北京市自然科学基金(7122145)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院北京协和医学院更多>>
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- 稳定表达人血红素加氧酶-1细胞系的建立及其功能鉴定
- 2014年
- 目的构建稳定表达人血红素加氧酶-1(HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用。方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒。用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Western blot检测HO-1的表达。将重组质粒与慢病毒辅助质粒(plp1、plp2、VSVG)共同转染HEK293T细胞,包装有活力的慢病毒。用携带HO-1的慢病毒感染HEK293T细胞,筛选出能稳定表达目的基因的单克隆,并行Western blot检测HO-1的表达。将过氧化氢加入正常的及过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞,检测细胞内活性氧的含量。结果成功筛选出能稳定表达HO-1的单克隆细胞系并扩大培养,Western blot检测其HO-1的表达明显升高。加入过氧化氢后,过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞内的活性氧明显减少。结论成功构建了能稳定表达人HO-1的细胞系,内源性过表达HO-1能够对抗细胞的氧化损伤。
- 杨根欢吴为李砚川倪冷王占启宋希涛刘昌伟
- 关键词：血红素加氧酶-1慢病毒
- 巨噬细胞增强H_2O_2抑制人血管内皮细胞和兔血管平滑肌细胞的增殖被引量：1
- 2013年
- 目的探讨H2O2处理对巨噬细胞分泌因子的影响,及对血管内皮细胞(VEC)及平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法实验分组:空白对照组,0.5 mmol/L H2O2组,巨噬细胞条件培养基组,巨噬细胞+0.5 mmol/L H2O2条件培养基组。CCK-8测定VEC和VSMC的增殖情况。ELISA检测白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)。Western blot检测增殖核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白cyclinD1的表达,以及血管内皮细胞内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果 VEC中其他3个处理组的增殖水平均低于对照组(P<0.05),而在VSMC中,巨噬细胞组的增殖水平高于空白对照组(P<0.05)。在VEC和VSMC中,巨噬细胞+0.5 mmol/L H2O2组的增殖水平均高于单独0.5 mmol/L H2O2处理组(P<0.05),且低于单独巨噬细胞处理组(P<0.05)。巨噬细胞分泌的IL-6、IL-10、MCP-1随时间和H2O2的浓度增加而增高(P<0.05)。VEC分泌的VEGF在1.0 mmol/L H2O2浓度时有明显增高(P<0.05)。结论氧化应激处理可影响巨噬细胞炎性因子的分泌,进而影响血管内皮细胞和平滑肌细胞的增殖。
- 李天佳刘暴倪冷来志超吴立飞刘昌伟
- 关键词：氧化应激炎性因子增殖
- HO-1减轻吸烟大鼠血清引起的HUVEC氧化损伤
- 2014年
- 目的探讨血红素氧化酶-1(HO-1)是否能够减轻吸烟大鼠血清引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧化损伤。方法 15只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、吸烟组、吸烟并注射锌原卟啉(Zn PP)组。建立大鼠吸烟模型。Western blot检测各组大鼠颈动脉中HO-1的表达。体外培养HUVEC,分为加入正常大鼠血清、吸烟大鼠血清和吸烟并注射Zn PP大鼠血清。Western blot检测各组HO-1的表达。将吸烟大鼠血清加入HO-1过表达及HO-1低表达的HUVEC中,应用二氢溴化乙啶检测各组活性氧的含量。结果吸烟可以明显诱导大鼠颈动脉中HO-1的表达(P<0.01)。吸烟大鼠血清及吸烟并注射Zn PP大鼠血清均可诱导HUVEC中HO-1的表达,但后者作用更强(P<0.01)。吸烟大鼠血清能使HUVEC内活性氧含量增多(P<0.01),HO-1能减轻此氧化损伤(P<0.01)。结论吸烟大鼠血清可以造成HUVEC的氧化损伤,H0-1能够减轻此氧化损伤作用。
- 杨根欢吴为李砚川倪冷王占启王超楠刘昌伟
- 关键词：吸烟血红素氧化酶-1内皮细胞
