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鹿茸线粒体DNA的指纹鉴定研究被引量：15: 2013年; 目的通过鹿茸特异性引物鉴别和随机扩增多态DNA(RAPD)鉴别的比较,选择一种更简便的方法用于鉴别鹿茸。方法采用盐析法从梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸、市售鹿茸等样品中抽提线粒体DNA,并应用试剂盒进行纯化。进行特异性引物扩增和序列测定,同时进行随机扩增多态DNA扩增。结果梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸以及部分市售鹿茸经特异性引物扩增后均可在琼脂糖凝胶中显示313 bp片段,只是条带亮度不同。而其余市售鹿茸无扩增条带;随机扩增多态DNA不仅有效显示阳性与阴性的DNA扩增结果,而且对梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸的聚合酶链反应产物的差异,以不同的条带数目和条带亮度得以验证。结论随机扩增多态DNA鉴别鹿茸真伪的方法更准确快捷,通过随机扩增多态DNA扩增后主条带与梅花鹿茸或马鹿茸扩增的条带大小和亮度一致,则为正品;如不一致,则为《中国药典》规定外的鹿茸或其他混淆品。这种方法对于筛选、甄别市售动物中药材,特别是名贵中药具有广阔的应用前景。; 谷玉娟张丽华傅桂莲; 关键词：鹿茸特异性引物随机扩增多态DNA 聚合酶链反应

青葙子与其混淆品的超微指纹特征被引量：4: 2011年; 目的应用扫描电镜技术对青葙子与其混淆品进行了指纹特征研究。方法采用扫描电镜,对青葙子、鸡冠花子,反枝苋子分别在70倍、150倍、800倍电镜下进行对比研究。结果青葙子与其混淆品的超微指纹特征明显。结论该方法简便、快速、结果准确,可用于青葙子与其混淆品的鉴定。; 李洪宇周艳菊王明科张学利孔德新宋佳音李薇钟雪张丽华; 关键词：青葙子鸡冠花

鹿鞭线粒体DNA指纹鉴定被引量：2: 2011年; 目的探讨鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b基因部分序列片段特征,建立中药材鹿鞭敏感、特异的DNA分子标记学鉴定方法。方法碱变性法提取新鲜鹿鞭及牛鞭,采用引物设计软件PrimerPremier5.0对鹿鞭及牛鞭的细胞色素b基因序列分析,用于鉴定正品鹿鞭的特异性引物,经聚合酶链式反应(PCR)扩增,对鹿鞭进行DNA指纹鉴定。结果对鹿鞭进行mtDNA鉴定图谱显示,真品鹿鞭有306bp条带,伪品没有。结论用此方法对鹿鞭进行鉴定,可准确辨别正品与伪品。重现性、稳定性好,简便准确而可行。鹿鞭mtDNA具有特异性指纹特征,所得鹿鞭DNA指纹特征图谱可用于鹿鞭的鉴定。; 刘洋张丽华薄艳; 关键词：鹿鞭线粒体DNA PCR

林下参与栽培参扩增片段长度多态性指纹图谱鉴定被引量：23: 2013年; 目的探讨林下参与栽培参DNA直接扩增片段长度多态性(direct amplification of length polymorphisms,DALP)特征,建立林下参与栽培参直接扩增片段长度多态性指纹鉴定图谱。方法采用改进十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)法提取林下参和栽培参基因组DNA,设计6条随机引物,优化直接扩增片段长度多态性体系,进行PCR扩增。结果采用改进的十六烷基三甲基溴化胺法从人参样品中提取到约为19 kb左右的基因组DNA,其纯度在(1.80±0.23)之间,并获得林下参与栽培参的直接扩增片段长度多态性指纹图谱。结论获得的林下参直接扩增片段长度多态性图谱具有指纹特征,可以作为林下参与栽培参的特异鉴定方法。; 王帅王慧张丽华王淼李明成; 关键词：林下参指纹图谱

栽培参及其伪品的脱氧核糖核酸指纹特征研究被引量：4: 2013年; 目的探讨人参及其伪品的基因组特异性片段特征,建立人参与伪品的脱氧核糖核酸(DNA)指纹鉴定方法.方法采用CTAB-SDS结合法提取人参及伪品基因组DNA,紫外分光光度计检测DNA纯度,设计特异性引物,并使用该引物对人参及其伪品DNA进行PCR扩增.结果人参与伪品提取出的基因组DNA大于23 kb,其纯度为1.70±0.19,并且人参能扩增出194 bp大小的片段,而其伪品未能扩增出相应片段.结论人参DNA片段具有特异性指纹特征,可作为人参与其伪品鉴定的有效方法,方法简便,结果可靠.; 王慧王帅李明成张丽华王淼; 关键词：人参特异性引物

中药材川贝母DNA指纹鉴定研究被引量：31: 2011年; 目的建立川贝母DNA指纹鉴别方法。方法采用CTAB法从川贝母等样品中提取基因组DNA,对其5s rDNA区序列进行扩增并在此基础上展开了分子鉴定研究。经Primer Primer5.0引物设计软件设计川贝母的特异性引物,利用PCR技术对川贝母与其他品种的贝母进行鉴别比较。结果川贝母能扩增出274bp大小的片段,而其他贝母未能扩增出相应片段。结论川贝母DNA具有特异性指纹特征,可作为川贝母与其伪品鉴定的有效方法,该方法简便快速、结果可靠。; 谭莹张丽华李明成王冰梅; 关键词：川贝母特异性引物

梅花鹿鞭与伪品牛鞭细胞色素b DNA指纹鉴定被引量：7: 2010年; 目的探讨梅花鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cytb)基因特异性片段特征,建立梅花鹿鞭的DNA指纹鉴定方法。方法采用引物设计软件Primer Premier 5.0设计了用于鉴定梅花鹿鞭的特异性引物,用此引物对市售的梅花鹿鞭样本进行DNA指纹鉴定。结果梅花鹿鞭能扩增出306 bp大小的片段,而牛鞭未能扩增出相应片段。结论梅花鹿鞭DNA具有特异性指纹特征,所得梅花鹿鞭DNA指纹特征图谱可用于市售梅花鹿鞭的鉴定。; 刘洋杨明妍张丽华李明成王冰梅孙红霞; 关键词：伪品牛鞭线粒体细胞色素 CERVUS NIPPON CYTB

聚合酶链式反应偶联单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术用于鹿鞭线粒体DNA指纹的研究被引量：11: 2014年; 目的建立一种快速、简便、准确的分子生物学方法,用来鉴别鹿鞭真伪及品种。方法应用柱色谱法提取梅花鹿鞭、马鹿鞭、牛鞭以及市售鹿鞭线粒体DNA;根据GenBank中鹿类动物线粒体细胞色素b基因序列,设计一对引物用于线粒体DNA的聚合酶链式反应(PCR)特异性扩增;应用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对聚合酶链式反应产物进行单链构象多态分析(single strand conformation polymorphism,SSCP)。结果梅花鹿鞭、马鹿鞭以及部分市售鹿鞭可显示清晰且迁移率不同的片段;对照组伪品鹿鞭及部分市售鹿鞭无特异性显示。结论柱色谱法提取线粒体DNA所需时间短,DNA纯度高,DNA分子的破坏性较小,为特异性聚合酶链式反应扩增提供一级结构保证;单链构象多态分析法可以清晰显示正品梅花鹿鞭、马鹿鞭以及部分市售鹿鞭单链片段,其一级结构中的碱基差别为正品梅花鹿鞭、马鹿鞭的不同迁移率提供依据,也为药源市场鹿鞭的鉴别提供一种可以直接进行亚种间鉴别的快速、简便、准确的可行性方法。; 孙景昱张丽华傅桂莲李明成刘洋; 关键词：鹿鞭

中药材川贝母标准品特异DNA指纹片段的克隆及鉴定被引量：5: 2016年; 目的建立一种能够有效保存川贝母标准品DNA指纹片段的方法。方法采用自主研制的川贝母DNA检测试剂盒提取基因组DNA,体外进行川贝母特异DNA片段克隆,与载体结合并导入生物宿主细胞,通过宿主细胞自我复制产生大量川贝母特异DNA克隆,继而采用质粒提取试剂盒将质粒提取出来,应用PCR及酶切方法检查并鉴定插入片段是否正确。将携带正品川贝母特异DNA序列的菌落置-80℃冰柜保存,分别以1个月、2个月、3个月和6个月为时间点进行复苏,进行稳定性考察。结果转入细胞内的川贝母DNA克隆经PCR扩增后,所得到的琼脂糖凝胶电泳图谱条带清晰,并且进行多次实验结果均一致。4个时间点复苏后的菌落进行PCR扩增后,其琼脂糖凝胶电泳检测图谱中,条带明亮且清晰。结论采用分子克隆技术保存川贝母特异基因片段的方法是可行且有效的,并且稳定性良好,可作为建立中药DNA指纹鉴定数据库的有效依据,方法简单明了,且结果可靠。; 李萧涵李明成周亭亭于文静张丽华王冰梅; 关键词：川贝母分子克隆指纹特征

牛黄解毒丸红外指纹图谱的研究被引量：7: 2010年; 目的建立可用于鉴别牛黄解毒丸的红外指纹特征图谱。方法对所有样品采用统一的提取条件,采用丙酮提取并测试其提取物的红外指纹图谱。结果不同厂家多批次牛黄解毒丸具有独特而稳定的红外指纹特征图谱,并与伪品区别明显。结论经数据平均后的牛黄解毒丸的红外指纹特征图谱可以作为其质量控制和真伪鉴别的根据。; 李洪宇张丽华苑广信王明科; 关键词：牛黄解毒丸红外指纹图谱

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吉林省科技发展计划基金(20090906)

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