国家自然科学基金(81170237)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：卢宁曹冬青金惠铭于海云朱依纯更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院复旦大学更多>>
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- H_2S抑制Ang Ⅱ引起的神经元活性氧水平升高的机制研究被引量：5
- 2012年
- 目的:探讨硫化氢(H2S)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)所致延髓神经元活性氧(reactiveoxygen species,ROS)水平变化的影响,以及H2S抗氧化应激的相关机制。方法:采用原代培养的延髓神经元,分组如下:对照组、Ang Ⅱ处理组、硫氢化钠(NaHS)处理组、NaHS+Ang Ⅱ处理组和PD98059(p-ERK1/2蛋白的抑制剂)+Ang II处理组。选用二氢乙啶(DHE)荧光探针法测定各组神经元胞内的ROS水平,Western blotting检测ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表达量,CCK-8法测定神经元的活性。结果:Ang Ⅱ(终浓度为100 nmol/L)引起神经元ROS水平升高;NaHS(50～200μmol/L)明显抑制Ang Ⅱ引起的神经元ROS水平升高,但单独给予NaHS并不影响神经元ROS水平;p-ERK1/2蛋白的抑制剂PD98059也能明显抑制Ang Ⅱ引起的神经元ROS水平的升高;适宜作用浓度的NaHS能够显著降低Ang Ⅱ引起的神经元p-ERK1/2蛋白表达。结论:H2S能够显著抑制Ang Ⅱ引起的神经元ROS水平升高,其作用机制与MAPK家族中p-ERK1/2蛋白的表达有关。H2S可能通过降低p-ERK1/2的表达量而产生抗氧化应激作用。
- 马红于海云于燕曹冬青黄莺金惠铭朱依纯卢宁
- 关键词：硫化氢血管紧张素II神经元活性氧簇
- 中枢活性氧介导尾加压素Ⅱ在自发性高血压大鼠的心血管效应被引量：2
- 2012年
- 本研究通过观察降低活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平是否能阻断中枢尾加压素II(urotensin II,UII)的心血管效应,以验证ROS介导中枢UII作用的设想。以自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)和Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为实验对象,首先采用免疫组化观察SHR和WKY大鼠中枢相应心血管相关核团UII受体的表达,进一步观察侧脑室注射UII后各组大鼠中枢相关核团的超氧阴离子水平,观察侧脑室注射UII对平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)的效应和给予超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)类似物Tempol或UII受体拮抗剂Urantide预处理对UII效应的影响。结果显示:(1)在SHR和WKY大鼠头端延髓腹外侧(rostral ventrolateral medulla,RVLM)及孤束核(nucleus tractus solitarii,NTS)均有UII受体免疫阳性细胞表达,且SHR大鼠表达水平高于WKY大鼠(P<0.05);(2)侧脑室注射UII(20nmol/10μL)引起血压升高(P<0.05),其中SHR大鼠上的升压效应大于WKY大鼠(P<0.05);(3)预先给予SHR大鼠Urantide(10nmol/10μL)或Tempol(15μmol/10μL)可阻断UII的升压效应;(4)在SHR大鼠侧脑室注射UII(20nmol/10μL/10min)后中枢RVLM超氧阴离子水平增加(P<0.05)。以上结果表明,UII可促进中枢ROS的产生,ROS介导了SHR大鼠中枢UII引起的心血管效应。
- 卢宁于海云王睿朱依纯
- 关键词：血压自发性高血压大鼠
- 活性氧簇介导血管紧张素Ⅱ对延髓神经元胞内游离Ca^(2+)水平的调节作用
- 2016年
- 目的:探讨活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)介导血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对延髓神经元胞内游离Ca^(2+)的调节作用及其机制。方法:原代培养延髓神经元;免疫荧光双标法鉴定培养神经元的特征;给予Ang Ⅱ处理后,用二氢乙啶荧光探针法测定神经元ROS水平;同时或单独给予Ang Ⅱ和NADPH氧化酶抑制剂apocynin或自由基清除剂TEMPOL后,Fura-2/AM钙瞬变法记录神经元胞内游离Ca^(2+)的水平;CCK-8法检测神经元活性。结果:原代培养的延髓神经元多数为谷氨酸阳性的神经元;Ang Ⅱ(5μmol/L)可在10 min内显著升高神经元ROS水平(P<0.01);给予Ang Ⅱ处理后延髓神经元胞内Ca^(2+)水平显著升高(P<0.01);给予apocynin/TEMPOL预处理后,Ang Ⅱ引起的延髓神经元胞内Ca^(2+)的升高则被抑制(P<0.05)。实验浓度的Ang Ⅱ对神经元无毒性作用。结论:ROS介导Ang Ⅱ诱导的延髓神经元胞内Ca^(2+)的升高作用,可能是Ang Ⅱ在中枢诱导氧化应激作用的潜在细胞内信号机制。
- 刘小妮曹冬青张娜娜陶然丁滢泂金惠铭卢宁
- 关键词：活性氧簇细胞内CA^2+
- 内源性H_2S抑制angiotensin Ⅱ引起的神经元活性氧水平的升高被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨内源性硫化氢(H2S)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)引起的延髓神经元活性氧(ROS)水平升高的作用及其可能机制。方法:首先培养原代延髓神经元;免疫荧光双标法鉴定神经元及内源性H2S生成酶胱硫醚β-合成酶(CBS)在神经元的表达;同时或单独给予Ang Ⅱ(1μmol/L)和丁酸钠(NaBu,一种CBS激动剂;100μmol/L、250μmol/L和500μmol/L),二氢乙啶荧光探针法测定ROS水平;采用总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒观察总SOD的活性;real-time PCR观察CBS mRNA的表达。结果:(1)原代培养的90%以上的细胞为神经元,Ang Ⅱ(1μmol/L)升高延髓神经元ROS水平;(2)Ang Ⅱ抑制神经元总SOD的活性;(3)荧光双标显示CBS在延髓神经元有表达,Ang Ⅱ可降低CBS mRNA的表达;(4)NaBu(250μmol/L和500μmol/L)显著抑制Ang Ⅱ引起的ROS水平的升高,且呈剂量依赖性效应。而NaBu单独对延髓神经元ROS水平作用不明显。结论:Ang Ⅱ引起的延髓神经元ROS水平升高至少部分是通过降低总SOD的活性和CBS mRNA的表达而实现的;而内源性H2S可能通过相反的作用抑制这一过程。
- 曹冬青刘小妮徐海艳陶然黄莺金惠铭王睿卢宁
- 关键词：内源性硫化氢神经元活性氧簇
