国家自然科学基金(30340045)
- 作品数：12 被引量：93H指数：4
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- 特异性脱氧核酶对小鼠呼吸道合胞病毒感染的抑制作用
- 2009年
- 目的研究特异性抑制呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)N基因的脱氧核酶DZ1133在小鼠体内对病毒复制和气道炎症的影响。方法RSV感染BALB/c小鼠滴鼻给予DZ1133及其变异体、反义寡核苷酸AS1133,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度,RT-PCR检测病毒mRNA表达,支气管肺泡灌洗液白细胞计数,ELISA检测TNF-α、IL-12、IFN-γ和IL-10水平,肺组织病理学分析炎症情况。结果0.2、0.4mg和0.8mgDZ1133治疗组小鼠肺组织病毒滴度分别为(2.75±0.21)×105、(1.86±0.20)×105PFU/g和(1.02±0.22)×105PFU/g,与感染对照组小鼠(7.94±0.42)×105PFU/g比较明显下降(P<0.01),上述各剂量治疗组小鼠肺组织病毒mRNA表达与感染对照组比较分别下降30.51%、47.38%(P<0.05)和53.97%(P<0.01)。0.4mgDZ1133治疗降低RSV感染小鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数,改善肺组织病理学损伤(P<0.05),对TNF-α、IL-12、IFN-γ和IL-10水平无显著性影响(P>0.05)。结论特异性脱氧核酶DZ1133在小鼠体内有效抑制RSV复制、减轻气道炎症,是有效的抗RSV途径。
- 周娟解元元王莉佳赵晓东杨锡强
- 关键词：呼吸道合胞病毒脱氧核酶基因治疗
- BALB／c鼠和裸鼠呼吸道合胞病毒感染比较研究被引量：1
- 2008年
- 目的比较普通BALB／c鼠和裸鼠呼吸道合胞病毒（RSV）感染免疫及炎症反应特点。方法BALB／c鼠和裸鼠感染RSV后不同时间空斑形成试验检测肺组织病毒滴度，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞总数和分类，HE染色分析肺组织病理学改变，免疫组化检测肺组织F4／80^＋细胞和CD9b^＋细胞。ELISA检测BALF中TNF—α、IFN-γ、IL-12和IL-10浓度。结果BALB／c鼠和裸鼠感染RSV后肺组织病毒滴度在第3天达峰值，感染裸鼠带毒时间更长，在感染后各天病毒滴度明显高于BALB／c鼠（P〈0．05），肺组织病理改变也更重。感染BALB／c鼠和裸鼠BALF白细胞总数明显升高，分类以淋巴细胞为主。感染裸鼠与感染BALB／c鼠比较，肺组织检测到更多的F4／80^＋巨噬细胞和CD49b^＋NK细胞（P〈0．05），BALF中TNF—α、IL-12和IL-10水平更高（P〈0．05）。结论RSV感染裸鼠与BALB／c鼠比较，病毒复制水平更高，时间更持久，炎症反应更重。单核巨噬细胞和NK细胞是RSV感染重要的免疫细胞和炎症细胞，炎症反应强度并不一定与T细胞免疫应答平行。
- 周娟杨锡强赵晓东王莉佳蒋利萍
- 关键词：呼吸道合胞病毒炎症免疫
- 短发卡结构状RNA体外抑制呼吸道合胞病毒M2基因mRNA水平和病毒蛋白表达的研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察针对人类呼吸道合胞病毒(RSV)M2基因mRNA构建的短发卡结构状RNA重组质粒在细胞水平对RSV复制的影响,为利用RNA干扰技术抑制RSV感染的研究奠定基础。方法将已成功构建的重组质粒pshRNA7816/8330转染HEp-2细胞,通过显微镜观察pshRNA7816/8330对RSV感染细胞病变(CPE)的抑制效率,利用四甲基偶氮唑盐比色实验检测pshRNA7816/8330的细胞毒性,经RT-PCR方法检测pshRNA7816对RSVM2mRNA表达的影响,免疫细胞化学染色法检测pshRNA7816对细胞内RSV蛋白的影响。结果pshRNA7816/8330对HEp-2细胞的正常生长没有明显的细胞毒性作用,2个重组质粒均能抑制RSV所致的CPE,但pshRNA7816对CPE抑制作用较pshRNA8330要强,RT-PCR和免疫细胞化学染色法结果显示pshRNA7816能明显降低RSVM2基因mRNA和RSV蛋白表达水平。结论针对RSVM2-1基因所构建的短发卡结构状RNA重组质粒pshRNA7816在细胞水平能有效抑制RSV的CPE形成降低RSVM2mRNA和病毒蛋白表达水平,从而干扰RSV的复制。
- 崔玉霞王莉佳周娟蒋利萍杨锡强
- 关键词：呼吸道合胞病毒
- 呼吸道合胞病毒感染及反义基因治疗的研究进展被引量：3
- 2006年
- 一、呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）感染及治疗现状
1．RSV基因结构与蛋白功能：RSV属于副黏病毒科，肺炎病毒属，为非节段性单股负链RNA病毒，含有大约15000个核苷酸，其基因顺序依次为：3′NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2-（M2-1／M2-2）-L-5′，共编码11个病毒蛋白，分别为：
- 崔玉霞杨锡强
- 关键词：呼吸道合胞病毒感染反义基因治疗副黏病毒蛋白功能病毒蛋白
- 普通小鼠和裸小鼠呼吸道合胞病毒感染模型比较被引量：2
- 2006年
- 目的:比较研究BALB/c小鼠和裸小鼠呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型的特点,建立理想的动物模型。方法:BALB/c鼠和裸鼠感染RSV后不同时间空斑形成实验检测肺组织病毒滴度,计数支气管肺泡灌洗液白细胞总数和分类情况,免疫荧光和免疫组化检测RSV抗原,光镜和电镜检查肺组织病理学改变。结果:感染后裸鼠肺组织RSV滴度明显高于BALB/c鼠,两者都在第3天达峰值,带毒时间分别为大于9天和6天,免疫组化和免疫荧光检测到RSV抗原,支气管肺泡灌洗液和肺组织病理学检查表现的以淋巴细胞浸润为主的炎症反应,裸鼠明显重于BALB/c鼠。结论:裸鼠和BALB/c鼠RSV感染特点相似,感染程度更重,有利于抗RSV药物效果评价,是较理想的RSV感染小鼠模型。
- 周娟胡敏王莉佳崔玉霞刘雪梅杨锡强
- 关键词：呼吸道合胞病毒小鼠动物模型
- 抗呼吸道合胞病毒M2-1基因pshRNA载体质粒的构建及效应研究被引量：8
- 2005年
- 目的构建针对人类呼吸道合胞病毒(RSV)M2-1基因mRNA的pshRNA表达载体,并在培养细胞内观察其对RSV复制的影响,为从基因水平抑制RSV感染的研究奠定基础。方法将构建成功的表达载体pshRNA7816转染Hep2细胞,然后利用光镜观察pshRNA7816对RSV致Hep2细胞病变效应的影响,空斑实验检测RSV滴度变化以及四甲基偶氮唑盐比色实验检测pshRNA7816对被RSV感染后细胞的保护作用。结果成功构建了针对RSV M2-1基因mRNA的pshRNA7816载体质粒,研究发现pshRNA7816能明显改善RSV所致的病变效应,降低RSV在细胞内复制的病毒滴度,并且能明显提高被RSV感染后细胞的存活率(P<0.001),非特异性质粒无抗RSV效应。结论针对RSV M2-1基因的pshRNA7816的载体质粒具有明显的和特异性的抗RSV效应的作用。
- 崔玉霞周娟方平蒋利萍王莉佳杨锡强
- 关键词：呼吸道合胞病毒质粒病毒复制
- 特异性反义寡核苷酸抗小鼠呼吸道合胞病毒感染的研究被引量：4
- 2007年
- 目的比较研究特异性抑制呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)的反义核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,AS-ODN)和利巴韦林对RSV感染小鼠的治疗作用,寻求安全有效的抗RSV药物。方法特异性AS-ODN和利巴韦林滴鼻治疗RSV感染BALB/c鼠,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度,RT-PCR和免疫组织化学分析RSVmRNA和蛋白表达水平,支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞计数、肺组织病理学检查了解气道炎症和治疗副作用。结果0.2、0·4mgAS-ODN和0.8mg利巴韦林能降低RSV感染小鼠肺组织病毒滴度,空斑抑制率分别为34.48%、46.75%和23.02%,与感染对照组比较差异显著(P<0·05)。0.4mgAS-ODN抑制RSVmRNA和蛋白表达,抑制率分别为30.54%和29.41%,0.4mg利巴韦林治疗降低17.65%的RSV蛋白表达。AS-ODN和利巴韦林都降低RSV感染小鼠BALF中白细胞总数,对肺组织病理性改变没有明显改善作用,与感染对照组比较差异不显著(P>0.05)。单独AS-ODN和利巴韦林滴鼻不会引发明显肺炎症病理损害。结论AS-ODN在小鼠体内有比利巴韦林更强的抗RSV作用,经滴鼻治疗没有明显毒副作用,是安全而有效的抗RSV制剂。
- 周娟崔玉霞杨锡强王莉佳蒋利萍
- 关键词：呼吸道合胞病毒反义核苷酸利巴韦林
- 树鼠句呼吸道合胞病毒感染动物模型的建立被引量：5
- 2006年
- 探讨用灵长类动物树鼩建立呼吸道合胞病毒（RSV）感染动物模型的可行性。28只树鼩随机分为7组，每组4只，鼻内滴入10^6PFU RSV，感染后每24h检测1组：另取7只树购鼻内滴入100μl Hep-2细胞培养液，滴鼻后每24h检测1只作对照：无菌取树鼩肺组织进行病毒分离、空斑形成实验检测病毒滴度、病理检查和RT-PCR检测肺组织内RSV mRNA表达：结果显示：树鼩感染RSV后，无明显呼吸道感染症状；树鼩肺组织匀浆接种于Hep-2细胞上，第3、4、5实验组出现细胞病变效应（CPE）；树鼩感染RSV后肺部病理改变在3～7d较为明显，主要为间质改变；在10^6 PFU感染浓度下树鼩肺组织内RSV处于低水平复制，复制的高峰期在3～5d，峰值在第4d。提示：树鼩可以用来建立RSV感染的动物模型。
- 刘崇海杨锡强李瑗
- 关键词：呼吸道合胞病毒树鼩动物模型
- 重庆医科大学儿童医院急性呼吸道感染住院患儿病毒病原学分析被引量：67
- 2005年
- 目的分析住院急性呼吸道感染(ARI)患儿病毒病原检测结果,为临床儿童急性呼吸道感染提供病毒病原学诊断依据。方法选择2003年4月至2005年3月重庆医科大学儿童医院呼吸内科住院治疗的急性呼吸道感染患儿,取其鼻咽分泌物做免疫荧光检测筛查7种常见呼吸道病毒抗原,包括呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒、流感病毒A及B型、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,对检测标本阳性的病例进行统计分析。结果1052份标本中,阳性标本409份,占38.88%。其中RSV阳性标本360份,占总阳性标本例数的88.02%,副流感病毒Ⅲ37份占9.05%;RSV发病高峰时期在12月至次年2月和7、8月两个时期;RSV感染多见于3岁以下,发病高峰年龄为2～6个月,男女发病比例为2.24∶1。结论2003～2005年重庆地区急性呼吸道感染的病毒病原体仍以RSV为主。
- 王莉佳刘恩梅赵晓东蒋利萍罗晓菊杨锡强
- 裸鼠呼吸道合胞病毒感染的动物模型被引量：6
- 2006年
- 呼吸道合胞病毒(RSV)是全世界婴幼儿下呼吸道感染的首位病毒病原体,免疫缺陷个体容易发生严重感染,目前尚无理想RSV感染动物模型用于研究。我们用细胞免疫缺陷裸鼠感染RSV,旨在建立理想的动物模型,为RSV感染的防治研究奠定基础。裸鼠滴鼻感染RSV后肺组织分离到病毒,直接免疫荧光检测到支气管肺泡灌洗液RSV抗原阳性,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度在感染后第3天达高峰,并持续到第9天仍能检测到病毒。免疫组化检测RSV抗原主要分布在细支气管、毛细支气管和肺泡上皮细胞胞浆内。肺组织病理学显示RSV感染导致裸鼠淋巴细胞浸润为主的肺间质性炎症,电镜分析超微结构可见到细胞内病毒颗粒和气血屏障的破坏。支气管肺泡灌洗液白细胞计数显示裸鼠RSV感染炎症高峰在感染后第9天。裸鼠RSV感染的病毒复制和病理改变特点与人相似,病毒持续高水平复制,是客观而实用的评价抗RSV制剂效果的小鼠模型。
- 周娟王莉佳崔玉霞刘雪梅杨锡强
- 关键词：呼吸道合胞病毒裸鼠动物模型
