胞,包装重组腺病毒。病毒感染NIH3T3细胞,Western blot分析RPS3a蛋白的表达。结果证实pAdTrack-CMV-RPS3a及pAdEas-RPS3a质粒构建正确;Western blot检测病毒感染的NIH3T3细胞总蛋白,与pAd-GFP阴性对照组相比,RPS3a蛋白表达量显著提高。结论成功构建了能表达RPS3a基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其生物学功能奠定基础。
- 吴红媛厉建中张俊平
- 关键词：腺病毒
- 核糖体蛋白S3a RNA干扰重组慢病毒载体的构建及其对细胞凋亡的影响
- 2015年
- 目的 构建小鼠核糖体蛋白S3a（RPS3a）特异性RNA干扰重组慢病毒载体（Lenti-shmRPS3a）,分析其对细胞凋亡的影响。方法 设计针对小鼠RPS3amRNA的4条干扰序列,合成相应的发夹序列,连接入慢病毒载体系统pLLU2GeGFP中构建重组质粒,将重组质粒与辅助包装质粒共转染293T细胞组装病毒,检测病毒滴度。病毒感染RAW264.7细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果,流式细胞术分析其对凋亡的影响。结果 PCR和测序证明成功构建出LentishmRPS3a慢病毒载体,病毒滴度为（6~9）×107 TU/mL;RT-PCR表明Lenti-shmRPS3a的沉默效率高达72.64%,蛋白质印迹法证明RPS3a蛋白表达水平降低;流式细胞术证明感染了Lenti-shmRPS3a的细胞凋亡率较对照组升高（P〈0.05）。结论 表达小鼠RPS3ashRNA的慢病毒载体能有效沉默RPS3a基因表达,促进细胞凋亡。
- 李英华王婧邱磊厉建中胡振林张俊平
- 关键词：RNA干扰慢病毒属细胞凋亡
- 核糖体蛋白S3a在肿瘤细胞增殖分化和凋亡调控作用的研究概况被引量：3
- 2012年
- 目的综述核糖体蛋白S3a在肿瘤细胞增殖分化和凋亡调控作用的研究进展。方法参阅近几年国内外相关文献,对核糖体蛋白S3a的结构、功能及其异常表达对肿瘤细胞增殖分化和凋亡的调控等方面的进展进行归纳总结。结果与结论核糖体蛋白S3a除了在蛋白质合成中起重要作用外,还有独特的核糖体外功能。其在多种肿瘤细胞中高表达,通过调控癌基因和抑癌基因的表达可影响肿瘤细胞的增殖分化与凋亡。
- 李英华胡振林张俊平
- 关键词：肿瘤细胞增殖
