国家自然科学基金(30460081)
- 作品数：15 被引量：111H指数：7
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- 番茄红素β环化酶基因RNAi植物表达载体的构建及遗传转化被引量：1
- 2010年
- 番茄红素是类胡萝卜素合成途径中重要的中间产物,本研究探讨了在番茄中通过RNAi手段提高番茄红素含量的依据,由Genbank中番茄红素β环化酶(Lyc-β)序列设计2对引物,通过高保真PCR扩增出2段Lyc-β基因的高度保守片段。根据RNAi的原理将该基因片段构建成为具有RNA干扰作用的植物表达载体,将该干扰载体通过农杆菌介导转化的叶盘法转入烟草中。经过PCR鉴定证明,干扰载体已经转入烟草中。
- 马超马兵钢郝青南何娟王蕾
- 关键词：类胡萝卜素番茄红素RNAI
- 根癌农杆菌介导转化番茄的影响因素被引量：16
- 2008年
- 综述影响根癌农杆菌介导番茄转化效率的因素,包括根癌农杆菌菌株类型、Vir基因的活化、选择标记基因、植物基因型、外植体类型、培养基中是否附加植物激素和抑菌抗生素、菌液浓度、侵染时间长短,是否预培养和共培养天数等;同时不同的培养方式也是影响番茄转化效率的主要因素,包括液体培养法、农杆菌介导的floral-dip转化法、超声波辅助农杆菌介导法、农杆菌介导与基因枪轰击结合法等。
- 张录霞牛建新马兵钢
- 关键词：番茄根癌农杆菌
- 构建番茄红素β/ε环化酶基因RNAi植物表达载体及其表达分析被引量：7
- 2010年
- 根据GenBank中Lyc-β基因(X86452)及Lyc-ε基因(Y14387)设计引物,通过高保真PCR从番茄cDNA中克隆到两段长度为302和330bp的Lyc-β基因片段和两段长度为302和288bp的Lyc-ε基因片段。从质粒pCAMBIA-2301(AF234316)克隆出gusA基因长度为168和235bp的2个内含子片段。根据RNAi原理将正、反向序列与内含子连接,之后插入启动子与终止子之间构建成4组植物表达载体。利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草植株,通过PCR鉴定共获得107株转基因植株。利用荧光定量PCR分析干扰效果,结果显示经4组干扰载体干扰后,转基因植株中目的基因mRNA含量分别为对照的3.4%、16.4%、15.2%和21.8%。进一步用HPLC对应分析转化株的番茄红素含量,结果表明转基因植株中番茄红素平均增长量分别为3.4、2.1、3.4和2.0μg/g。同时测定转基因植株中的β-胡萝卜素与叶黄素含量,发现它们根据干扰的基因不同呈现对应的变化。
- 马超何娟郝青南王蕾鲁晓燕马兵钢
- 关键词：番茄红素Β-胡萝卜素叶黄素RNAI
- 大豆异黄酮合酶基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2007年
- 目的:大豆异黄酮是多酚类混合物,有防治肿瘤发生,提高机体免疫力等多种保健功能。异黄酮合酶(isoflavone synthase,IFS)是合成异黄酮的关键酶。本文为了利用异黄酮的特有生物学功能,从大豆中克隆了该基因。方法:采用PCR扩增从大豆[Glycine max(Linn.)Merr.]总RNA中分离了异黄酮合酶基因,并将其克隆到pUCm-T载体并测序。结果:得到全长1583bp的片段。以期用于构建诱导表达基因敲除系统,并用于无性繁殖植物的无标记基因转化。结论:序列分析表明,异黄酮合酶基因(IFS1)含1583个核苷酸,与已报道的序列比较,核苷酸的同源性为92%。
- 段小瑜马兵钢牛建新
- 关键词：大豆基因克隆
- 植物无标记转化的诱导表达Cre/loxP重组系统的构建被引量：3
- 2008年
- 应用Cre/loxP系统位点专一性重组的特点构建诱导表达的定位重组系统,用以特异性的敲除转基因植物的标记基因。为了获得诱导表达启动子,从大豆基因组DNA中用pfu酶克隆热激蛋白启动子gmhsp17.5c,将其克隆到pUC118-HincⅡ载体并测序。结果表明,508nt的gmhsp17.5c与已报道序列(GenBank,AF544399)比较,核苷酸的同源性为99.8%。利用该诱导启动子分别构建了含gmhsp17.5c-cre基因组件和gmhsp17.5c-gus基因组的诱导型植物表达载体pC23HC和pC23HG。此外1个含有loxP-gus-loxP组件的组成型植物表达载体pC23LG被构建。通过对3个植物表达载体做多重酶切及亚克隆后测序分析表明载体pC23HC全长10947bp,载体pC23HG全长11396bp,载体pC23LG全长11900bp,符合预期设计。一套由pC23HC和pC23LG组成的植物无标记转化的诱导表达Cre/loxP重组系统被构建,为进一步将诱导表达的标记基因删除系统用于植物的无标记转化奠定基础。
- 段小瑜张录霞马超郝青楠马兵钢
- 关键词：标记基因
- 番茄花药培养愈伤组织诱导及不定芽形成的研究被引量：6
- 2010年
- 为了建立番茄花药愈伤组织诱导及分化的实验体系,通过花药离体培养并设计不同的试验处理,以6个番茄品种的花药为试材,研究了植物生长调节剂、蔗糖浓度、硝酸银浓度、基因型和培养基对番茄花药培养愈伤组织诱导率及不定芽形成的影响。结果表明:培养基中添加1.0 mg/L的2,4-D和0.5 mg/L的KT,里格尔87-5和石番9号愈伤组织诱导率都达最高;培养基中加入30g/L的蔗糖,里格尔87-5的愈伤组织诱导率达20.24%;培养基中加入10μmol/L的硝酸银,花药组织褐化率较对照降低了70.59%,当浓度超过50μmol/L,褐化率增高,出愈率略有降低;不同基因型愈伤组织发生率明显不同,相同培养条件下,里格尔87-5的诱导率高达21.43%,而粉B二号的诱导率仅有0.46%;培养基中加入175g/L的马铃薯汁、0.1%的活性炭,6个材料的愈伤组织平均诱导率较对照分别降低了35.14%、95.48%。番茄花药愈伤组织在MS+6-BA2 mg/L+ZT0.5 mg/L+IAA0.1 mg/L培养基上可再分化成不定芽,不定芽诱导率达15.15%。
- 吴志苹马兵钢鲁晓燕
- 关键词：番茄花药培养愈伤组织不定芽
- 草莓多聚半乳糖醛酸酶基因RNAi植物表达载体的构建及表达鉴定被引量：4
- 2009年
- 从草莓叶片中克隆到多聚半乳糖醛酸酶基因的1个281bp片断,构建含该正、反向互补重复序列DNA片段的中间载体,经测序证实连接正确后,克隆到植物表达载体p2300121中的GUS基因位置并经双酶切证实,得到RNAi表达载体。采用直接转化法将PG2300121导入根癌农杆菌菌株EHA105,并用新构建的工程菌对普通烟草进行了遗传转化研究。在Kanamycin选择压力下获得的烟草转化不定芽和完整植株,经PCR方法鉴定,证实了该基因已导入烟草基因组中。
- 郝青南马超马兵钢
- 关键词：草莓RNAI
- 白藜芦醇的药理功能及分离检测研究进展被引量：12
- 2008年
- 综述了近年来有关白藜芦醇的药理学及化学研究进展。包括白藜芦醇的抗氧化作用、抗菌作用、抗癌作用、预防心血管疾病的作用、保护肝脏的作用、免疫调节作用和激素调节作用。介绍了有机溶剂浸提法、碱溶酸沉淀法提取法、微波辅助提取法、超临界CO2萃取法和超声波辅助处理提取法从虎杖等植物中提取白藜芦醇。分析了白藜芦醇的检测方法,包括分光光度法、高效液相色谱法、荧光法等及这些方法的特点。为白藜芦醇的开发利用提供参考资料。
- 马超郝青南马兵钢
- 关键词：白藜芦醇药理学
- 大豆异黄酮分离检测及保健功效的研究被引量：10
- 2008年
- 针对近年来国内外大豆异黄酮的保健功能及结构的相关研究,分析了层析法、高效液相色谱法、高速逆流色谱法分离大豆异黄酮的方法,讨论了紫外分光光度法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、薄层扫描色谱法、双向纸层析色谱法及免疫法等检测大豆异黄酮的方法及其这些分离检测方法的特点。
- 马兵钢郝青南马超
- 关键词：大豆异黄酮保健功效
- 不同色泽番茄品种类胡萝卜素含量的HPLC分析被引量：4
- 2011年
- 以成熟果为红色、紫红色、枣红色、棕色、黄色、青绿色的6个番茄品种为试材,采用高效液相色谱外标法对果实成熟过程中绿熟期、发白期、显色期、转色期、红熟期的番茄红素、叶黄素、β-胡萝卜素含量进行测定。结果表明:在番茄果实成熟过程中,不同番茄果实番茄红素、叶黄素、β-胡萝卜素含量不同。红果番茄番茄红素含量最高,绿果、黄果番茄基本不含番茄红素。而绿果、黄果番茄的叶黄素、β-胡萝卜素明显高于其它颜色的番茄。番茄红素在绿熟期、发白期基本上没有形成,转色期是番茄红素形成的一个过渡期,在成熟期含量达到了最高。叶黄素、β-胡萝卜素含量在绿熟期都有少量生成,发白期略微下降,转色期开始上升,成熟期含量达到最高。
- 王蕾岳英鲁晓燕马兵钢
- 关键词：番茄果实番茄红素叶黄素
