转基因生物新品种培育专项(2008ZX080072004)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 相关作者：张涌权富生刘琴吴月红王莉更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学宁夏大学南昌大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项山东省农业良种工程项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- DMEM与Ham's F-10培养基对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化影响比较研究
- 2022年
- 本研究旨在比较DMEM与Ham’s F-10两种培养基对牛骨骼肌卫星细胞体外培养过程中增殖与分化的影响。采用胶原酶和胰酶联用的方法分离骨骼肌卫星细胞后平均分为两组,分别采用DMEM和Ham’s F-10培养基对两组细胞进行培养,采用RT-PCR和免疫荧光方法对细胞进行鉴定,并观察比较两种培养基对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响。结论:本实验采用DMEM培养基培养7d后的牛骨骼肌卫星细胞不经过诱导分化能自行发生分化成肌管,而用Ham’s F-10培养基培养7d后的牛骨骼肌卫星细胞90%以上处于增殖状态,仅有少量细胞发生分化融合成肌管。本研究结果表明,Ham’s F-10比DMEM更有利于牛骨骼肌卫星细胞的增殖,抑制其分化。
- 郑艳玲郑艳玲张涌
- 关键词：骨骼肌卫星细胞DMEM分化
- 人胰岛素B、C、A链基因定点突变及表达载体的构建被引量：1
- 2012年
- 采用定点突变技术,将组成人胰岛素原基因的C、A两条肽链进行了PCR突变连接,构建了人胰岛素C、A突变基因。采用T-A法将PCR产物B、CA克隆到T载体,分别构建了中间体pHB和pHCA,其测序结果与GenBank公布的一致。应用BamH I和Sse8387 I对pHB和pHCA进行双酶切,然后将回收纯化的片段进行定向连接,构建了重组质粒pHBCA,酶切分析证实重组质粒pHBCA构建成功。
- 王莉
- 关键词：胰岛素基因定点突变
- 肉牛MSTN基因miRNA干扰载体的构建及干扰效果验证
- 2022年
- 构建肉牛MSTN基因的miRNA特异性干扰载体,并在肉牛骨骼肌卫星细胞中验证其有效性。设计4对肉牛MSTN基因特异性miRNA寡聚单链DNA序列,分别克隆在pcDNA^(TM) 6.2-GW/EmGFPmiR上,构建MSTN基因miRNA的干扰载体,转染肉牛骨骼肌卫星细胞,实时荧光定量PCR及Western blot分别用于检测MSTN基因mRNA及蛋白表达量,结果显示,成功构建了4个miRNA干扰载体miR-MSTN-1、miR-MSTN-2、miR-MSTN-3及miR-MSTN-4。4个载体均能有效下调MSTN mRNA及蛋白的表达,其中miR-MSTN-4的干扰效果最好。说明成功构建针对肉牛MSTN基因的miRNA特异性有效干扰载体,为通过MSTN基因的miRNA干扰生产高产肉性能肉牛的研究奠定了基础。
- 郑艳玲郑月茂郑月茂王勇胜王勇胜
- 关键词：MSTN基因MIRNA
- 秦川牛胎儿骨骼肌卫星细胞的分离培养被引量：5
- 2012年
- 【目的】探索胎牛骨骼肌卫星细胞分离、培养、鉴定及基因转染的方法。【方法】分别采用Ⅰ型胶原酶消化、Ⅰ型胶原酶与胰蛋白酶二步消化及链霉蛋白酶消化法对胎牛骨骼肌卫星细胞进行培养,比较了3种不同分离方法所得细胞数及其存活率的差异;利用差速贴壁法和Percoll密度梯度离心相结合的方法纯化骨骼肌卫星细胞,对纯化后的细胞进行myostatin基因RT-PCR以及结蛋白(Desmin)免疫细胞化学染色鉴定,最后通过电转染法对纯化的骨骼肌卫星细胞进行EGFP基因转染研究。【结果】3种消化培养方法中,以链霉蛋白酶消化法分离得到的胎牛骨骼肌卫星细胞数显著高于其它2种方法(P<0.05),但细胞存活率较低(P<0.05);而采用Ⅰ型胶原酶与胰蛋白酶二步消化法可以得到相对较高的细胞数及存活率。利用差速贴壁和Percoll密度梯度离心相结合的方法可以得到纯化的骨骼肌卫星细胞;电转染法适用于骨骼肌卫星细胞的基因转染。【结论】建立了胎牛骨骼肌卫星细胞分离、培养、纯化、鉴定及基因转染的方法,为通过转基因方法改良秦川牛产肉性能研究奠定了基础。
- 何玉龙吴月红权富生刘琴张涌
- 关键词：骨骼肌卫星细胞EGFP基因
