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排序方式：

荣昌猪白细胞介素-8基因cDNA的克隆及序列分析: 2007年; 从体外ConA刺激20 h的荣昌猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增,pMD18-T载体连接,常规转化后,进行酶切及序列测定,并进行鉴定。结果显示:猪IL-8基因与人、猕猴、牛、绵羊和家犬基因序列的同源性分别为81.3%、80.4%、88.9%、88.2%和85.3%。; 李雯郭万柱陈弟诗王晓玉; 关键词：荣昌猪白细胞介素-8 克隆

内江猪γ干扰素基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建被引量：9: 2007年; 将内江猪的外周血淋巴细胞在刀豆素(ConA)的刺激下培养24 h后,提取总RNA,应用一步法RT-PCR扩增γ干扰素(IFN-γ)cDNA,克隆到PMD18-T载体,命名为pMD-N-IFN-γ,测序结果证明克隆的cDNA全长603 bp,其ORF为501bp,编码166个氨基酸,与Genbank公布的IFN-γ比对,核苷酸同源性在99.4%以上,从而证实成功地克隆了内江猪IFN-γ基因。以pMD-N-IFN-γ质粒为模板亚克隆完整ORF区,连接到真核表达质粒pcDNA3.1(+)的EcoRI、XhoI两位点之间,经单双酶切鉴定,成功的构建了IFN-γ真核表达载体pcDNA3.1(+)-N-IFN-γs。; 黄亚平郭万柱李晓琪; 关键词：Γ干扰素克隆真核表达载体构建

荣昌猪白细胞介素-2基因的原核表达被引量：11: 2007年; 应用DNA重组技术,将克隆的荣昌猪白细胞介素-2基因亚克隆到PET-32a(+)表达载体上,构建重组表达载体。酶切鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用1 mM的HPTG诱导表达重组蛋白。RT-PCR方法检测表明白细胞介素-2基因得到了转录;对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳,发现在相对分子质量约37 Ku处有明显的蛋白质条带,而对照组无相应条带产生。最后用MTT法检测表达蛋白的生物学活性,表明所获得的重组蛋白具有较好的生物学活性,这为利用该蛋白及其基因研制高效抗病免疫制剂和基因工程疫苗奠定了良好的基础。; 张芳郭万柱吴华; 关键词：荣昌猪白细胞介素-2

荣昌猪白细胞介素-2和白细胞介素-4基因的克隆与序列分析被引量：4: 2007年; 将荣昌猪外周血淋巴细胞在刀豆素A（ConA）的刺激下培养24—70h后，提取总RNA，应用RT—PCR技术扩增白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-4（IL-4）cDNA，克隆到pMD18-T载体并测序。结果表明：克隆的IL-2cDNA全长为522个碱基，ORF为465个碱基，编码154个氨基酸。与GenBank公布的猪IL-2比对同源性均为99．8％；克隆的IL-4cDNA全长411个碱基，ORF为402个碱基，编码133个氨基酸，与GenBank公布的猪IL-4比对同源性均在98．0％以上，从而证实成功克隆了荣昌猪IL-2和IL-4基因cDNA。; 张芳郭万柱吴华; 关键词：荣昌猪 IL-2 IL-4 克隆

荣昌猪白细胞介素-10(IL-10)基因的克隆及原核表达被引量：5: 2007年; 根据GenBank收录的猪白细胞介素-10(PIL-10)设计1对特异性引物,经刀豆蛋白素A(conA)诱导猪淋巴细胞并提取总RNA,RT-PCR方法首次扩增出荣昌猪PIL-10的全长基因。序列分析表明PIL-10全长771 bp。设计1对引物亚克隆荣昌猪IL-10基因成熟蛋白编码基因(477 bp)。利用基因重组技术构建了PET32a(+)-PIL-10融合表达载体,经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE,重组菌的RT-PCR,Western blotting结果表明融合表达成功。; 李晓琪郭万柱黄亚平张丽; 关键词：荣昌猪白细胞介素-10 克隆原核表达

荣昌猪白细胞介素-6基因的克隆与序列分析被引量：2: 2007年; 根据GenBank收录的猪白细胞介素-6（PIL-6）设计1对特异性引物，经刀豆蛋白素A（Co—nA）诱导猪淋巴细胞并提取总RNA，用1it—PCR方法扩增出荣昌猪IL-6的cDNA。将扩增基因连接到PMD18-T质粒上，经酶切鉴定和序列测定证明该序列是PIL-6。序列分析结果表明：该基因cDNA全长741bp，开放阅读框由639个核苷酸组成，推测产生的编码产物由212个氨基酸组成。核酸序列分析比对发现：荣昌猪IL-6与GenBank已发表的IL-6序列的同源性较高，为99．8％。100％，氨基酸的同源性为99．5％-100％。对荣昌猪IL-6基因氨基酸的亲水性和蛋白表面可能性进行分析，表明其与IL-6基因氨基酸序列性质一致。; 吴华郭万柱张芳王新; 关键词：荣昌猪白细胞介素-6 克隆

Expressed sequence tags analysis of a liver tissue cDNA library from a highly inbred minipig line被引量：2: 2007年; 在人的身体执行有效生理的功能的背景猪的肝是为成功的肝 xenotransplantation 的前提。然而，猪和人之间的蛋白质差别仍然保持大部分未经勘探。因此，我们调查了高度生来的 minipig line.Methods 的肝表示侧面一个 cDNA 图书馆从生来的 Banna minipig 的肝织物被构造。200 随机选择的克隆被定序然后由序列的强风 programme.Results 排列分析了证明 44% 编码了以前已知的猪的基因。在 56% 未知基因之中， 72 克隆的序列与另外的种类的已知的基因有高类似，到人的类似主要超过 0.80。不在生物工学信息的国家中心显示出类似到基因的另外的 40 克隆是对生来的 Banna minipig 的肝特定的最新发现的、表示顺序标签。200 克隆中的 22 个有完整的长度编码区域， 38 个完全的 5' 终端序列和这些最新发现了的 140 完全的 3' 终端 sequences.Conclusion 表达式序列可以是为包含生理的特征和生来的猪的医药用法的研究的一个重要资源并且在 xenotransplantation 贡献匹配的研究。; CHEN You-nanTAN Wei-dongLU Yan-rongQIN Sheng-fangLI Sheng-fuZENG Yang-zhiBU HongLI You-pingCHENG Jing-qiu; 关键词：微型猪 CDNA文库表达序列标签

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国家重点基础研究发展计划(2004CCA01800)