国家高技术研究发展计划(2005AA624090)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 鲨肝活性肽S-8300的克隆、分泌表达及重组产物活性研究
- 2010年
- 目的研究鲨肝活性肽S-8300的克隆、分泌表达及重组产物活性。方法根据从鲨鱼肝脏中分离纯化到的S-8300的N端氨基酸序列,设计了一套简并引物,利用RT-PCR方法从再生鲨肝组织的总RNA中扩增到一条cDNA片段,大小为342 bp。结果根据序列分析及氨基酸序列推测的结果,表明这个cDNA片段的N端与S-8300 N端15个氨基酸序列完全一致,genebank和NCB I的搜索结果表明这个cDNA片段是一个新的序列。将这个cDNA片段插入到信号肽pelB基因下游,成功构建了原核分泌表达质粒pET22b-S,将该质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)中成功构建了工程菌pET22b-S/BL21(DE3)。通过对重组菌诱导条件(诱导温度、诱导剂IPTG的浓度)的筛选,SDS-PAGE分析,结果表明,在25℃,0.4 mmol.L-1IPTG诱导条件下,rS-8300在信号肽pelB引导下能够高效的分泌至周质腔中。结论活性研究表明,该分泌表达产物具有与天然S-8300相似的减轻链脲霉素对NIT-1细胞损伤的作用。
- 黄凤杰吕立力钱璟吴梧桐
- 关键词：克隆分泌表达生物活性
