为了探索兰花舌瓣形成的分子机制,本研究利用消减抑制杂交技术构建了莲瓣王(Cymbidium lianpanTang et Wang)捧瓣与舌瓣间的cDNA文库。对正向文库中随机挑选的147个阳性克隆测序,组装、拼接,找到37个唯一序列,其中包含25个单一序列和12个拼接序列。经同源性比对,这些EST分别归类于蛋白质折叠,结合、未知功能、应激反应、光合作用、转录调控、信号传导、生物合成、新陈代谢、MADS等10类。通过对MADS-box基因的系统进化树分析,可初步推测MADS-Contig1和MADS-Contig2属于A类基因中的SQUA-like亚家族基因。
为获得墨兰舌瓣总RNA最佳提取方法,以墨兰"南菊"舌瓣为材料,利用CTAB法、华舜植物叶总RNA提取试剂盒、Trizol法、天根RNAsimple总RNA提取试剂盒、Bioteke通用植物总RNA提取试剂盒、Bioteke通用植物总RNA提取试剂盒DNaseI过柱消化法、宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue及宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取舌瓣总RNA。通过RNA产率、纯度、电泳图谱和RT-PCR等分析,确立适用于墨兰舌瓣RNA分离的方法。结果表明:宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取的RNA除了28S,18S,5SrRNA清晰条带外,RNA的得率和纯度优于其他供试方法。RT-PCR结果进一步证实宝生物RNAiso-mate for Plant Tissue改良法提取的总RNA可用于进一步的分子生物学试验。
