中国博士后科学基金(20090450636)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 温度对血清中乙型肝炎病毒感染力的影响被引量：1
- 2011年
- 目的 探索温度对血清中乙型肝炎病毒（HBV）感染力的影响。 方法 将含有高浓度HBV DNA（1.33×108拷贝/ml）的HBV阳性血清分装于1.5 ml无菌离心管内，每管100 μl共23管，密封后各有5管置37、56、65 ℃恒温水浴箱内孵育，分别于0、30、60、120、600 min后各取出1管；各有4管放置在98 ℃恒温水浴箱孵育和沸水锅中，放置0、5、10、30 min后各取1管，进行HepG-2细胞感染试验，共孵育18 h后洗弃接种液加新鲜培养基，48 h后收集细胞，实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测HBV DNA，以0 min处理组为对照组。结果 HBV阳性血清在低热处理30、60、120、600 min后感染HepG-2细胞，细胞内HBV DNA拷贝数在37 ℃时分别是（4.85±1.71）×105、（3.85±1.76）×105、（1.67±0.67）×105、（7.86±1.03）×104拷贝/ml，56 ℃时分别是（4.01±0.16）×105、（9.77±0.97）×104、（6.36±0.65）×104、（5.05±0.24）×103拷贝/ml；65 ℃时60、120 min处理组感染细胞内HBV DNA拷贝数分别是（5.15±7.28）×103、（7.56±10.6）×102拷贝/ml，是对照组[（6.79±1.48）×105拷贝/ml]的10-2、10-3倍，不同温度处理HBV阳性血清后感染HepG-2细胞、细胞内HBV DNA的含量差异有统计学意义（F处理温度=104.4，P＜0.001），不同处理时间后的感染细胞内HBV DNA的含量差异有统计学意义（F处理时间=144.0，P＜0.001），温度和处理时间有交互作用（F处理时间＊处理温度=23.6，P＜0.001），高温处理时，98 ℃孵育10 min、煮沸5 min处理时感染细胞内HBV DNA拷贝数分别为（3.02±4.26）×102、（4.31±6.09）×102，比对照组[（6.79±1.48）×105拷贝/ml]下降10-3倍，98 ℃孵育30 min、煮沸10 min后感染细胞内6次检测均未检出HBV DNA。结论 离体血清HBV感染力在低热条件下相对稳定，相对高温条件下短时间即可使其感染力降低。
- 宋秀霞居丽雯卫国荣姜庆五
- 关键词：肝炎病毒乙型热力学
- HBV阳性血清体外感染HepG-2细胞方法建立
- 2012年
- 目的建立乙型肝炎病毒(HBV)阳性血清体外感染人肝癌细胞系HepG-2的方法。方法低温同步化处理HepG-2细胞后用高浓度HBV阳性血清与含有4%聚乙二醇的无血清伊格尔极限必需培养基(MEM)共孵育HepG-2细胞,设阴性对照组和空白对照组;18 h后加入含10%胎牛血清的MEM继续培养6 d,每隔24 h收集细胞和培养上清,荧光定量PCR检测HBV DNA,间接免疫荧光技术检测细胞内乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。结果 HBV阳性血清感染组HepG-2细胞内和培养上清中在感染后第1 d可检测到HBV DNA,分别为(16.04±7.99)×103、(8.84±3.97)×103 copies/mL,细胞内DNA含量在第2 d达到(3.51±1.86)×105 copies/mL,然后逐渐下降,在第4 d降到检测下限以下,而培养上清中病毒DNA在检测的时间内逐渐升高,在第6天达到(8.41±5.34)×105 cop-ies/mL;间接免疫荧光检测感染组细胞膜和胞浆中均有HBsAg表达;传代培养感染细胞后,在第1代细胞培养上清和细胞内均可检测到HBV DNA(3.58×105、7.34×105 copies/mL),第2代培养上清中可检测到少量HBV DNA(2.89×103 copies/mL),但细胞内检测到HBV DNA低于检测下限(896 copies/mL),第3代细胞的上清和细胞内均未检测到HBV DNA。结论 HBV阳性血清在一定条件下可以感染HepG-2细胞,病毒能在细胞内进行短期复制。
- 宋秀霞居丽雯卫国荣姜庆五
- 关键词：乙型肝炎病毒HEPG-2细胞体外感染
