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激活素受体样激酶1促进人脐静脉内皮细胞增殖和迁徙: 2006年; 目的:研究激活素受体样激酶1(ALK1)对人脐静脉内皮细胞的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),RT-PCR分析ALK1和ALK5在HUVEC激活状态下表达的变化。脂质体转染pcDNA3.1+ALK1到HUVECs,流式细胞仪检测HUVECs增殖的改变,boyden小室检测ALK1对HUVECs迁徙的影响。结果:ALK1在HU-VEC安静状态高表达,ALK1能促进HUVECs的增殖和迁徙。结论:ALK1通过促进内皮细胞的增殖和迁徙在血管重塑中发挥作用。; 李斌唐仕波林少芬孟晶; 关键词：脐静脉内皮细胞细胞增殖细胞运动

利用血管模型体外模拟新生血管的形成被引量：1: 2005年; 目的:利用体外二维和三维血管模型,模拟血管的发生发展过程。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,将内皮细胞消化到细胞培养池内,利用无血清培养基培养细胞,观察内皮细胞逐渐形成二维血管的过程;利用Ⅰ型胶原蛋白构成三维系统,将内皮细胞置于其上培养,随着三维系统溶解成油井样结构,内皮细胞在其壁上形成三维血管样结构。结果:二维、三维血管模型顺利形成,从二维血管模型观察到:内皮细胞首先形成血管网样结构, 相互联系逐渐紧密,细胞之间界限逐渐消失,形成血管壁样结构,并从不规则形状到规则的圆形。三维血管模型随三维系统溶解形成,首先形成的血管样结构不紧密,经过重塑形成规整的环状。结论:血管的形成主要经过增殖、出芽、形成、重塑这4个阶段,从结构疏松到联系紧密,从不规整到规整的环状结构。; 李斌唐仕波马萍萍林少芬孟晶; 关键词：新生血管化生理性

人三维体外血管模型的构建被引量：5: 2005年; 目的利用HUVEC建立人体外三维血管模型。方法原代培养HUVEC,利用I型胶原蛋白建立三维系统,在上面培养HUVEC,随着胶原蛋白的降解,人体外三维血管模型逐渐形成,HE染色三维血管样结构。结果HUVEC成功培养,人体外三维血管模型顺利构建。结论利用I型胶原蛋白建立的三维系统,能成功构建人体外三维血管模型。; 李斌唐仕波林少芬肖迎孟晶; 关键词：HUVEC

HESR1基因在血管新生中作用的初步研究: 2005年; 目的研究转录因子HESR1在血管新生中的作用。方法检测内皮细胞激活状态HESR1表达的影响,克隆HESR1基因,转染到HUVEC,绿色荧光和PCR观察HESR1在内皮细胞的表达,流式细胞仪检测它对血管内皮细胞增殖,boyden小室检测对细胞迁移的影响,建体外二维血管模型,观察HESR1对血管形成的影响。结果内皮细胞激活状态HESR1的表达下降,HESR1基因能抑制内皮细胞的增殖和迁移,减少血管新生。结论HESR1基因通过抑制内皮细胞的增殖和迁移,使内皮细胞从激活状态转入安静状态,减少血管的形成,维持血管的稳定状态。; 李斌唐仕波林少芬肖迎孟晶; 关键词：新生血管

视网膜微血管内皮细胞培养及血管二维模型的建立被引量：5: 2006年; 目的培养人视网膜微血管内皮细胞,建立人视网膜血管体外二维模型。方法人视网膜血管内皮细胞在纤维连接蛋白包被的细胞培养池内,以无血清人内皮细胞培养基培养,形成二维血管模型。用辣根过氧化酶检测其通透性。部分血管模型加入5ng/ml的血管内皮生长因子培养,与无血管内皮生长因子培养形成的血管模型比较通透性的变化,观察血管内皮生长因子对血管通透性的影响。结果2～4d左右内皮细胞亚融合形成网状血管样结构,6d左右形成较完整的二维血管模型。血管内皮生长因子可增大血管的通透性,促进血管生成。结论用人内皮细胞培养基可成功培养人视网膜血管内皮细胞;利用细胞培养池和无血清人内皮细胞培养基培养,可建立标准的体外视网膜二维血管模型。; 李斌唐仕波林少芬孟晶; 关键词：细胞培养视网膜

发状分裂相关增强子-1对血管形成相关因子作用的实验研究被引量：2: 2006年; 目的研究发状分裂相关增强子1(HESR1)基因在血管形成和维持中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),构建PcDNA3.1+HESR1重组质粒、RNA干扰用pSIREN+HESR1质粒。脂质体将这两个质粒分别转染到HUVEC,并以转染空白质粒体作为对照。在HUVEC内分别高表达HESR1、下调HESR1的表达,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和免疫印迹法检测HUVEC内HESR1不同表达状态时血管内皮生长因子第2受体(KDR)、激活素受体样激酶1(ALK1)、血管生成因子1(Ang1)表达的改变。结果在HUVEC内高表达HESR1基因能下调KDR的表达,上调ALK1、Ang1的表达;当抑制HESR1基因,KDR的表达上调,ALK1、Ang1的表达下调。结论HESR1基因可调控HUVEC中KDR、ALK1、Ang1的表达,在血管的形成和维持中发挥关键作用。; 李斌唐仕波林少芬孟晶; 关键词：转录因子血管生成诱导剂血管内皮生长因子受体2

人类视网膜血管内皮细胞的培养与鉴定被引量：21: 2005年; 目的建立人视网膜血管内皮细胞培养的简便方法.方法胰蛋白酶消化供角膜移植术后留下的眼球,获得新鲜视网膜血管,用5%胎牛血清的人内皮细胞培养基培养(HE-SFM BGM),添加生长因子和胰岛素-转铁蛋白-硒添加物,并用纤维连接蛋白促进内皮细胞贴壁.第Ⅷ因子相关抗原鉴定内皮细胞.结果内皮细胞第1 d贴壁,第6 d形成克隆,第15 d细胞融合.传至7～8代转化为成纤维细胞.第Ⅷ因子相关抗原鉴定纯净度达95%.结论利用5%胎牛血清的人内皮细胞培养基,添加生长因子和胰岛素-转铁蛋白-硒添加物,并用纤维连接蛋白包被培养瓶,能简单有效地培养人视网膜血管内皮细胞.; 李斌唐仕波张革陈剑虹李宝金; 关键词：视网膜内皮细胞

体外转染人发状分裂相关增强子-1基因重塑视网膜新生血管的研究被引量：2: 2005年; 目的探讨体外转染人发状分裂相关增强子1(HESR-1)基因至视网膜血管内皮细胞并重塑视网膜新生血管的可行性。方法将HESR-1克隆至pcDNA3.1+载体内,组成pcDNA3.1+HESR-1重组质粒,原代培养人视网膜血管内皮细胞,实验中加入10ng血管内皮生长因子(VEGF)刺激内皮细胞生长,模拟体内新生血管内皮细胞激活状态,以脂质体转染pcDNA3.1+HESR-1重组质粒至培养的细胞内,应用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)第2受体(KDR)和紧密连接蛋白(occludin)表达的阳性率,采用免疫印迹法分析HESR-1对occludin表达的调控作用,体外建立视网膜血管模型,检测HESR-1对血管通透性的影响。结果HESR-1基因成功转染至血管内皮细胞,KDR表达阳性率下降,occludin表达增强。重塑的体外血管样结构通过HESR-1的作用能降低血管通透性。结论HESR-1基因能下调KDR的表达,增强occludin的表达,减少血管渗漏,达到重塑视网膜新生血管的目的;可为视网膜新生血管的治疗提供新的思路和方法。(中华眼科杂志,2005,41:1027-1032); 唐仕波李斌张革陈剑虹李宝金; 关键词：转录因子视网膜新生血管化

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广东省科技计划工业攻关项目(052001144A)