辽宁省自然科学基金(201102051)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 解偶联蛋白2过表达张氏肝细胞的构建及其对线粒体膜电位和活性氧的影响被引量：3
- 2012年
- 目的 构建稳定过表达人解偶联蛋白2 （UCP2）的张氏肝细胞株,观察UCP2对线粒体膜电位（MMP）和活性氧（ROS）的作用. 方法 将含有人UCP2 cDNA全长的重组质粒（pcDNA3.1-hU CP2）转染张氏肝细胞系,pcDNA3.1空载体作为对照.Zeocin筛选稳定表达UCP2的细胞株,Western blot和免疫细胞化学鉴定UCP2蛋白表达.利用不同剂量UCP2抑制剂京尼平（25、50、100μmol/L）,预处理稳定表达UCP2的细胞株.荧光分光光度法检测MMP和ROS水平变化.数据分析用单因素方差分析和q检验（Newman-keuls法）,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 pcDNA3.1-hU CP2成功转染张氏肝细胞,UCP2相对表达量约为对照组的1.6倍.过表达细胞罗丹明123和2 ′,7 ′ -二氯氢化荧光素二脂荧光强度（分别为11.11±2.76和4.97±0.62）均明显低于正常对照组张氏肝细胞（分别为15.56±2.55和6.14±1.25,q值分别为4.80和3.35,P＜0.01和P＜ 0.05）和空载体对照组肝细胞（分别为16.11±2.93和6.23±1.13,q值分别为5.40和3.60,P＜0.01和P＜ 0.05）；空载体组上述两指标与正常对照组相比,差异均无统计学意义.京尼平低、中、高剂量组与过表达组相比,罗丹明123的荧光强度（分别为14.89±2.89,17.89±2.93,24.00±2.55,q值分别为4.08,7.33和13.93,P值均＜0.01）和2 ′,7 ′-二氯氢化荧光素二脂的荧光强度（分别为9.16±0.78,10.84±1.09, 11.83±1.25,q值分别为12.00,16.83和19.67,P值均＜0.01）均明显升高,并呈现剂量依赖性.结论 成功构建稳定过表达人U CP2的张氏肝细胞株,UCP2表达水平及活性变化可通过MMP和ROS影响线粒体功能.
- 关莉莉王耀锋宫德正袁博吴琼朱亮贾晓丽刘明川赵杰邹原
- 关键词：膜电位线粒体活性氧解偶联蛋白2京尼平
