国家自然科学基金(81041081)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- WT1蛋白CTL表位肽基因载体的构建与鉴定
- 2013年
- 目的构建WT1(Wilms’tumor gene 1)蛋白CTL表位肽基因载体,并检测其在293T细胞中的转录。方法设计分别含WT1-126肽、WT1-235肽以及这两种肽的基因载体,并加入Th通用表位Pan-DR-Th(PADRE),应用蛋白酶体切割软件PAProC和NetChop优化各表位和间隔序列,DNA疫苗在线预测工具DyNAVacS优化真核密码子后,人工合成核苷酸序列,分别插入pUC57载体,构建pUC57-WT1质粒,测序鉴定后,酶切回收各目的片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒,转染293T细胞,RT-PCR检测各目的基因在293T细胞中的转录。采用无内毒素质粒大量提取试剂盒提取各重组质粒,采用紫外分光光度计测定质粒的纯度和浓度。结果各重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证实构建正确;重组质粒携带的目的基因可在293T细胞中成功转录;各重组质粒DNA的纯度均合格,浓度在864.6～883.9μg/ml之间。结论成功构建了WT1蛋白CTL表位肽基因载体,并能在真核细胞中正常转录,为下一步在小鼠体内探讨特异性不同的CTLs群发挥抗肿瘤作用的机制奠定了基础。
- 彭霞樊卫平张凯苑晓娟刘玲玲王亮
- 关键词：细胞毒性T淋巴细胞表位肽DNA疫苗
- WT1-235肽体外抗肿瘤效应的研究被引量：3
- 2011年
- 目的探索WT1肽体外抗肿瘤效应。方法合成含HLA-A*0201锚定位点的9个氨基酸的WT1-235肽。PCR-SSP法筛选HLA-A*0201健康供者并鉴定细胞株HLA-A基因型别,RT-PCR鉴定靶细胞株WT1表达与否。体外分离HLA-A*0201型别的外周血单个核细胞(PBMCs),培养树突状细胞(DC),负载WT1肽并刺激活化同源淋巴细胞,进行体外CTLs杀伤靶细胞的细胞毒试验。结果荷肽DC活化的CTLs对高表达WT1的HLA-A*0201型别细胞株SW48的杀伤效应高于不表达WT1的HLA-A*0201型别的人T细胞,也高于表达WT1但非HLA-A*0201型别的K562细胞(P<0.05)。结论 WT235-242肽具有体外抗肿瘤效应并受MHC限制。
- 樊卫平谢艳云宋玉靖王宏伟郝彦琴苑晓娟
- 关键词：WT1肽疫苗树突状细胞CTL抗肿瘤
