国家教育部博士点基金(20060246073)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
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- RNAi抑制水通道蛋白5表达及其对细胞株黏蛋白合成及分泌的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察瞬时及稳定转染的RNA干扰法对水通道蛋白5（AQP5）的抑制效果,并观察AQP5抑制后细胞株黏蛋白合成、分泌的变化。方法用化学合成siRNA和质粒介导的shRNA分别转染SPC-A1细胞,并在转染后7d内的不同时点收集细胞,检测AQP5 mRNA和蛋白的变化。用G418筛选稳定转染细胞株,用Western blot法检测稳转株AQP5蛋白的抑制情况。用ELISA法检测AQP5抑制后各时点及稳定转染细胞株MUC5AC表达量的变化。结果siAQP5及shAQP5转染24h对AQP5 mRNA的抑制率分别为65%、79%。对蛋白的抑制在转染后第7d最明显,分别为93%,98%。稳转株（5株）对AQP5蛋白的抑制率为45%～64%。ELISA显示瞬转第5d,MUC5AC的合成和分泌分别增加57.9%、85.3%。在5株稳定转染细胞中（shAQP5-G1,G2,G3,A1,A5）MUC5AC的合成和分泌分别增加59%～156%及33%～166%。结论化学合成及质粒介导的RNA干扰法均能有效抑制SPC-A1细胞AQP5的表达,后者较前者更经济,抑制效应更优。与瞬时转染比较,稳定转染可长时间抑制特定基因的表达。AQP5抑制后,细胞株黏蛋白的合成、分泌增高。
- 陈智鸿高磊祝蓉白莉白春学
- 关键词：SHRNAAQP5黏蛋白稳定转染
- 水通道蛋白敲除对支气管哮喘小鼠气道黏蛋白谱表达的影响被引量：5
- 2009年
- 目的水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)敲除对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道黏蛋白(MUC)谱表达的影响。方法用卵白蛋白致敏和激发制备AQP5敲除鼠的哮喘高分泌模型。用苏木精-伊红染色观察气道及血管周围炎性细胞浸润。阿辛兰-过碘酸雪夫检测显示气道上皮细胞总黏液分泌,免疫组织化学检测气道上皮MUC5AC,MUC5B,MUC2的表达情况。结果哮喘小鼠气道和血管周围可见大量中性粒细胞,淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润,气道上皮有大量的紫红色中性黏液分布,其中以AQP5敲除鼠总黏液分布更多。免疫组织化学显示小鼠哮喘高分泌模型中MUC谱主要为MUC5AC和MUC5B,未见MUC2分布。与野生型哮喘小鼠比较,MUC5AC、MUC5B在AQP5敲除鼠中表达更丰富。结论AQP5基因缺失可能使小鼠气道对过敏原的应激性提高,从而促进黏液高分泌。
- 陈智鸿沈瑶董春玲高磊白春学
- 关键词：水通道蛋白黏液高分泌黏蛋白
