国家自然科学基金(30660182) 作品数:4 被引量:9 H指数:2 相关作者: 娄远蕾 郭菲 谢安 刘玉霞 汪泱 更多>> 相关机构: 南昌大学第一附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江西省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 理学 更多>>
Lanthanum Chloride Inhibiting Expression of Inducible Nitric Oxide Synthase in RAW264.7 Macrophages Induced by Lipopolysaccharide 2007年 Nitric oxide(NO)and its reaction products were key players in the pathophysiology of sepsis and shock.The present study was designed to explore the effects of lanthanum chloride(LaCl3)on inducible nitric oxide synthase(iNOS)expression,at both gene and protein levels,in RAW264.7 macrophages induced by Lipopolysaccharide(LPS).Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR),immunofluorescence,and western blot were employed to measure iNOS gene expression,localization,and protein expression respectively.NO production in culture supernatants was detected by the nitrate reductase method.The results showed that LaCl3 significantly attenuated the iNOS gene and protein expression,as well as NO production in RAW264.7cells induced by LPS. 郭菲 娄远蕾 汪泱 谢安 李国辉关键词:氯化物 脂多糖 稀有金属 氯化镧对内毒素/脂多糖诱导巨噬细胞株一氧化氮合酶表达的抑制作用 被引量:2 2007年 目的了解氯化镧(LaCl_3)对内毒素/脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,并探讨其机制。方法将小鼠巨噬细胞株RAW 264.7分为空白对照组、LaCl_3组、LPS组和LaCl_3+LPS组。前3组细胞分别用常规培养液、含2.5μmol/L LaCl_3的培养液、含1 mg/L LPS的培养液培养24 h,LaCl_3+LPS组用含2.5μmol/L LaCl_3的培养液培养24 h后,换为含1 mg/L LPS的培养液培养24 h。采用免疫细胞化学染色法检测iNOS在各组细胞中的表达强度;蛋白质印迹法检测iNOS的蛋白表达水平;反转录-PCR测定iNOS的mRNA表达水平;硝酸还原酶法测定各组细胞培养上清液中一氧化氮(NO)含量。结果免疫细胞化学染色结果显示,iNOS主要分布于各组细胞的胞质中,空白对照组和LaCl_3组荧光强度极弱;LPS组荧光强度最强,阳性细胞百分率为44.4%,明显高于LaCl_3+LPS组(11.8%,P<0.05)。LPS组iNOS蛋白及其mRNA表达量和细胞培养上清液中NO含量均高于其余各组(P<0.05)。结论LaCl_3可在mRNA水平和蛋白水平抑制LPS诱导的iNOS过度表达,减少NO生成,提示LaCl_3能拮抗LPS诱导的iNOS过度活化。 娄远蕾 郭菲 汪泱 谢安 刘玉霞 李国辉关键词:镧 内毒素类 LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化(英文) 被引量:4 2008年 革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞(Mφ),细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P<0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P>0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P<0.05。②随着LPS浓度增加,TNFα分泌量逐渐升高,呈剂量依赖关系。但当LPS浓度达10μg/ml时,TNFα分泌量下降。结论LPS能够诱导Mφ胞膜表面TLR4表达和TNFα分泌升高,并且在一定浓度范围内呈量-效关系. 郭菲 汪泱 王共先 李国辉 胡靓关键词:TOLL样受体4 肿瘤坏死因子Α 稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响 被引量:3 2008年 目的探讨氯化镧(LaCl3)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠巨噬细胞(RAW264.7)分泌一氧化氮(nitric oxide,N0)的影响。方法RAW264.7细胞随机分成四组:空白对照组(培养基中不含LaCl3和LPS),氯化镧组(含LaCl32.5,5,10,20μmol/L培养24h)、氯化镧+LPS组(分别以含LaCl32.5、5、10、20μmol/L的培养基培养24h后,更换含LPS1mg/L的培养基继续培养24h)及LPS组(含LPS1mg/L的培养基培养24h)。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮(NO)的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52.82±12.60μmol/L与空白对照组(2.90±2.36μmol/L)和LaCl3组[(6.50±4.67μmol/L、9.52±4.47μmol/L、11.14±7.42μmol/L、6.74±2.00μmol/L]比较有显著性差异(P<0.05);LaCl3+LPS组NO的浓度分别为26.00±5.83μmol/L(2.5μmol/LLaCl3+LPS)、29.86±7.26μmol/L(5μmol/LLaCl3+LPS)、34.62±6.24μmol/L(10μmol/LLaCl3+LPS),与LPS组相比显著减少(P<0.05),20μmol/LLaCl3+LPS)组NO的产生为45.61±6.68μmol/L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。 娄远蕾 郭菲 汪泱 谢安 刘玉霞关键词:氯化镧 脂多糖 一氧化氮