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骨髓间充质干细胞对重症哮喘患儿外周血Th17/Treg的免疫调节作用被引量：10: 2014年; 目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外对重度哮喘患儿外周血辅助性T细胞17(Th17)和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的免疫调节作用。方法:体外分离、培养和鉴定MSCs。MSCs经丝裂霉素处理后按不同比例(1∶1、1∶2、1∶10和1∶20)与哮喘患儿外周血T淋巴细胞(TLC)直接接触共培养,检测各组MSCs对TLC的增殖调节作用。选取上述1∶2比例共培养体系和单独TLC培养体系,ELISA法分别检测Th17的效应分子白细胞介素17(IL-17)和Treg效应分子转化生长因子β(TGF-β)水平,qRT-PCR法检测转录因子维甲酸相关孤儿核受体(RORC)及叉头框蛋白3(Foxp3)mRNA表达水平。结果:MSCs可显著抑制重度哮喘患儿TLC增殖,且随着MSCs数量的增加,抑制作用增强。MSCs+TLC共培养组Th17转录因子RORC mRNA和效应因子IL-17表达较TLC组下降,同时TGF-β表达增高,而Treg细胞调控基因Foxp3 mRNA表达无明显改变。结论:MSCs在体外可能通过抑制Th17分化及IL-17的分泌,同时上调TGF-β的表达,进而有效改善哮喘患儿的Th17/Treg失衡状态。; 黄雪琼檀卫平吴葆菁蓝丹吴海飞麦贤弟; 关键词：间充质干细胞哮喘 TH17细胞调节性T细胞

不同亚型中重度支气管哮喘患儿白细胞介素-5、免疫球蛋白E水平变化及意义被引量：8: 2011年; 目的研究IL-5、IgE水平在不同亚型中重度患儿哮喘发病中的变化及意义。方法选取2009年9月-2010年3月于本院儿科哮喘专科门诊就诊的中重度哮喘患儿65例(哮喘组),将哮喘组中急性发作期患儿按诱导痰的细胞分类分为嗜酸性粒细胞(EOS)型哮喘(EA)组及非EOS型哮喘(NEA)组。选取20例健康儿童为健康对照组。采用ELISA法检测不同亚型哮喘患儿血清IgE水平。将哮喘组及健康对照组儿童外周血单个核细胞(PBMC)与CD3单克隆抗体及CD28单克隆抗体共培养,ELISA法检测PBMC在抗体刺激下分泌的IL-5水平。并对IL-5表达水平与IgE水平进行相关性分析,了解IL-5、IgE在不同亚型中重度哮喘患儿中的作用。结果 EA组诱导痰EOS百分比明显高于NEA组(P=0.000)。哮喘组患儿PBMC表达的IL-5水平显著高于健康对照组,急性发作组明显高于临床缓解组,急性发作重度持续组显著高于中度持续组,EA组显著高于健康对照组及NEA组。EA组血清IgE水平显著高于NEA组(P=0.010)。哮喘患儿外周血及EOS诱导痰EOS比例与IL-5、IgE水平呈显著正相关(Pa=0.000);哮喘患儿IL-5水平与IgE水平也呈显著正相关(r=0.482,P=0.001)。结论 IL-5、IgE参与哮喘的发病,IL-5、IgE在EA中的作用较NEA更为突出。IL-5水平与哮喘病情分度密切相关。; 陈环檀卫平李静麦贤弟蓝丹; 关键词：支气管哮喘白细胞介素-5 免疫球蛋白E

RSV感染对人支气管上皮细胞分泌IL-8和Eotaxin-1的影响被引量：2: 2012年; 目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染对人支气管上皮细胞(NHBE)分泌白介素(IL)-8、嗜酸细胞趋化因子Eotaxin-1的影响。方法用Hep-2细胞扩增病毒,并进行毒力鉴定。建立并鉴定RSV感染NHBE的体外细胞模型。实验分RSV感染组和正常细胞对照组,感染组以不同滴度分为1000、500、100、50 TCID504个组,酶联免疫吸附(ELISA)法检测12、24、48和72h各组IL-8、Eotaxin-1水平。结果实时荧光定量RT-PCR法鉴定细胞模型建立成功。相同感染时间内(12、24、48和72h),随着感染滴度增加(50、100、500、1000 TCID50),各感染组IL-8分泌水平均呈上升趋势,与正常细胞对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。相同感染滴度内(50、100、500、1000 TCID50),随着感染时间增加(24、48和72h),各感染组IL-8分泌水平均呈上升趋势,与12h组比较均有统计学差异(P均<0.05);相同感染时间内(12、24、48和72h),随着感染滴度增加(50、100、500、1000 TCID50),各感染组Eotaxin-1分泌水平较正常细胞对照组差异无统计学意义。50、100、500 TCID50相同感染滴度内,随着感染时间增加(24、48和72h),各感染组Eotaxin-1分泌水平较12h组差异无统计学意义。结论 RSV感染人支气管上皮细胞可显著上调IL-8分泌水平,进一步引起以中性粒细胞浸润为主的气道炎症,而早期的RSV感染对Eotaxin-1影响不大。; 蓝丹檀卫平曾巧慧陈环吴葆菁麦贤弟黄花荣; 关键词：呼吸道合胞病毒支气管上皮细胞 IL-8

热毒宁对RSV感染人支气管上皮细胞分泌TSLP的影响被引量：22: 2011年; 【目的】探讨热毒宁对呼吸道合胞病毒(RSV)感染人支气管上皮细胞(NHBE)分泌胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的影响。【方法】用Hep-2细胞扩增病毒,并进行毒力鉴定。建立并鉴定RSV感染NHBE的体外细胞模型。第一部分实验分RSV感染组和正常细胞对照组,感染组以不同滴度分为1000、500、100、50、10TCID505个组,感染12h、48h、72h、96h、120h,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组TSLP水平。第二部分实验将热毒宁以不同给药方式干预RSV感染NHBE,分为预防方式给药组、直接灭活病毒组、治疗方式给药组,并设正常细胞对照和病毒对照组,给药12h、24h、48h、72h,ELISA法检测各组TSLP水平。【结果】实时荧光定量RT-PCR法鉴定细胞模型建立成功。1.RSV对NHBE分泌TSLP的影响:相同感染时间内(12h、24h、48h、72h、96h、120h),随着感染滴度增加,各感染组TSLP分泌水平均呈上升趋势,与正常细胞对照组比较均有统计学差异(P均<0.05)。相同感染滴度内,随着感染时间增加(24h、48h、72h、96h、120h),各感染组TSLP分泌水平均呈上升趋势,与12h组比较均有统计学差异(P均<0.05)。2.热毒宁对RSV感染NHBE分泌TSLP的影响:在12h、24h、48h、72h给药时间内,热毒宁、利巴韦林的不同(预防、直接灭活、治疗)给药方式组与病毒对照组比较,均下调TSLP水平(P<0.05),以预防给药方式明显。【结论】RSV能诱导NHBE分泌TSLP,热毒宁可抑制RSV引起的TSLP分泌增加,以预防方式给药明显,热毒宁可能在病毒感染的控制中起到重要的作用。; 蓝丹檀卫平陈环吴葆菁麦贤弟黄花荣; 关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素支气管上皮细胞

不同亚型哮喘患儿的IL-5、IL-17水平变化被引量：2: 2011年; 目的探讨白细胞介素-5(IL-5)I、L-17在不同亚型中重度儿童哮喘发病中的作用。方法以酶联免疫吸附法(ELISA)检测45例不同亚型中重度哮喘患儿及20例正常儿童外周血单个核细胞(PBMC)在CD3单克隆抗体(0.2mg/L)及CD28单克隆抗体(1mg/L)刺激下分泌的IL-5I、L-17水平,了解IL-5I、L-17与儿童哮喘病情及气道炎症的关系。结果嗜酸细胞型哮喘(EA)组患儿PBMC表达IL-5水平(79.75±13.49)pg/ml显著高于非嗜酸细胞型哮喘(NEA)组(69.73±9.17)pg/ml及正常对照组(51.30±14.33)pg/ml(P<0.01),NEA组患儿PBMC表达IL-17水平(5684.1±884.74)pg/ml显著高于EA组(4938.1±465.58)pg/ml及正常对照组(2685.0±1081.03)pg/ml(P<0.01),慢性持续组IL-5、IL-17水平显著高于临床缓解组(P均<0.05)。结论中重度哮喘患儿外周血单个核细胞IL-5I、L-17表达水平升高,并与临床分期相关I,L-5在EA中的作用较NEA更为突出I,L-17在NEA中的作用较EA更为突出。; 李静檀卫平吴葆菁蓝丹麦贤弟范玲玲吴文英徐小彩; 关键词：哮喘 IL-5

痰热清对呼吸道合胞病毒感染人支气管上皮细胞分泌胸腺基质淋巴细胞生成素作用的体外研究被引量：8: 2011年; 目的探讨痰热清对体外呼吸道合胞病毒(RSV)感染人支气管上皮细胞(NHBE)分泌胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的影响。方法用Hep-2细胞扩增病毒,并进行毒力鉴定。建立RSV感染NHBE体外细胞模型。酶联免疫吸附(ELISA)法检测RSV感染NHBE后TSLP水平。将痰热清以不同给药方式(预防给药、直接灭活、治疗给药方式)干预RSV感染NHBE,ELISA法检测TSLP水平变化。结果实时荧光定量RT-PCR方法鉴定细胞模型建立成功。(1)RSV对NHBE分泌TSLP的影响:相同感染时间内(12h、24h、48h、72h、96h、120h),随着感染滴度增加(10TCID50、50TCID50、100TCID50、500TCID50、1000TCID50),各感染组TSLP分泌水平均呈上升趋势,与正常细胞对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。相同感染滴度内(10TCID50、50TCID50、100TCID50、500TCID50、1000TCID50),随着感染时间增加(24h、48h、72h、96h、120h),各感染组TSLP分泌水平均呈上升趋势,与12h组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。(2)痰热清对RSV感染NH-BE分泌TSLP的影响:在12h、24h、48h、72h给药时间内,痰热清、利巴韦林的不同给药方式与病毒对照组比较,均下调TSLP水平(P<0.05),以预防给药方式最为明显。预防给药方式下,痰热清组较利巴韦林组下调TSLP的作用更明显(P<0.05)。结论 RSV能诱导NHBE分泌TSLP,痰热清可抑制RSV引起的TSLP分泌增加,以预防方式给药明显,痰热清可在病毒感染的控制中起到重要作用。; 蓝丹檀卫平陈环吴葆菁麦贤弟黄花荣; 关键词：呼吸道合胞病毒支气管胸腺基质淋巴细胞生成素痰热清

哮喘患儿外周血RORC和Foxp3 mRNA表达水平的变化及其意义被引量：5: 2012年; 【目的】研究淋巴细胞亚群Th17与Treg上游调控基因维甲酸相关孤儿核受体(RORC)、叉状头转录因子P3(Foxp3)mRNA在支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中的表达变化,并探讨其临床意义。【方法】采用荧光实时定量PCR技术分别检测20例哮喘发作期(年龄8.5±2.3)和20例哮喘缓解期(年龄9.2±1.8)外周血单个核细胞的RORC和Foxp3mRNA表达水平,并与10例健康对照组(年龄8.0±1.6)进行比较。并将哮喘患儿RORC和Foxp3 mRNA表达水平与其同期肺功能第一秒用力呼气容积(FEV1)进行相关分析。【结果】哮喘发作组RORC mRNA水平显著高于缓解组和正常对照组(5.41±0.12 vs 3.33±0.27 vs 3.78±0.13,P<0.01);哮喘发作组Foxp3 mRNA水平显著低于缓解组和正常对照组(3.34±0.12 vs 4.43±0.07 vs 4.13±0.04,P<0.01);缓解组和正常对照组相比,RORC和Foxp3 mRNA水平均无明显差异(P>0.05)。哮喘发作组RORC mRNA/Foxp3 mRNA比值明显高于缓解组和正常对照组(1.68±0.09 vs 0.76±0.06 vs 0.92±0.04,P<0.01)。Pearson相关分析显示,哮喘患儿外周血RORC mRNA水平与FEV1成负相关,而Foxp3 mRNA水平与FEV1成正相关(r分别为-0.58和0.52,P<0.01)。【结论】RORC mRNA/Foxp3 mRNA在发作期哮喘患儿存在失衡表达,提示Th17/Treg失衡可能在哮喘的急性发作及肺功能损伤中起着重要作用。; 黄雪琼檀卫平麦贤弟吴葆菁蓝丹; 关键词：哮喘 RORC FOXP3 TH17细胞 TREG细胞

哮喘患儿外周血RORC mRNA、IL-17水平及其与气道重塑的关系研究被引量：4: 2014年; 目的研究Th17细胞上游调控基因维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)mRNA及主要效应分子IL-17在支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中的表达变化,并探讨其与哮喘气道重塑的关系。方法收集2010年9月至2012年8月中山大学孙逸仙纪念医院儿科就诊的中重度持续哮喘儿童45例,其中哮喘急性发作期25例,临床缓解期20例,以20名健康儿童为对照组。采用荧光实时定量PCR技术和双抗体夹心ELISA法分别检测PBMC中RORC mRNA和IL-17的表达;选取其中14例病程较长的临床缓解期患儿,采用高分辨螺旋CT进行胸部检测及支气管壁测量,并与同期IL-17水平进行相关分析。结果哮喘儿童急性发作期外周血PBMC表达RORC mRNA、IL-17水平均显著高于缓解组和正常对照组;缓解期患儿IL-17水平比对照组明显增高(P<0.05),而RORC mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。中重度哮喘患儿气道壁厚度、气道壁面积均明显增加,且与IL-17水平呈正相关(r分别为0.78、0.77,P<0.05)。结论转录因子RORC及IL-17参与儿童哮喘发病,其中IL-17水平升高与儿童哮喘气道重塑密切相关。; 黄雪琼檀卫平王东烨麦贤弟吴葆菁李静蓝丹; 关键词：白细胞介素-17 哮喘气道重塑 IL-17

中重度哮喘患儿白细胞介素-17与中性粒细胞炎症反应的关系被引量：11: 2010年; 【目的】探讨白细胞介素-17(IL-17)在中重度儿童哮喘发病、气道中性粒细胞炎症反应中的作用。【方法】中重度持续哮喘发作期儿童45例,其中中度持续组(20例)与重度持续组(25例);以健康儿童20例为对照组。以酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组患儿外周血单个核细胞(PBMC)在CD3和CD28单克隆抗体刺激下分泌的IL-17水平,检测诱导痰中性粒细胞数量;对以上病例进行联合治疗3个月后随访,达到临床缓解的病例20例纳入哮喘缓解组,复查其IL-17水平。比较不同病情间IL-17的表达水平,了解IL-17与儿童哮喘临床病情、气道炎症反应的关系。【结果】哮喘患儿PBMC表达IL-17水平显著高于正常对照组(2685±1081)pg/mL,其中哮喘发作组(5355±813)pg/mL显著高于哮喘缓解组(4504±687)pg/mL(P均<0.05);重度持续组患儿PBMC表达IL-17水平(5830±807)pg/mL显著高于中度持续组(4962±751)pg/mL(P<0.05);急性发作期哮喘患儿IL-17水平(5355±813)pg/mL与诱导痰中性粒细胞比例(Xmin=0,Xmax=98.8,M=44.73)%、血中性粒细胞比例(51.72±13.43)%成正相关(r=0.820、0.736,P<0.001)。【结论】中重度哮喘患儿外周血单个核细胞IL-17表达水平升高,并与哮喘临床病情、气道炎症反应密切相关。; 李静檀卫平吴葆菁蓝丹李文益麦贤弟范玲玲; 关键词：哮喘 IL-17 中性粒细胞

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广东省自然科学基金(9451008901003013)

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