中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(10ykpy31)
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
- 相关作者：黄俊琪张林桂连张英可蔡燕更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第一医院中山医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表观遗传学在登革病毒感染中的研究进展被引量：2
- 2014年
- 登革热是世界上广泛流行的蚊媒病毒性热带疾病。关于登革病毒感染的病理与免疫机制至今尚未完全阐明,诸多报道显示表观遗传学在病毒感染中起重要作用,其中关于登革病毒也有一些报道。本文论述了表观遗传学在病毒感染及登革病毒感染中的研究进展。
- 章旭之张英可黄俊琪
- 关键词：登革病毒表观遗传MICRORNA
- DENV2感染外周血单个核细胞增加TNF-α基因启动子区域CpG位点的甲基化水平
- 2014年
- 目的:检测正常人外周血单个核细胞(PBMC)感染2型登革病毒(DENV2)后肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子区域CpG位点的甲基化水平。方法:采用亚硫酸氢盐测序PCR法检测DNA甲基化水平。结果:TNF-α基因启动子区域为-294 bp到+58 bp,覆盖11个散在CpG位点;PCR反应后取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析显示,扩增序列大小与理论预测相符合;PBMC感染DENV2 0 h和6 h在11个甲基化位点中有2个处于甲基化状态,感染12 h有6个甲基化位点甲基化。0 h、6 h和12 h的平均甲基化率分别为10.3%、12.1%和25.5%,且0 h和12 h及6 h和12 h的甲基化率差异有统计学意义。结论:PBMC感染DENV2后会引起TNF-α基因启动子区域的甲基化水平增加。
- 张英可张林齐一鸣黄俊琪
- 关键词：登革病毒DNA甲基化
- MiR-33a抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移被引量：5
- 2017年
- miR-33a参与许多肿瘤发展的调控。然而,其对肝癌的作用还未完全清楚。本研究探讨了miR-33a在肝癌细胞中的表达及其功能。实时荧光定量PCR显示,与永生化的正常肝细胞系LO2相比,miR-33a在SMMC-7721、Bel-7405、Hep3B细胞中表达量较高,在SK-Hep-1、HepG2、Huh7细胞中表达量较低。其中,在SMMC-7721中表达量最高,在Huh7中表达量最低。分别用miR-33a模拟物和抑制物转染表达量最高和最低的细胞系SMMC-7721和Huh7,实时荧光定量PCR显示,模拟物转染细胞后,36 h转染效率最高;cy3染色法显示,抑制物转染细胞后,各时间点被标记的细胞均大于60%;CCK-8法和Transwell法显示,miR-33a抑制SMMC-7721和Huh7细胞增殖、迁移和侵袭;Western印迹显示,miR-33a抑制SMMC-7721、Huh7细胞claudin-1表达,促进E-钙粘蛋白表达;balb/c裸鼠成瘤实验表明,皮下注射miR-33a拮抗剂能促进肿瘤生长。上述结果证明,miR-33a在不同的肝癌细胞系中表达水平高低不一,在SMMC-7721中最高,Huh7中最低;miR-33a可以抑制肝癌细胞增殖,并可能通过抑制claudin-1及促进E-钙粘蛋白表达,抑制上皮间质转化进程抑制肝癌细胞侵袭和迁移。
- 蔡燕黄俊琪
- 关键词：肝癌增殖迁移
- microRNA家族成员let-7e对人单核细胞系THP-1细胞活性的影响及机制研究被引量：2
- 2015年
- 目的：研究let-7e对单核细胞系THP-1细胞凋亡和细胞因子分泌的影响及其机制。方法免疫荧光法检测cy3标记的mimic 对照转染THP-1细胞转染率，qRT-PCR法检测let-7e mimic及对照、let-7e inhibitor及对照转染THP1-细胞后let-7e的表达；MTT法检测转染后THP-1细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot法检测let-7e靶基因IFI6（interferon alpha-inducible protein 6）、EZH2（enhancer of zeste homolog 2）、caspase-3的表达；转染48h 后THP-1细胞用LPS刺激2h收集细胞培养上清，细胞因子芯片法检测上清中炎性因子的表达。结果 miRNA模拟物可以转染THP-1细胞，转染率约为75％，转染 let-7e mimic 12h 、24 h、48 h 后THP-1细胞的 let-7e 表达倍数分别为8．551±0．365、83．893±15．941、38．858±2．743，转染 let-7e inhibitor 12 h、24 h、48 h后THP-1细胞的let-7e表达倍数分别为0．594±0．174、2．427±1．229、3．053±0．207；let-7e mimic转染组THP-1细胞活性升高、凋亡率降低；miranda数据库分析证实let-7e与EZH2、IFI6、caspase-3结合的mirSVR score 分别为－0．1608、－0．5693、－09．423，证实IFI6、EZH2、caspase-3可能是let-7e的靶基因；let7-e mimic转染组IFI6、EZH2、caspase-3表达都有所下降；let-7e mimic 转染组 CD154、粒细胞集落刺激因子（ G-CSF）、CD54、IL-13、IL-1RA和IL-23表达有所下降。结论 let-7e有抗THP-1细胞凋亡的作用，可影响LPS诱导的细胞因子的表达。 let-7e可能通过调节其靶基因caspase-3、IFI6、EZH2对THP-1细胞的生物学功能产生影响。
- 张林张英可桂连章旭之黄俊琪
- 关键词：THP-1细胞
- miR-106b的免疫调节及其与自噬和凋亡关系的研究进展被引量：1
- 2014年
- micro RNAs（mi RNAs）是一类长度为21~25个核苷酸的内源性非编码小RNAs,在转录后水平上负向调控基因的表达。micro RNA-106b（mi R-106b）作为mi RNAs的一员,其免疫调节功能可通过影响细胞因子和转录因子的表达和TGF-β信号通路来实现。此外,mi R-106b还影响细胞的自噬和凋亡途径。现就近年来mi R-106b的研究进展作一综述。
- 桂连黄俊琪
- 关键词：MI免疫调节自噬凋亡
- miR-106b及EZH2对HepG2细胞生长的影响及机制被引量：4
- 2017年
- 目的探讨miR-106b及核心亚基基因增强子的人同源基因2(EZH2)对HepG2细胞生长的影响及其作用机制。方法 qRT-PCR法检测不同肝癌细胞miR-106b的表达;用miR-106b抑制物(inhibitor)及模拟物(mimic)和siEZH2转染肝癌细胞,CCK8法检测细胞增殖,细胞凋亡用Annexin V-FITC/PI双染法和WB法检测凋亡蛋白-3(Caspase-3),生物信息学分析并用荧光素酶法证实miR-106b是否靶向结合EZH2。结果与永生化的肝细胞LO2相比,miR-106b在肝癌细胞中表达量增加;miR-106b mimic促进HepG2细胞增殖和抑制凋亡;miR-106b inhibitor能导致Caspase-3全长表达量减少和其活性片段表达量增加;siEZH2抑制HepG2细胞增殖和促进其凋亡,并且能导致Caspase-3全长表达量减少及其活性片段表达量增加。荧光素酶结果表明miR-106b并非直接靶向抑制EZH2,miR-106b促进EZH2的表达。结论抑制miR-106b和EZH2的表达都能有效抑制HepG2细胞增殖和促进其凋亡。
- 桂连张倩倩蔡燕邓小红黄俊琪
- 关键词：EZH2HEPG2
- 2型登革病毒诱导RAW264.7细胞凋亡的机制及凋亡对病毒复制的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:探讨2型登革病毒(DENV2)感染能否诱导RAW264.7细胞凋亡,并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法:用DENV2感染RAW264.7细胞,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测caspase-3和caspase-8活化片段的变化,比色法检测caspase-9活性变化,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,Z-VAD-FMK抑制细胞凋亡后以TCID50检测感染细胞上清病毒滴度。结果:DENV2感染RAW264.7细胞24 h、36 h及48 h后细胞活性受到抑制,免疫荧光检测有核固缩现象,流式细胞术检测发现病毒感染诱导了细胞凋亡,Western blotting检测发现活化caspase-3和caspase-8的表达增加,caspase-9活性也增加,JC-1染色发现病毒感染诱导RAW264.7细胞线粒体膜电位降低,用Z-VAD-FMK抑制凋亡后感染细胞上清病毒滴度增加。结论:登革病毒感染可以通过内、外源性途径诱导RAW264.7细胞发生凋亡;凋亡发生抑制了病毒的产生。
- 张林黄俊琪
- 关键词：登革病毒细胞凋亡细胞
- let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响被引量：1
- 2015年
- 目的研究let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响。方法生物信息学分析let-7e的靶基因并通过荧光素酶报告实验进行验证;用1μg/ml或10μg/ml LPS刺激PBMCs和原代单核细胞24、48和72 h后,ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的质量浓度,筛选出LPS最佳刺激时间和质量浓度;用let-7e mimic或阴性对照(NC)瞬时转染PBMCs和原代单核细胞24、36和48 h后,q RT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率;转染细胞经LPS刺激后,ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的质量浓度。结果 let-7e可能直接靶向抑制IL-10;1μg/ml LPS刺激细胞24 h即可产生较高水平的IL-10;瞬转let-7e mimic 24 h即可使细胞高表达let-7e;let-7e mimic组细胞培养上清中IL-10的质量浓度低于let-7e NC组。结论 let-7e可抑制PBMCs和原代单核细胞产生IL-10。
- 桂连黄俊琪
- 关键词：IL-10LPS
