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国家自然科学基金(81170263)
作品数:
6
被引量:8
H指数:2
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仲人前
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作者
6篇
仲人前
4篇
熊怡淞
3篇
孙懿
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邓安梅
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俞娟
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李畅
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陈燕
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4篇
2013
2篇
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6
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miR-146a调节原发性胆汁性肝硬化患者单核细胞对LPS以及PolyI:C的反应
被引量:2
2013年
目的分析原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者单核细胞对内毒素(LPS)和多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(PolyI:C)刺激呈现出的高反应性是否与miR-146a有关。方法以10μg/rnl的LPS或PolyI:C分别刺激PBC患者和健康个体的外周血单核细胞,采用ELISA检测培养基内IL-1B、IL-6、TNF-d、IFN-a水平的变化,采用RT-PCR检测二者单核细胞内miR-146a、miR-21、let-7e、miR-155、miR-125b表达变化情况。同时通过改变单核细胞系THP-1细胞株内miR-146a的表达来研究miR-146a在单核细胞对LPS和PolyI:C刺激诱导活化中的调控作用。结果LPS或PolyI:C诱导PBC患者单核细胞释放炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-a和IFN-仅的能力显著强于健康个体单核细胞,但二者诱导PBC患者单核细胞表达miR-146a的能力弱于健康个体。在LPS或PolyI:C的刺激下,改变THP-1细胞内miR-146a可以调节部分炎症因子的释放。结论在接受到LPS或PolyI:C刺激后,PBC患者单核细胞内miR-146a表达受损是导致单核细胞过度活化的原因之一。
黄元兰
陈燕
孙懿
邓安梅
仲人前
关键词:
MIR-146A
原发性胆汁性肝硬化
固有免疫
载脂蛋白C3促进THP-1细胞向小鼠主动脉黏附
2013年
目的探讨载脂蛋白C3(APOC3)对THP-1细胞与小鼠主动脉黏附效应的影响。方法在无菌环境下应用外科显微技术分离C57BL/6小鼠主动脉,在体外给予APOC3刺激16h后与标记有CFSE荧光的单核细胞来源THP-1细胞黏附1h,观察黏附效应的变化,同时应用免疫组化方法检测血管黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达。结果给予APOC3刺激的主动脉与对照主动脉相比,与THP-1细胞的黏附效应增加,VCAM-1和ICAM-1表达上调,且前者比后者上调显著。结论载脂蛋白c3促进THP-1细胞向小鼠主动脉黏附。
徐耀忠
俞娟
熊怡淞
褚少朋
王惠民
仲人前
关键词:
主动脉
IL-22在氧化型低密度脂蛋白损伤内皮细胞中的调节作用
被引量:2
2012年
目的研究氧化型低密度脂蛋白通过IL-22对人脐静脉内皮细胞(CRL-1730)增殖的影响及机制,初步探讨IL-22与冠状动脉粥样硬化(AS)发病机制的关系。方法采用RT-PCR检测8例无明显冠状动脉狭窄的健康个体和30例AS患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-22mRNA的表达,ELISA法检测22例无明显冠状动脉狭窄的健康个体和79例AS患者血浆IL-22的浓度,分析IL-22的表达与AS患者冠状动脉最大狭窄程度及受累支数的关系。使用不同浓度氧化型低密度脂蛋白(OX—LDL)刺激CRL-1730细胞,24h后流式细胞术检测IL-22R1阳性细胞百分比。100μg/mlOX-LDL和20ng/mlIL-22共刺激CRL-1730细胞后,MTS法检测细胞的增殖能力,RT-PCR和ELISA检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。结果随着患者冠状动脉狭窄程度和受累支数的增加,AS患者外周血PBMC中IL-22mRNA和血浆中IL-22水平逐渐降低。OX-LDL呈剂量依赖性地上调CRL-1730细胞中IL-22R1的表达。OX-LDL刺激可以引起CRL-1730细胞增殖能力受损、表达bFGF的能力降低,IL-22可以部分逆转OX—LDL的此种效应。结论IL-22可能具有抗AS的生物学效应,这种生物学效应可能与其拮抗OX-LDL对CRL-1730细胞增殖能力和表达bFGF的抑制作用有关。
孙懿
韩志君
黄元兰
谷明莉
陈燕
胡志德
邓安梅
仲人前
关键词:
白细胞介素22
人脐静脉内皮细胞
氧化型低密度脂蛋白
Siglec-1小干扰慢病毒载体的构建和干扰效率验证
2012年
目的构建小干扰唾液酸黏附素(sialic acid—binding immunoglobulin—like lectin1,Siglec-1)的慢病毒载体,并体外筛选出具有干扰效果的病毒载体。方法利用软件设计3条Siglec-1siRNA片段,并克隆到慢病毒pGCSIL—GFP质粒载体,再与pHelper1.0载体和pHelper2.0载体共转染293T细胞,培养48h后,收集并浓缩富含慢病毒颗粒的细胞上清液。逐孔稀释法测定慢病毒滴度并转导原代培养的骨髓巨噬细胞(BMM),流式细胞术和实时荧光定量PCR筛选具有干扰效果的病毒载体。结果成功构建3个vshRNA质粒载体和一个阴性对照质粒载体,并经测序验证序列正确。包装的慢病毒滴度介于1×10^8-1×10^9TU/ml之间,适合体外转导及体内试验。体外转导BMM筛选出Lv-1能靶向抑制Siglec-1表达。结论成功构建并筛选出具有体外干扰效果的小干扰Siglec-1慢病毒载体,为体内应用该病毒载体进行基因敲除实验奠定了基础。
熊怡淞
李畅
孙懿
仲人前
关键词:
SIGLEC-1
小干扰RNA
慢病毒
动脉粥样硬化患者单个核细胞Siglec-1在促进CD4+和CD8+T淋巴细胞增殖和分泌细胞因子中的作用
被引量:2
2013年
目的探讨动脉粥样硬化(As)患者单个核细胞(PBMC)唾液酸黏附素(Sig1ec-1)在刺激白细胞分化抗原(CD)4+和CD8+T淋巴细胞活化增殖中的作用。方法实验研究。用磁珠分离长征医院18例急性冠状动脉综合征(ACS)和41例稳定型心绞痛(sA)患者及32名健康对照者CD14阳性PBMC后,用不同浓度α-干扰素(IFN—α,0、2、5、10ng/m1)刺激Sig1ec-1高表达,或用小干扰RNA或抗Sig1ec-1单抗靶向抑制Sig1ec-1表达,再与1名第三方健康献血者CD4+/CD8+T淋巴细胞共培养5d。然后,将实验分为11组:健康人CD14(1组),健康人CD14+IFN-α 5rig/m1(2组),健康人CD14+IFN-α5ng/m1+anti—Sig1ee-12μg/ml(3组),ACSCD14(4组),ACSCD14+siRNA干扰对照组(Mock,5组),ACSCD14+siRNA67940nmo]/L(6组),ACSCD14+anti—Sig]ee-12μg/m1(7组),SACD14(8组),SACD14+Mock(9组),SACD14+siRNA67940nmo1/L(10组),SACD14+anti—Sig]ec-12μ∥m1(11组);每组测定10份标本。用CCK-8活细胞计数试剂盒检测共培养T淋巴细胞增殖,用ELISA检测共培养T淋巴细胞分泌白细胞介素(IL)-2、IL-10、IL-12、1干扰素(IFN-γ)。测定各组PBMC刺激T淋巴细胞分泌细胞因子的计量数据用中位数(四分位数)表示,采用非参数秩和检验。结果靶向阻断Sig1ee一1后(6组),PBMC刺激CD4+T淋巴细胞及CD8+T淋巴细胞的增殖能力减弱,PBMC刺激CD4+T淋巴细胞分泌IL-2、IL-12、IFN-γ分别为67.00(62.50~87.30)、0.86(0~1.63)、47.82(37.60~56.67)pg/m1,且分泌能力减弱;IL-10为56.00(46.25~67.40)pg/m1,且分泌能力增强;未处理组(4组)上述细胞因子分别为213.70(187.50~275.30)、6.87(4.90~8.93)、114.90(89.50~167.40)、21.08(15.70~33.20)pg/m1,二者差异有统计学意义(U值分别为8.50、17.00、8.50、87
熊怡淞
李畅
俞娟
仲人前
关键词:
动脉粥样硬化
T淋巴细胞
细胞增殖
类风湿关节炎患者外周血单个核细胞唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-1的表达及与疾病活动度的关系
被引量:2
2013年
目的观察唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-1(Siglec-1)在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)上的表达水平,并探讨其与RA疾病活动度的关系。方法分别采用流式细胞术及实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测42例RA患者、28例骨关节炎患者和26名健康对照者外周血Siglec-1蛋白和mRNA表达,并将Siglec-1表达与28个关节疾病活动度评分(DAS28)以及超敏c反应蛋白(hs-CRP)作相关性分析。组间均数比较采用t检验,相关性分析采用Pearson相关分析。结果流式细胞仪检测发现,RA组Siglec-1阳性细胞占PBMCs比例为(15.2±7.6)%,明显高于骨关节炎组[(2.3±2.6)%]和健康对照组[(2.1±1.6)%,t值分别为8.615,8.661;P均〈0.01],并且表达Siglec-1的细胞主要为单核细胞;RA组Siglec-1mRNA的相对表达量为(3.4±1.5),明显高于骨关节炎组(1.2±0.4)和健康对照组(1.0±0.4)(£值分别为3.446,3.966;P均〈0.05)。而骨关节炎组和健康对照组之间Siglec-1蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P〉0.05)。此外,RA患者Siglec—1的表达与DAS28及hs-CRP均呈正相关(r值分别为0.89,0.48;P均〈0.01)。结论RA患者外周血PBMCs已经激活并高表达Siglec-1,Siglec-1可能作为无创性指标用于监测RA疾病活动度和炎症程度。
熊怡淞
程悦
吴艾霖
王艳艳
熊杰
仲人前
关键词:
膜糖蛋白类
免疫球蛋白类
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