广东省自然科学基金(96058)
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 相关作者：张积仁郑燕芳饶智国周惠屈良鹄更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学中山大学广州军区武汉总医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞免疫学特性影响的研究
- 2001年
- 目的 研究特异性抗HPV16E6核酶的转染对宫颈癌细胞免疫学特性的影响。方法 以脂质体法将抗HPV16E6 ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞 ,命名为CaSKi R、CaSKi P细胞。流式细胞仪分别检测 3种细胞HLA 1、HLA 2、B7 1和B7 2基因的表达 ,分析CaSKi细胞转染核酶后免疫学特性的变化。诱导制备NK、LAK、CD3AK和肿瘤细胞共激活杀伤细胞 ,检测各种免疫细胞对CaSKi R、CaSKi P、CaSKi细胞的杀伤效应。结果 CaSKi和CaSKi P细胞中HLA 2、B7 1、B7 2表达都很低 ,两者差异无显著性。CaSKi R中HLA 2、B7 1、B7 2表达率均明显升高。 3种细胞中HLA 1表达率都很高。NK、LAK、CD3AK细胞对CaSKi R细胞杀伤率显著高于CaSKi细胞 ,CaSKi、CaSKi R分别与rIL 2共激活杀伤细胞 (称CASKI和CASKI R)的杀伤活性无明显差别 ,对CaSKi R的杀伤活性高于CaSKi细胞。而各种免疫细胞对CaSKi P细胞的杀伤率与CaSKi细胞差异无显著性。结论 抗HPV16E6 ribozyme的导入能使宫颈癌CaSKi细胞易于被机体免疫系统识别杀伤 ,难于免疫逃避 ,但不能增强其免疫原性。
- 郑燕芳张积仁屈良鹄周惠
- 关键词：核酶子宫颈肿瘤宫颈癌
- 抗HPV16核酶对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响被引量：6
- 2002年
- 背景与目的:人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是宫颈癌最主要的致病因素,E6是主要的致癌基因之一;高危HPV基因型,如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件。而放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法。本研究旨在探讨抗HPV16E6核酶(ribozyme)对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响。方法:以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测3种细胞中E6基因的表达。用克隆形成试验检测3种细胞对放疗的敏感性,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测bcl-2、p53、bax蛋白表达。结果:点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交证实CaSKi-R中E6表达较CaSKi-P、CaSKi中明显降低。CaSKi-R细胞生长速度较CaSKi-P、CaSKi明显减慢(P<0.01);CaSKi-R细胞对X射线的敏感性较CaSKi-P、CaSKi明显增加,克隆形成率明显下降(P<0.05),CaSKi-R细胞照射前后的凋亡率较X射线照射后CaSKi-P、CaSKi明显增加(P<0.01);CaSKi-R细胞p53、bax蛋白表达较CaSKi-P、CaSKi明显升高,bcl-2明显减少(P<0.01)。结论:转染抗HPV16E6-ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,且对放射治疗的敏感性增加?
- 饶智国张积仁郑燕芳周惠屈良鹄
- 关键词：核酶子宫颈肿瘤放射增敏CASKI细胞
- 抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞化疗的影响被引量：2
- 2002年
- 目的研究抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞化疗敏感性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测三种细胞中E6基因的表达。用克隆形成试验检测3种细胞对化疗的敏感性,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率。结果点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P、CaSKi明显降低。CaSKi-R细胞的生长速率较CaSKi-P、CaSKi明显减慢,泰素作用后相对克隆形成率和凋亡率在3种细胞间亦无差异(P>0.05);顺铂作用后CaSKi-R细胞的相对克隆形成率较CaSKi-P、CaSKi明显下降(P<0.01),而凋亡率明显增加(P<0.01)。结论转染抗HPV16E6-ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,且对顺铂的敏感性增加,而对泰素的敏感性没有发生改变。
- 饶智国张积仁郑燕芳周惠屈良鹄
- 关键词：核酶化疗子宫颈肿瘤
- 抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响被引量：4
- 2004年
- 目的探讨特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别为CaSKi-R和CaSKi-P。测定CaSKi,CaSKi-R和CaSKi-P 3种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率和裸鼠体内成瘤性,RT-PCR检测3种细胞中VEGF的表达。结果CaSKi、CaSKi-P细胞生长速率和软琼脂克隆形成率相近,CaSKi-R细胞的生长速度和软琼脂克隆形成率明显降低。CaSKi 、CaSKi-P致瘤性无显著差异,而CaSKi-R致瘤性显著低于CaSKi(P<0.05)。RT-PCR检测CaSKi-R细胞的VEGF mRNA的表达水平明显低于CaSKi、CaSKi-P细胞的表达,而后者的VEGF mRNA的表达水平相近。结论特异性抗HPV16E6核酶的导入降低了宫颈癌CaSKi细胞的增殖和侵袭表型,可能与宫颈癌CaSKi细胞内VEGF的表达下降有关。
- 刘柯王丽莉郑燕芳张积仁
- 关键词：宫颈癌VEGF
- 特异性核酶诱导宫颈癌细胞凋亡的研究被引量：2
- 2001年
- 目的 :研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法 :设计特异性切割HPV16E6基因的核酶 ,构建抗HPV16E6核酶的真核表达质粒。以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞 ,命名为CaSKi-R ,CaSKi-P细胞。Northern杂交检测 3种细胞中E6基因的表达。流式细胞仪检测 3种细胞的凋亡率 ,并测定HPV16E6 ,c -myc ,bcl- 2 ,p5 3,fas等蛋白的表达。将 3种细胞在相差显微镜和荧光显微镜下观察 ,采用荧光 (Hoechst3334 2 )染色和TUNEL(TDT -mediateddUTPnickendlabelling) 2种方法测定细胞调亡。 结果 :Northern杂交证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P ,CaS -Ki明显降低。与CaSKi细胞相比 ,CaSKi-R细胞形态发生改变 ,凋亡率明显增高 ,出现凋亡峰 ,S期、G2 M期细胞百分率下降 ,而CaSKi-P细胞无此改变。CaSKi-R细胞表达HPV16E6 ,c -myc ,bcl- 2蛋白明显减少 ,而表达 p5 3明显增高 ;两者中fas蛋白的表达相近。CaSKi-P细胞中各基因的表达与CaSKi细胞无显著差异。结论 :抗HPV16E6 -Ribozyme的导入能诱导宫颈癌细胞凋亡 ,其原因可能在于病毒癌基因E6表达的降低 ,以及由此而引起的细胞内一系列基因表达的改变。
- 郑燕芳张积仁
- 关键词：核酶人乳头瘤病毒子宫颈肿瘤细胞凋亡
- 特异性核酶增强宫颈癌细胞对多种化疗药物的敏感度研究被引量：1
- 2011年
- 目的研究抗HPV16E6核酶(Ribozyme)在宫颈癌CaSKi细胞对多种化疗药物在体内外敏感度的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi、CaSKi-R、CaSKi-P细胞。MTT敏感实验检测多种化疗药物对三种细胞的抑制率;建立三种宫颈癌细胞移植瘤裸鼠模型,检测顺铂(DDP)对其抑制作用;透射电镜观察顺铂作用后的三种细胞形态。结果与CaSKi-P、CaSKi细胞比较,DDP、VCR、5-Fu、MMC对CaSKi-R细胞的抑制率明显增加(P<0.05),CaSKi-R细胞对DDP、VCR、5-Fu、MMC的敏感度明显增加;ADM、MTX、INF、Taxol、Ara-C、CTX对CaSKi-R细胞的抑制率无明显变化(P>0.05),敏感度无明显变化;顺铂作用后CaSKi-R、CaS-Ki-P和CaSKi细胞裸鼠移植瘤的重量分别为(0.09±0.03)g、(0.26±0.07)g和(0.26±0.05)g(P<0.05),抑制率分别为81.63%、62.32%和63.38%;顺铂作用后CaSKi-R细胞出现明显的凋亡改变,而CaSKi、CaSKi-P细胞不明显。结论抗HPV16E6-Ribozyme增加了CaSKi细胞对DDP、VCR、5-Fu、MMC的敏感度,抑制了宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的生长并增加对DDP的敏感度。
- 饶智国高建飞章必成张积仁
- 关键词：核酶人乳头瘤病毒药物敏感性宫颈癌裸鼠
- 抗人乳头瘤病毒16型E6基因核酶对宫颈癌CaSKi细胞生长和端粒酶活性的影响被引量：1
- 2004年
- 目的研究抗HPV16E6核酶(Ribozyme)对宫颈癌CaSKi细胞生长和端粒酶活性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R和CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,northern杂交检测三种细胞中E6基因的表达;细胞生长曲线检测细胞生长的改变;TRAP-Elisa法检测端粒酶活性。结果点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,northern杂交证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P和CaSKi明显降低。CaSKi-R细胞生长速度较CaSKi-P和CaSKi明显减慢(P<0.01);CaSKi,CaSKi-P和CaSKi-R三种细胞的端粒酶活性分别为0.89±0.14,0.90±0.11,0.36±0.06,转染了抗HPV16E6核酶的CaSKi-R的端粒酶活性的抑制率为59.55%。经统计学处理,CaSKi-R的端粒酶活性较CaSKi和CaSKi-P细胞明显下降(P<0.01)。结论转染抗HPV16E6-Ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,端粒酶活性较前明显下降。
- 饶智国张积仁郑燕芳
- 关键词：宫颈癌CASKI
- 抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞恶性表型的影响被引量：3
- 2002年
- 目的 :研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞恶性表型的影响。方法 :以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞 ,命名为CaSKi R ,CaSKi P细胞。测定CaSKi,CaSKi R ,CaSKi P 3种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率 ,流式细胞仪检测 3种细胞中HPV16E6,PCNA ,C erbB 2蛋白的表达。将裸鼠分为 3组 ,分别在皮下接种CaSKi,CaSKi R ,CaSKi P细胞 ,检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力 ;另取一组裸鼠 ,每只在右侧接种CaSKi细胞 ,左侧接种CaSKi R细胞 ,对比这两种细胞的致瘤性。分析特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞恶性表型的影响。结果 :CaSKi P ,CaSKi细胞生长速率相近 ,CaSKi R细胞的生长速度明显降低。CaSKi R细胞的软琼脂克隆形成率明显低于CaSKi和CaSKi P细胞。与CaSKi细胞相比 ,CaSKi R细胞表达HPV16E6,PCNA ,C erbB 2蛋白明显减少 ,而CaSKi P细胞无此改变。CaSKi和CaSKi P在裸鼠体内的致瘤性无显著差异 ,而CaSKi R的成瘤性显著低于CaSKi。结论 :抗HPV16E6核酶的导入能部分逆转宫颈癌CaSKi细胞株的恶性表型 ,其原因可能在于病毒癌基因E6表达的降低 ,以及由此而引起的PCNA ,C erbB
- 郑燕芳饶智国张积仁
- 关键词：核酶人乳头瘤病毒子宫颈肿瘤脂质体法
- 抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞端粒酶活性的影响及其机制被引量：2
- 2007年
- 目的:研究抗HPV16E6核酶(Ribozyme)对宫颈癌CaSKi细胞端粒酶活性的抑制及其机制。方法:以脂质体法将抗HPV16E6-Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Western blotting法检测3种细胞HPV16E6蛋白的表达,用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用RT-PCR法检测P53、c-myc、hTERT和hRT的表达。结果:点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Western blotting证实CaSKi-R中表达E6蛋白较CaSKi-P、CaSKi明显降低。CaSKi、CaSKi-P、CaSKi-R3种细胞的端粒酶活性值分别为(0.89±0.14)、(0.90±0.11)、(0.36±0.06),转染了抗HPV16E6核酶的CaSKi-R细胞端粒酶活性的抑制率为59.55%,与CaSKi、CaSKi-P细胞比较明显下降(P<0.01)。与CaSKi和CaSKi-P细胞相比,CaSKi-R细胞表达c-myc、hTERT mRNA明显减少,P53、hRT mRNA表达无明显变化。结论:抗HPV16E6核酶明显抑制CaSKi-R细胞端粒酶活性,其机制可能与HPV16的E6蛋白及c-myc、hTERT mRNA减少有关。
- 饶智国张积仁郑燕芳
- 关键词：核酶端粒酶子宫颈肿瘤
- 抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭力的影响被引量：1
- 2004年
- 目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别为CaSKi-R和CaSKi-P。观察细胞的生长状态,测定CaSKi,CaSKi-R和CaSKi-P3种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率、细胞侵袭力实验、裸鼠体内致瘤性,以及RT-PCR检测细胞中COX-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,同时,免疫组化检测3种细胞COX-2、VEGF抗原表达,分析特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭力的影响。结果CaSKi、CaSKi-P细胞生长速率、软琼脂克隆形成率、致瘤性和侵袭力相近,而CaSKi-R细胞的细胞生长速率、软琼脂克隆形成率、致瘤性和侵袭力与以上两种细胞相比却明显降低。RT-PCR检测CaSKi-R细胞的COX-2、VEGF表达水平也低于CaSKi、CaSKi-P细胞的表达。细胞免疫组化测定CaSKi、CaSKi-P和CaSKi-R细胞都有COX-2、VEGF抗原表达,而CaSKi-R细胞的抗原染色程度较弱。结论特异性抗HPV16E6核酶的导入降低了宫颈癌CaSKi细胞的增殖和侵袭表型,可能与宫颈癌CaSKi细胞内COX-2、VEGF的表达水平降低有关。
- 刘柯王莉丽孙芳郑燕芳张积仁
- 关键词：核酶侵袭力环氧合酶-2
