辽宁省自然科学基金(20062199)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：刘丹平李谌张正郭韬陈峻江更多>>
- 相关机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带低氧诱导因子1α^(mu)和人源化海肾绿色荧光蛋白双基因真核表达载体构建及其在HEK293A细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 背景:低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导成熟的血管生成,为各种细胞的成骨分化和成骨活动提供营养支持和代谢保证,促进骨愈合,但其真核表达载体的构建及表达却少见报道。目的:实验拟构建携带低氧诱导因子1αmu(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)目的蛋白和人源化海肾绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)的双基因真核表达载体,并将其转染HEK293A细胞,观测其在细胞中的表达。方法:利用PCR技术定点突变目的基因供体质粒pCMV6-XL5-HIF1α携带的人HIF1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸以及去掉其终止密码子,之后在基因序列前后添加新的酶切位点NotⅠ和PvuⅠ,酶切、测序检测突变情况,将正确突变的HIF1αmu定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1中。经测序鉴定、PmeⅠ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1电感受态细胞,通过hrGFP基因荧光表达检测转染情况。结果与结论:经基因测序证实,HIF-1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸均定点突变成丙氨酸,终止密码子成功去除。经酶切鉴定及测序证实,重组腺病毒表达载体构建成功。荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的HEK293A细胞内有大量绿色荧光表达证实通过Lipofectamine 2000途径可使得重组腺病毒载体成功转染HEK293A细胞。
- 张正李谌胡亮刘丹平
- 关键词：低氧诱导因子1Α腺病毒载体绿色荧光蛋白
- GFP示踪FLAG抗原表位标记BMP2转基因腺病毒穿梭质粒的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP2)目的蛋白和示踪绿色荧光蛋白(GFP)报告分子的腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1。方法采用PCR技术对pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因诱变,去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识别位点XhoⅠ。测序检测诱变情况,将诱变后的BMP2基因定向导入pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1,将质粒分别转染人胚肾细胞HEK293A和兔骨髓间充质干细胞(MSCs)。通过限制性内切酶酶切图谱分析该质粒;采用荧光显微镜检查和免疫组化SP法测定HEK293A中的GFP和MSCs中的BMP2,行重组腺病毒穿梭质粒鉴定。结果质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1经双酶切鉴定图谱分析构建正确,HEK293A、MSCs中均有GFP和BMP2表达。结论 pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1构建成功。
- 张正李谌陈峻江刘丹平
- 关键词：骨形态发生蛋白2重组腺病毒质粒抗原表位
- 经皮A1滑车松解术治疗糖尿病患者扳机指疗效观察
- 2011年
- 目的观察经皮A1滑车松解术治疗扳机指的疗效。方法采用经皮A1滑车松解术治疗糖尿病患者扳机指32例47指(观察组),采用类固醇局部注射治疗46例60指(对照组)。结果两组均顺利完成治疗。观察组发生术后感染1例,对照组未见并发症。观察组治愈45指、复发1指、无效1指,对照组分别为17、28、5指。两组治愈率相比P<0.05。结论经皮A1滑车松解术治疗糖尿病患者扳机指疗效优于类固醇激素局部注射。
- 张正刘丹平
- 关键词：扳机指糖尿病类固醇
- 骨髓间充质干细胞中突变型人低氧诱导因子1α真核表达载体的表达被引量：1
- 2011年
- 背景:转基因小鼠体内实验证实,重组的低氧诱导因子1α可以促进皮肤形态功能正常的血管新生。目的:构建能够在常氧条件下同时表达突变型低氧诱导因子1α目的蛋白和绿色荧光蛋白报告分子的新型腺病毒真核表达载体,并转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,检测该基因在细胞中的表达情况。方法:利用Lipofectamine2000介导将构建成功的重组腺病毒真核表达载体pAd-HIF1αmu-IRES-hrGFP-1转染HEK293A细胞,包装病毒,以最佳感染指数=50将重组腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,并设3个对照组,即阳性对照组:转染Ad-CMV-HIF1α-IRES-hrGFP-1;阴性对照组:转染Ad-CMV-IRES-hrGFP-1组;空白组:未转染病毒。结果与结论:①腺病毒载体成功转染HEK293A细胞,包装成功,细胞内有大量绿色荧光表达。②转染突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体的细胞在常氧条件下蛋白表达量明显高于转其他3组,3个对照组间差异无显著性意义(P>0.05)。提示突变型腺病毒真核表达载体Ad-HIF1α-IRES-hrGFP-1在HEK293A内成功包装;突变后低氧诱导因子1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达。
- 张男李谌郭韬刘丹平
- 关键词：低氧诱导因子1Α重组腺病毒载体骨髓间充质干细胞转染
- 骨组织工程技术修复骨缺损的研究进展
- 2010年
- 骨缺损的修复一直是骨科临床的难题,经过40余年的发展,骨组织工程最终确立了将骨再生相关分子、成骨活性细胞与支架材料三者复合,构建组织工程骨的基本模式,这种基因增强的组织工程技术使修复骨缺损的各种因素在时间和空间上达到了完美的结合。本文对应用骨组织工程技术促进骨缺损修复研究的近期进展予以综述。
- 靳云龙刘丹平李谌
- 关键词：骨缺损修复组织工程骨骨科临床相关分子活性细胞
