国家科技重大专项(2012ZX10004-501)
- 作品数：20 被引量：54H指数：5
- 相关作者：魏强丛喆王卫陈霆刘克剑更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项协和青年科研基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用
- 目的 建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温...
- 鞠斌王卫丛喆姚南陈霆杜文达苏爱华高锡强魏强
- RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用被引量：2
- 2012年
- 目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温度和PCR反应最佳循环数等条件,建立rt基因PCR扩增方法;在此基础上将模板进行有限稀释,摸索rt基因单拷贝PCR扩增条件;使用该方法扩增感染猴体内RT-SHIV病毒rt基因,BioEdit软件进行基因序列分析。结果筛选得到一组巢式PCR引物,成功建立了RT-SHIV rt基因PCR扩增方法;当模板浓度为100 copies/μL时,扩增产物为单拷贝序列;测序结果显示RT-SHIV感染猴d266和d294血浆样本分别存在1处和6处氨基酸突变。结论本研究建立的全长rt基因单拷贝PCR扩增方法特异性好、灵敏度高、重复性强,可以应用于各类RT-SHIV病毒的全长rt基因分析。
- 鞠斌王卫丛喆姚南陈霆杜文达苏爱华高锡强魏强
- CXCR4嗜性SHIVKU-1病毒静脉感染中国恒河猴初步研究被引量：2
- 2013年
- 目的了解SHIVKU-1静脉途径感染中国恒河猴的感染特点及进展规律。方法两只健康中国恒河猴,静脉感染SHIVKU-1病毒,定期采样检测血浆病毒载量、CD4+/CD8+比值、CD4+T细胞绝对数变化和血清中抗SHIVKU-1特异性IgG抗体水平。多色流式技术分析外周血、腹股沟淋巴结和十二指肠粘膜固有层CD4+T淋巴细胞记忆细胞亚群变化。结果两只实验猴成功感染SHIVKU-1病毒,一直到感染后3个月均保持稳定水平的病毒载量。外周血CD4+T淋巴细胞下降明显,CD4+/CD8+T细胞比值严重倒置。CD4+Tcm细胞比例在经历了感染早期的下降后,大幅升高,尤其是外周血和淋巴结。CD4+Tem则在粘膜固有层中增加明显。结论 SHIVKU-1静脉途径成功感染了中国恒河猴,为SHIV/中国恒河猴疾病及评价模型的建立奠定了良好的基础,为今后使用此模型评价抗病毒药物或疫苗提供了条件。
- 丛喆蒋虹苏爱华王卫陈霆薛婧魏强
- 关键词：CXCR4中国恒河猴
- 屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的研究被引量：3
- 2013年
- 目的建立屎肠球菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法。方法根据屎肠球菌的ddl基因设计TaqMan荧光定量PCR特异的引物及探针,在多种常见致病菌及条件致病菌中检测其特异性;将目的基因克隆到pMD18-T载体中建立标准曲线,检测方法的灵敏度和稳定性;使用腹水模拟标本验证方法的应用性。结果在特异性评价中,除了阳性对照外其余菌株均未见特异性扩增曲线。建立屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线,确定本方法对质粒标准品的检测下限为20copy/管。通过对1.0×107、1.0×105和1.0×1033个浓度质粒标准品的重复检测,确定屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的组内变异系数为1.90%～3.91%;组间变异系数为1.52%～1.69%。应用屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法对含菌量为1.6×100～1.6×108cfu/mL浓度梯度的腹水模拟标本进行检测,其检测灵敏度为1.6×102cfu/mL。结论本研究建立了屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法。
- 金东于波叶长芸刘凯侯雪新孙渭歌徐建国李振军
- 关键词：屎肠球菌
- 健康中国恒河猴各淋巴组织中T淋巴细胞表型及分布被引量：4
- 2012年
- 试验旨在明确T淋巴细胞在中国恒河猴各组织中的表型与分布,为疾病模型研究提供基础数据。取外周血、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结及肠道组织,从中分离出淋巴细胞。使用流式细胞术检测分析各种表型的淋巴细胞在组织间的分布。结果表明,淋巴结中CD4+/CD8+T细胞比值高于外周血,肠道固有层中最低,三者差异显著。记忆性T细胞在外周血和肠道固有层T细胞中比重较大,而淋巴结中主要为幼稚T细胞。CD4+T细胞中中心记忆T细胞Tcm为主要亚群,而CD8+T细胞主要为效应记忆细胞Tem。外周血与肠道固有层中增殖T细胞比例相当,而淋巴结中T细胞增殖水平相对较低。各组织中CXCR4受体表达量普遍高于CCR5受体,其中肠道固有层CCR5受体表达水平最高。值得注意的是,有一小群表型CD3+CD4+CD8low的细胞仅在肠道固有层中存在,经分析其功能活性应高于肠道CD4单阳性T细胞。因此,测定了健康中国恒河猴各表型T淋巴细胞在多种淋巴组织中的基础数值,为相关模型研究奠定基础。
- 熊竞刘克剑吴芳新丛喆王卫陈霆魏强
- 关键词：中国恒河猴记忆T细胞KI67CCR5
- 非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株脉冲场凝胶电泳分析被引量：5
- 2013年
- 目的对国内不同宿主来源的非O157产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）分离株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析，以初步建立中国非O157STEC菌株的基础数据库，了解其分子流行病学特征。方法参照PulseNet非O157STEC的PFGE实验方法对76株非O157STEC分离株进行分析，并使用BioNumerics软件进行聚类。结果在PulseNet推荐的电泳参数和内切酶XbaI情况下，菌株酶切片段分布均匀，条带易于识别。76株非O157STEC分离株产生62种PFGE带型，初步聚类为A-M13个群，不同来源菌株的PFGE带型分布广泛，但均具有某些优势的PFGE聚类群。结论国内不同来源的非O157STEC呈高度多态性，PulseNet推荐的PFGE电泳参数和内切酶XbaI适用于中国非O157STEC菌株的分析。
- 金东赵爱兰白向宁孟琼于波袁雪娇熊衍文侯雪新李振军
- 关键词：脉冲场凝胶电泳分子分型
- SIVmac239病毒经不同途径感染恒河猴急性期CD4^+T细胞数量与其细胞表面CD95表达量的变化关系
- 2012年
- 目的研究SIVmac239病毒分别通过直肠(rectal infection:IR)及静脉(intravenous infection:IV)感染恒河猴,在感染急性期外周血CD4+T细胞数量与其细胞表面的死亡受体(CD95)表达量之间的变化关系。方法将SIVmac239经直肠及静脉途径各感染14只恒河猴。监测病毒载量、CD4+T淋巴细胞数量及CD4+/CD8+比值的变化,从而明确感染。同时,在感染急性期内9个时间点采集静脉血,并利用流式细胞术分析CD4+T细胞表面CD95的表达量。结果静脉组恒河猴CD95表达量于第2天开始升高,第7天达到最高,同时CD4+T淋巴细胞数降到最低。直肠组恒河猴也于感染后第2天开始升高,但第10天才达到最高值,CD4+T淋巴细胞数于第17天降到最低。同静脉组相比,直肠组CD95表达量增高及CD4+T细胞数降低均较晚出现,且其CD4+T细胞数量降至最低晚于CD95表达量达到峰值一周后出现。结论 SIVmac239经直肠及静脉感染恒河猴后,伴随CD4+T细胞表面CD95表达的升高,CD4+T细胞数量逐渐下降。但不同感染途径对CD4+T细胞表面CD95的表达量与CD4+T淋巴细胞数的变化不尽相同,这可能由于不同感染途径造成CD95在感染急性期CD4+T细胞数量降低中发挥的作用不同。
- 高锡强傅春燕薛婧王卫陈霆魏强
- 关键词：SIVCD4+T细胞病毒载量CD95恒河猴
- BALB/c小鼠和雪貂感染H7N9禽流感病毒后的肺组织动态病理学变化被引量：7
- 2014年
- 目的 了解用H7N9禽流感病毒分别感染BALB/c小鼠和雪貂后,其肺部动态病理改变,为临床诊断、治疗、预防及机制研究提供帮助.方法 BALB/c小鼠经鼻腔接种106EID50（50 μL）H7N9禽流感病毒后第1、2、3、5、7、14、28天分别安乐死2～3只小鼠;雪貂经鼻腔吸入接种106EID50（500 μL）H7N9禽流感病毒后第3、7、14、28天分别安乐死1只雪貂,分别观察动物的临床特征改变,肺组织的大体组织形态学变化,HE染色观察动态病理改变,免疫组化染色观察病毒分布及肺组织各种炎细胞的浸润情况.结果 感染病毒后的小鼠出现竖毛、嗜睡、死亡等表现,雪貂表现为打喷嚏、鼻腔分泌物、稀便、嗜睡等;大体观察小鼠与雪貂肺组织均可见到暗红色病灶;光镜观察小鼠与雪貂的肺组织均呈现坏死性支气管炎和渗出性间质性肺炎、肺泡炎.感染第2天开始出现炎性病变,7～9 d炎症病变最严重,14 d后逐渐修复吸收,28 d基本完全吸收; T、B淋巴细胞,巨噬细胞不同程度的表达增多,以T细胞增多为主,尤其是CD8＋ T细胞两种动物均大量表达.结论 H7N9禽流感病毒感染可引起BALB/c小鼠和雪貂肺组织急性支气管炎和肺炎,感染后7～9 d肺部炎症的组织病理学变化最严重,CD8＋T细胞明显增多,14 d后病灶逐渐吸收.该研究可为临床诊断、治疗、预防该病及进行疾病机制研究提供帮助.
- 邓巍李彦红朱华徐艳峰陈霆李枫棣鲍琳琳许黎黎黄澜吕琦袁静向志光高凯姚艳丰于品
- 关键词：BALBC小鼠肺组织病理学变化
- 雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型的建立被引量：8
- 2014年
- 目的建立雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型。方法A／Anhui／1／2013（H7N9）禽流感病毒经鼻吸入感染雪貂，观察动物临床症状和体征，上呼吸道排毒情况及组织病理学变化。结果雪貂感染后出现体重下降、活动减少以及打喷嚏的临床表现，上呼吸道、心脏、肝脏及嗅球可检测到活病毒，上呼吸道排毒的峰值出现在感染后的第3—5天。血清抗体滴度最高达到1280，外周血淋巴细胞数量减少、粒细胞数量增加。组织病理学显示动物肺脏呈局灶性间质性肺炎及肺泡炎改变，CT显示肺内片状阴影。结论成功建立雪貂感染H7N9禽流感病毒的动物模型，模型的建立为H7N9禽流感发病机制研究、药物及疫苗的评价奠定了实验基础。
- 邓巍许黎黎鲍琳琳朱华陈霆吕琦李枫棣袁静向志光高凯徐艳峰黄澜李彦红刘江宁姚艳丰于品秦川
- 关键词：动物
- 布鲁氏菌种及种内部分生物型快速PCR鉴定方法的建立及应用研究被引量：11
- 2013年
- 目的建立一步法PCR快速鉴定布鲁氏菌种及种内部分生物型。方法设计6对引物，建立一步法PCR反应，将布鲁氏菌6个种和种内某些生物型进行鉴定，应用该方法检测了27株布鲁氏菌参考菌株和239株临床分离的布鲁氏菌，并与生物学分型方法进行比较。结果通过一步法PCR能够将待检菌株准确的鉴定到布鲁氏菌种，对于猪种可以定位到生物型和疫苗株；对于牛种可以鉴定到牛种生物型1、3、4与2、5、6、7、9两组生物型；对于羊种可以鉴定到1与2、3两组生物型和羊种疫苗株。生物学分型方法和PCR方法准确鉴定到种水平的符合率分别为98．33％和100％。结论一步法PCR是一种快速、特异、简便而低费用的鉴定布鲁氏菌种的分子分型方法。
- 李振军侯雪新孙渭歌贾雪田国忠
- 关键词：布鲁氏菌聚合酶链反应
