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抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其表达产物体外抗肿瘤活性的研究被引量：6: 2008年; 目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗肿瘤细胞活性。方法:采用连接引物PCR法,构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因;采用常规分子生物学方法克隆并构建该人工融合基因及其原核表达系统;采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量;采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK;采用MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞增殖的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAlloferon-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗肿瘤作用比较。结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3。在IPTG诱导下,该原核重组表达系统可表达串联式目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK,其产量约为细菌总蛋白的30%。Ni-NTA和Sephadex G-50层析后,可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK。在25~100μg/ml剂量范围内,sAlloferon-1、sAlloferon-1-EK和rAlloferon-1、rAlloferon-1-EK均有明显抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞生长及增殖的效果(P<0.01),且四者抑制作用无明显差异(P>0.05)。结论:本研究成功构建了串联表达rAlloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗肿瘤细胞活性。; 孙琦孙爱华严杰; 关键词：抗感染药抗菌药抗肿瘤药肽类

不同Alloferon-1体外抗病毒效果: 2009年; Alloferon-1是Chernysh等于2002报道的一种由13个氨基酸组成、相对分子质量为1481．53的新型抗菌肽，动物实验证实该抗菌肽有较强的抗流感病毒和抗白血病细胞的活性。人工合成或重组表达的抗菌肽Magainin—Ⅱ的生物学活性与天然产物相同。本研究中构建了串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统得到rAlloferon-1-EK，同时人工合成了sAlloferon-1和sAlloferon-1-EK，比较重组及人工合成的3种Alloferon-1体外抗病毒活性，以期为抗病毒新药研发提供实验依据。; 孙琦孙爱华严杰; 关键词：MAGAININ 生物学活性相对分子质量

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浙江省教育厅科研计划(20050342)

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